ED 2 - Exploration des réponses immunitaires

Question 1

Citer les deux composants de l’immunité innée

Answer 1

• Composante cellulaire = phagocytes
  
  • PNN
  • Monocytes ☞ macrophages
  • ⊄ NK
• Composante humorale
  
  • Effecteurs du complément

❗️Eh oui ! L’immunité innée à, elle aussi, une composante humorale.❗️

Question 2

Temps d’installation de l’immunité selon son “type”

Answer 2

• Immunité innée : 0 à 12 h
• Immunité adaptative : 1 à 15 j

Question 3

Comment ?

1. Explorer les phagocytes ?
   
   • Citer les phagocytes
2. Explorer les NK ?
3. Explorer les ⊄ dendritiques ?
4. Explorer les cytokines ?
5. Explorer les facteurs du complément ?

Answer 3

1. Phagocytes : PNN, macrophage et monocytes par l’hémogramme (= NFS)
2. Cellules NK : par immunophénotypage CAR sur l’hémogramme ils sont indifférenciables des lymphocytes
3. Cellules dendritiques : phénotypage mais pas réalisé en routine
4. Cytokines
5. Facteurs du complément : 3 dosages possibles
   
   1. Dosage qualitatif : CH50 = [C]_sérum du patient nécessaire pour obtenir une lyse de 50% des GR_mouton. Quand le CH50 ↑ ☞ déficit immunitaire
   2. Dosage quantitatif : C3 et C4

Question 4

Quelles sont les marqueurs membrannaires spécifiques des NK, LT et LB ?

Answer 4

• NK : CD16 et CD56
• LT : CD3
• LB : CD19

Question 5

Quel est le ratio normal entre LT4/LT8

Answer 5

1/3

Question 6

Cytométrie de flux

• Utilité
• Indication quantitative
• Indication qualitative

Answer 6

UTILITÉ

• Les lymphocytes peuvent être comptés sur l’hémogramme (NFS)
• Cependant, on ne peut pas différencier LB et LT.
• On utilise donc la cytométrie de flux

INDICATION QUANTITATIVE

• Suivi des patients VIH ☞ doser les CD4
• Suivi des patients sous anti-CD20
  
  • Ex de 💊: Rituximab contre lymphomes
• Suivi des hémopathies ☞ doser la baisse des LB
• Suivi des MAI

INDICATION QUALITATIVE

• Étudier la prolifération lymphocytaire face à
  
  • un mitogène spécifique
    
    • Vaccin : tuberculine, anatoxine tétanique
    • Environnement : CMV, strep
  • un mitgogène polyclonal (= non spécifique)
    
    • Pour étudier la prolifération LT
      
      • ConA (Concanavaline)
      • PHA (Phytohémagglutinine A)
    • Pour étudier la prolifération LB
      
      • PWM (PokeWeed Mitogen)
• Méthode technique
  
  • Utilisation d’un marqueur fluorescent (CFSE) qui se répand dans le cytoplasme des lymphocytes “mères”
  • La Fluorescence est divisée par 2 à chaque division dans le cytoplasme des ⊄ filles

Question 7

Quel est le marqueur d’activation lymphocytaire ?

Quel est le marqueur de différenciation

Answer 7

• Marqueur d’activation lymphocytaire : HLA
• Marqueur de différenciation : CD45 (immaturité) et CD62 (adhérence = pour circuler)
  
  • LT naïf : CD45+/CD62+
  • LT central mémoire (TCM) ☞ ∈ organes lymphoïdes : CD45-/CD62+
  • LT effecteur mémoire (TEM) ☞ ∈ tissus périphériques : CD45-/CD62-

Question 8

Polarisation de la réponse T

Answer 8

La sous population lymphocytaire T qui prolifère dépend des cytokines produites par l’immunité innée

(image)

Question 9

Comment dose-t-on les Ac (d’une part) et les Ag (d’autre part) chez un patient ?

Answer 9

MÉTHODE ELISA

1. Activation de ⊄ en culture
2. Récolte du surnageant de culture après 24-48h
3. Dosage ELISA

DOSAGE DES Ac = ELISA INDIRECT

• Des Ag sont au fond des puits
• Les Ac se fixent dessus
• Lavage
• Ac IIaire avec ⚡️fluo

DOSAGE DES Ag = ELISA SANDWICH

• Des Ac sont au fond des puits
• Les Ag se fixent dessus
• Lavage
• Ac IIaire avec ⚡️fluo
• L’Ag est alors en sandwich entre 2 Ac (un Iaire et IIaire)

Question 10

Méthode ELISPOT

Answer 10

• Permet de doser les ⊄ productrices de cytokines
• Ces cellules baignent dans une “boite” tapissée d’Ac
• On les stimule avec des mitogènes ou des “agresseurs” ☞ production de cytokines (ex : IFNɣ)
• Ces cytokines colorent une petite partie de la plaque en se fixant sur les Ac => un ⚡️SPOT⚡️ se forme
• 1 spot = 1 cellule

Le nombre de cellules productrices de cytokines est alors compté