Exam 1

Question 1

Nomme étape production proteine

Answer 1

1.amplification ADN par PCR
2.de gestion enzymatique=coupure des liens avec des enzymes de restriction
3.clonage= ADN d’intérêt est inséré dans le plasmide
4.transformation bacterienne=insertion du plasmide dans une bactérie

Question 2

A quoi sert la technique PCR

Answer 2

-à amplifier et à sélectionner l’ADN d’interet( un gène en particulier)

Question 3

Nomme les 3 cycles du PCR

Answer 3

1. Denaturation= chauffage= brise pont-H

2.hybridation=refroidissement=ajout d’amorce

3.élongation= ajout de nucleotide

Cycle 2:
1.production de 4 molécule

Cycle 3:
1.production de 8 molécule
-c’est à ce cycle que la première ADN cible est créé

Question 4

Élément nécessaire à l’amplification en chaîne polymérisé

Answer 4

-une matrice d’ADN
-2 amorce
-un mélange des 4 nucleotides
-un ADN polymérase (taq)
-un tampon
-du mgcl2

Question 5

Rôle de l’amorce

Answer 5

1. Déterminé début/fin de la chaîne
   2.permet à l’enzyme de s’accrocher au brin

Question 6

Avantage du TAQ

Answer 6

-il est stable à haute température(ne se dénature pas)95 degré
-il agit longtmeps (1h)

Question 7

A la fin des cycles, y a t’il plus de copie d’ADN ciblé ou bien d’ADN pas encore ciblé

Answer 7

Il y a plus de copie ciblé

Question 8

Caractéristiques d’un plasmide

Answer 8

-ADN circulaire
-tres petit
-extra-chromosomique
-réplication autonome
-contient que quelque gènes(ex=gène de résistance aux antibiotiques)
-seulement dans quelques bactéries

Question 9

Composantes de bases d’un plasmide

Answer 9

1.origine de réplication
2.site de clonage multiple(endroit où on insère le gène)
3.un gène de selection(ex=résistance à l’antibiotique(AMPR))

Question 10

Qu’est ce qu’un enzyme de restriction

Answer 10

-enzyme qui coupe à un endroit précis
-forme des extrémités covalentes( extrémités à simple brin qui peuvent adhérer à d’autre extrémités)

Question 11

Qu’est ce qu’un bout franc

Answer 11

-extrémités qui n’est pas cohesives( pas de simple brin)

Question 12

Nomme les deux types de liaison coupé par l’enzyme

Answer 12

-pont H
-liaison covalente(phosphodiester)

Question 13

Rôle de l’ADN ligase

Answer 13

-lie deux extrémités cohesives ensemble (extrémistés qui ont été coupé par le meme enzyme de restriction)

-deux extrémités sont non cohésives sur la séquence de leur paire de bases ne sont pas complémentaires

Question 14

Qu’est ce que le clonage

Answer 14

-insertion de l’ADN amplifier dans le plasmide (devient un PLASMIDE RECOMBINANT)

Question 15

Explique ce qu’est l’étape de transformation bactérienne

Answer 15

-insertion d’une plasmide recombinant dans la bactérie

Question 16

Qu’est ce qu’un insert

Answer 16

Un gène sélectionné que nous voulons intégré dans un microorganisme

Question 17

Nomme les 3 techniques de recombinaison génétique chez les bactéries

Answer 17

1.transformation
2.conjugaison
3.transduction

Question 18

Qu’est ce qu’une bactérie compétente

Answer 18

C’est une bactérie qu’on a traité pour qu’elle soit capable d’accepter de l’ADN étranger(pour se faire, on cré des pores dans la membrane et l paroi)

Question 19

Dans le labo, on va insérer quoi ? Et dans quelle type de bactérie

Answer 19

Un plasmide dans la bactérie Escherichia coli DH5alpha

Question 20

Avantage de la bactérie utilisée pour notre laboratoire

Answer 20

-croissance rapide
-certaines endonucleases inactivés= impossibilité de couper le plasmide qu’on va insérer
-une véritable usine à plasmide

Question 21

Quelle est la technique inspiré de la transformation bactérienne que nous allons utiliser dans le labo?

Answer 21

-la méthode du choc thermique=glace/chaud/glace

-glace 1= diminue fluidité et devient plus collante
-chaud= moins collante et augmente fluidité et ouvres les pores de la paroi et de la membrane de la bactérie

-glace2= pores se referment, les phospholipides ne bougent plus, l’ADN entré ne peux plus ressortir

Question 22

Qu’est ce que ça change à une bactérie de faire de la transformation

Answer 22

-modifie les caractéristique d’une bactérie par l’absorption d’un ADN présent dans le milieu

Question 23

Explique c’est qu’est le criblage

Answer 23

-c’est une technique de double sélection
-on note la présence d’un plasmide recombinant (ou bien son absence)
-on note la présence d’un gène interrompu(ou rester intact)
-si le gène est intact (pas de plasmide) le produit est de couleur BLEU

-dans notre cas, on cherche alors les produits de couleur blanche(couleur qui montre qu’un plasmide a été ajouté )

Question 24

Qu’est ce qu’un facteur recombinant

Answer 24

-c’est un gène transmis qui change les caractéristiques du sujet à l’étude (ex=souris qui meurent)

Question 25

Explique la recombinaison génétique par conjugaison

Answer 25

-méthode sexuée des bactéries pour s’échanger leurs informations génétiques -pilus = agit comme un penis

Question 26

Explique recombinaison génétique par transduction

Answer 26

-transfert de matériel génétique par l’intermédiaire d’un vecteur viral(un virus) -on nomme le virus= BACTÉRIOPHAGE

Question 27

Pourquoi conserver les bactéries dans un milieu avec antibiotiques même après avoir obtenu nos colonies ?

Answer 27

-car sinon les bactéries éjecterait le plasmide quelle viennent d’acquérir pour ne pas conserver quelque chose qui ne leur sert pas

Question 28

A quoi sert l’étape de la miniprep

Answer 28

-elle sert à purifier l’ADN plasmidique

Question 29

En quoi consiste la technique de miniprep

Answer 29

-à extraire un petite quantité d’ADN plasmidique ayant subi une transformation

Question 30

Non de la technique de miniprep

Answer 30

-adsorption sur une membrane de gel de silice

Question 31

Étape de la miniprep

Answer 31

-lyse des cellules avec un detergent( il déstabilise la membrane de phospholipide) -NaOH(ajout brutal)= dénature les protéines, l’ADN génomique et l’ADN plasmidique= il y a formation de précipité -centrifugation avec tube de silice= les sels créer adhèrent par adsorption sur la silice. Les bactéries colle au paroi du tube -on lave ensuite les impuretés avec des Buffet, puis on les jetent -finalement, on élue les bactéries pour les recueillir et les mettre sur la glace

Question 32

En quoi consiste l’étape de digestion enzymatique

Answer 32

-coupure de l’ADN plasmidique purifié avec des enzymes de restrictions, puis analyse de cet ADN sur gel d’agarose

Question 33

Nomme les deux rôles des enzymes de restriction

Answer 33

1-clinage moléculaire 2-pour vérifier si le plasmide correspond à ce qui est attendu -taille -quantité -sens de l’insert

Question 34

Utilité des enzymes de restriction pour les bactéries

Answer 34

-elles sont le mécanisme de défense immunitaire des bactéries contre leur phages Comment ? -en méthylant certaines bases -en n’ayant aucun site de restriction possible

Question 35

Est ce que les deux brins doivent être méthylé pour servir de protection

Answer 35

-non, un seul brin suffit

Question 36

Quel est l’enzyme de restriction utilisé dans notre laboratoire.

Answer 36

-EcoRI

Question 37

Comment on appelle le processus lors duquel on coupe une seule fois le plasmide circulaire

Answer 37

-linearisation

Question 38

Comment peut on contrôler le sens de l’insert et s’assurer qu’il n’y aura qu’une seule possibilité

Answer 38

-en utilisant 2 enzymes de restrictions différentes qui forment des extrémités cohésives différentes

Question 39

Pourrait t’il y savoir plusieurs site de clonage sur un plasmide

Answer 39

-non sinon il serait briser en plusieurs segments

Question 40

Peut il y savoir plusieurs site de restriction sur un ADN GÉNOMIQUE

Answer 40

Oui, sans problème

Question 41

Est ce que plusieurs plasmide d’ADN recombinant peuvent être créer

Answer 41

Oui, si pas deux enzymes différentes