Fracionamento de Ácidos Nucleicos / Purificação de DNA Genômico - Fases ​

Question 1

Fase 1 - O que ocorre?

Answer 1

Lise Celular

Adição de Proteínas K → para proteger o DNA das nucleases

Question 2

Lise Celular - Como?

Answer 2

SDS e NaOH

Question 3

Fase 2 - O que ocorre?

Answer 3

Homogeinização no Vortex → para que todas as células tenham contato com o agente desnaturante.

Question 4

Fase 3 - O que ocorre?

Answer 4

Centrifugação → DNA / Proteínas Restantes → ficam no fundo do tubo.

Question 5

Fase 4 - O que ocorre?

Answer 5

Jogamos fora o que sobrou no topo → ficamos somente com o que está no fundo do tubo → e adicionamos Fenol-Cloroformio.

Question 6

Fase 4 - Ação do Clorofórmio

Answer 6

Remove os resíduos do fenol.

Question 7

Fase 5 - O que ocorre?

Answer 7

Vortex novamente → para que todas as proteínas restantes venham a ter contato com o fenol e sejam degradadas.

Question 8

Fase 6 - O que ocorre?

Answer 8

Centrifugação

Question 9

Fase 6 - Centrifugação

Sobrenadante → ?

Fundo → ?

Answer 9

Fase 6 - Centrifugação

Sobrenadante → clorofórmio + DNA

Fundo → fenol (hidrofóbico)

Question 10

Fase 7 - O que ocorre?

Answer 10

Adicionamos a parte de interesse (sobrenadante) em outro tubo → misturando com álcool → e centrifugamos → resultando na precipitação com a formação do pellet ao fundo.

Question 11

Fase 8 - O que ocorre?

Answer 11

Jogamos fora tudo no sobrenadante → e ressuspendemos o pellet (DNA).

Question 12

Ressuspensão do Pellet - Como? 2

Answer 12

Misturar o DNA com:

→ Água Bi-destilada (M.Q.)

→ EDTA → se quisermos guardar por muito tempo.
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