PCR - Ciclos → Adendos Flashcards
Temperatura Elevada (>90 ºC) - O que ocorre?
Separa a cadeia dupla de DNA em 2 filamentos → sendo este processo conhecido como “desnaturação”.
Quebra do duplo filamentos de DNA - Como ocorre? 2
Os 2 filamentos → são mantidos juntos → por ligações feitas por pontes de hidrogênio.
As moléculas de fosfato e desoxirribose → são mantidas juntas → por ligações covalentes.
Pontes de Hidrogênio - Característica
Por serem relativamente fracas → quebram-se a altas temperatura
Ligações Covalentes - Característica.
Por serem ligações mais fortes → permanecem intactas a altas temperatura.
Primers / Iniciadores - O que são?
Curtas sequências sintéticas de nucleotídeos (20 e 30 bases).
Primers / Iniciadores - O que ocorre?
Marcam as extremidades da sequência alvo.
Primers / Iniciadores - Numa reação de PCR:
São incluídos 2 primers → 1 para cada cadeia simples de DNA que foi produzida durante o passo da desnaturação.
Primers / Iniciadores - O que ocorre?
Se ligam → hibridizam com a sua sequência complementar → no inicio (extremidade) da sequência de DNA → marcando-a.
Temperatura de annealing ou hibridização:
Normalmente encontra-se entre → 50 ºC a 65 ºC.
Após a ligação dos primers às regiões complementares da cadeia simples do DNA - O que ocorre? 2
Temperatura → eleva-se aproximadamente à 72 ºC
Enzima Taq polimerase → alonga a fita de DNA
Ciclo da PCR - No final do 1º ciclo:
É formada 2 novas dupla fita de DNA idênticas à original (SUCESSIVAMENTE de 25 a 35 ciclos).
