Processo de Transformação Genética - Processos Químico / Físico Flashcards
Processos Químico / Físico - Em seguida → após realizar os procedimentos, fazemos: 3
Plaqueamento das Bactérias
Incubação das Bactérias
Seleção dos Clones Transformantes
Incubação das Bactérias
Bactérias semeadas → em temperatura e tempo controlado.
Incubação das Bactérias → Tempo 2
16h
Overnight (de um dia para o outro)
Seleção dos Clones Transformantes
Seleção → resistência ao antibiótico presente no meio de cultura da placa.
Clones Transformantes - O que são?
Bactérias resistentes a antibióticos que irão crescer no meio seletivo.
Células Transformadas → Resistentes a antibióticos porque:
Receberem um plasmídeo que trouxe a marca de resistência (amp / tet)
Após o procedimento de transformação genética:
Colocamos as bactérias em placas → semeamos elas.
Ao semear as bactérias:
As que crescem → ?
As que não crescem → ?
Ao semear as bactérias:
As que crescem → são somente as que tem resistência
As que não crescem → não tem resistência ao antibiótico
Após semear as bactérias e obter a colônia de bactérias resistentes à antibióticos:
Coletamos → com uma alça de plástico → uma porção da colônia de bactérias em um Erlenmeyer contendo um meio líquido com antibiótico.
Erlenmyer contendo Meio Líquido com Antibiótico - Importância
Se a bactéria for colocada em um meio sem antibiótico → a bactéria irá jogar fora / vomitar o plasmídeo
Erlenmyer contendo Meio Líquido com Antibiótico - Objetivo
Colocamos a bactéria no Erlenmeyer com o meio contendo antibiótico para que elas se proliferam → aumentando a quantidade de inserto.
Após colocar as bactérias em um meio contendo antibiótico e a sua proliferação:
Realizamos um processo de extração de DNA plasmidial.
