Western Blotting - Adendos ​

Question 1

Western Blotting - Objetivo

Answer 1

Análise da especificidade de anticorpo da proteína do agente infeccioso.

Question 2

Western Blotting - Técnica Necessária

Answer 2

SDS-PAGE

Question 3

Western Blotting - Importância da SDS-PAGE

Answer 3

Separar proteínas desnaturadas→ que irá permitir a migração → de acordo com suas diferentes mobilidades em um campo elétrico.

Question 4

Western Blotting - O que ocorre? 3

Answer 4

Bandas proteicas → são transferidas do gel para uma membrana nitrocelulose → onde são usados soro do paciente → para pesquisar anticorpos primários específicos → contra as proteínas virais na membrana.

Lavagem da membrana de nitrocelulose → para remover Ac 1º ligados inespecificamente.

Adição de Ac 2º marcado com fluorescência

Question 5

Ac 2º marcado com fluorescência - Importância

Answer 5

Em contato com enzima reveladora (peroxidase) → haverá fluorescência → que será detectada por filme radiográfico.

Question 6

Western Blotting - Uso Importante

Answer 6

Teste confirmatório para diagnóstico de infecção pelo HIV → Alta Especificidade e Alta Sensibilidade.
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