C6 Flashcards
Expérience de Griffith (rappel génétique)
• Des souris inoculées avec un mélange de pneumocoques S virulents tués par la chaleur (non pathogènes) et de pneumocoques R non virulents vivants (non pathogènes) meurent. De plus, des pneumocoques S virulents vivants sont isolés à nouveau de ces souris mortes
• Il semble que les débris (agent transformant) des pneumocoques S chauffés (non vivants) transforment des pneumocoques R vivants en forme S.
= transformation
Les protéines et les lipides n’ont aucun pouvoir de transformation. VRAI ou FAUX?
VRAI, c’est l’ADN
-La démonstration que l’ADN est l’agent transformant constituait la première fois une preuve que la substance responsable de l’hérédité (gènes) était l’ADN.
VRAI ou FAUX
VRAI
Transformation bactérienne
Processus dans lequel une bactérie receveuse absorbe de l’ADN nu libéré dans le milieu par la lyse, accidentelle ou provoquée, de bactéries donneuses.
Compétence bactérienne
Aptitude de certaines bactéries à absorber des fragments d’ADN libre et de les incorporer dans son génome.
Facteurs de compétence
récepteurs, nucléases, protéines liant l’ADN simple brin
Paramètres pouvant influencer la compétence:
- Espèce bactérienne
- Milieux de culture
- Phase de croissance
- Changement rapide de température
Étapes de la transformation bactérienne?
a) Adsorption de l’ADN (récepteur)
b) Entrée de l’ADN (simple brin)
c) Recombinaison homologue
d) Bactérie transformée (transformant ou recombinant)
L’ADN sous forme plasmidique sera introduit durant la
Ne sera jamais intégré
Deux possibilités suite à la transformation bactérienne, que ce passe-t-il avec le nouveau segement?
Soit la bactérie le gare ou l’expulse
Génie génétique, deux techniques pour faire entrer un segment dans l’ADN d’une bactérie?
- Induction de la compétence chez E. coli (bactérie naturellement non transformable) par traitement au chlorure de calcium [CaCl2] et d’un choc thermique
- Entrée forcée par la déstabilisation de la paroi par un choc électrique (électroporation)
La transformation bactérienne est utilisée en labo pour?
CLONAGE: De l’ADN de n’importe quelle origine peut être introduit dans des bactéries en l’insérant dans un plasmide avant transformation
Découverte de la conjugaison bactérienne par ?
Découverte de J. Lederberg et E. Tatum (1946)
Principe de l’expérience de Lederberg et Tatum?
Ils étalèrent soit environ 108 bactéries de la souche A ou de la souche B (groupes témoins), soit un mélange de bactéries des deux souches (groupe expérimental: le mélange est préalablement incubé pendant 4 à 5 heures dans un milieu riche) sur des boîtes contenant du milieu minimal (eau, sels minéraux, glucose et agar
Les deux bactéries doivent être vivantes pour que la technique fonctionne!
Quel technique?
La conjugaison bactérienne
Résultats de l’expérience de Lederberg et Tatum?
A) Groupes témoins •Aucune colonie n’apparaît sur les milieux ensemencés avec des bactéries de la souche A ou de la souche B (milieu minimal)
B) Groupe expérimental
• Environ 10 colonies deviennent visibles (croissance) sur le milieu ensemencé avec le mélange de bactéries de la souche A et de la souche B (fréquence: 101 / 108 = 10-7 = 1/10 000 000)
Conclusion de l’expérience de Lederberg et Tatum?
Ces colonies sont nécessairement prototrophes puisqu’elles sont capables de croître sur un milieu minimal sans supplément nutritionnel. Les nouvelles colonies sont des bactéries recombinantes résultant probablement d’un échange de matériel génétique entre les deux souches bactériennes.
Caractéristiques essentielles de la conjugaison bactérienne
1) Nécessite un contact physique entre les bactéries (B. Davis 1950)
2) Présence d’un facteur de fertilité (F) dans les bactéries donneuses (W. Hayes 1952)
3) Transfert linéaire de l’ADN (plasmide ou chromosome) de la bactérie donneuse dans la bactérie receveuse F- (E. Wollman et F. Jacob 1957)
Bactéries F- et F+?
- Bactéries receveuses: F- (sans facteur de fertilité)
- Bactéries donneuses: F+ (avec un facteur de fertilité F)
Bactéries donneuses: Hfr (haute fréquence de recombinants) ?
Les bactéries donneuses transferts des gènes chromosomiques avec une grande efficacité, mais ne transforment pas les bactéries receveuses en cellule F+.
Conjugaison avec F’ se nomme?
Sexduction