Cours 08 Flashcards
Initiation de la réplication.
1) Initiateurs agissant en trans reconnait des origines de réplication cis.
2) Hélicases réplicatives sont recrutées et chargées sur ADN simple brin.
Initiateurs agissant en trans.
- ORC chez eucaryotes.
- Orc1/Cdc6 chez Archea.
- DnaA chez bactéries.
Initiateurs agissant en Cis.
- Séquences +/- spécifiques chez eucaryotes.
- OriC chez Archea et bactéries.
Donnez des exemples d’hélicases réplications pour les eucaryotes et les procaryotes.
- Eucaryotes et Archaea : MCM.
- Procaryotes : DnaB.
OriC.
- Séquence hautement conservée chez les bactéries.
- Contient plusieurs sites d’interaction avec des protéines qui contrôlent l’initiation de la réplication.
- Sites d’interaction avec Fis et IHF.
- Séquence AT-riche : DUE.
Quelle est la séquence consensus pour DnaA?
Comprend 9 nucléotides et est appelée boîte DnaA.
Séquence DUE.
- A-T riche.
- Séquence ou la séparation des brins est initiée à OriC.
DnaA.
- Membre de la famille des AAA+.
- Activité régulée par l’interaction avec Adénine.
- Forme active = DnaA-ATP ; permet ouverture à OriC.
- ## ATP est converti en ADP par l’activité intrinsèque de DnaA.
DnaA-ADP
Presque toujours présente aux boîtes DnaA de haute affinité à OriC.
- Fait partie du complexe de pré-réplication
Trouver l’énoncé qui est faux à propos des origines de réplication.
a) La région OriC est présente chez les Archaea et les bactéries mais pas chez les eucaryotes.
b) L’hélicase réplicative chez les bactéries est semblable à DnaB d’E.coli, alors que chez les Archaea et les eucaryotes c’est MCM.
c) Séparation des brins à OriC est initiée dans l’élément DUE, une séquence A-T riche.
d) L’affirmation que la région OriC a une longueur de 245pb, est basée sur des expériences de clonage avec un fragment d’ADN portant la résistance à la kanamycine.
e) Aucune de ces réponses.
Est-ce qu’il y a des boîtes DnaA en dehors de OriC?
Oui
Est-ce que le mécanisme de régulation de DnaA est en fonction de la richesse?
Oui. En fonction de la richesse en ATP.
Trouver l’énoncé qui est faux à propos de l’initiation de la réplication à OriC.
a) Masse d’initiation est déterminée par la quantité de DnaA-ATP dans la cellule.
b) DnaA-ADP interagit avec les sites R de haute affinité dans OriC. Le complexe ainsi formé sert de plateforme pour la formation du complexe de pré-réplication.
c) Le binding de DnaA-ATP aux sites de faible affinité permet l’initiation de la réplication à OriC.
d) Dans la cellule, il y a toujours moins d’ATP que d’ADP. Cela est particulièrement vrai lorsque les cellules sont dans un milieu pauvre.
e) Aucune de ces réponses.
Nommez les éléments autres que DnaA participants à la réplication.
- DnaB, DnaC, DnaG, protéines de type histone, gyrase.
DnaC.
Permet de charger l’hélicase réplicative DnaB pour l’établissement de fourches de réplication.
DnaG.
Synthétise amorces d’ARN.
Protéines de type histone.
- IHF et FIS : participent à la formation du méga-complexe avec DnaA à OriC.
- Facilite la formation d’une courbure dans ADN.
Gyrase.
Introduit le surenroulement négatif dans l’ADN à OriC.
Facilite l’ouverture à DnaA.
Transcription divergente.
Facilite l’ouverture des brins d’ADN à OriC en générant du surenroulement négatif.
Comment les chercheurs ont été en mesure d’identifier le gène dnaA?
Mutants fast stop et slow stop ont été identifés.
–> Mutants thermosensibles dans des gènes codant pour protéines impliquées dans la réplication du chromosome.
Trouver l’énoncé qui est vrai à propos des facteurs contribuant à l’initiation de la réplication à OriC.
a) La gyrase et la transcription convergente permet de générer le surenroulement négatif nécessaire à l’ouverture des brins à OriC.
b) Dans un mutant dnaBTs, la réplication est arrêtée après un transfert à 42 degrés car DnaB est impliquée dans l’initiation de la réplication.
c) Dans un mutant dnaBTS, la réplication est arrêtée immédiatement après un transfert à 42 degrés car DnaA est impliquée dans l’initiation de la réplication.
e) Aucune de ces réponses.
Qu’est-ce qui se passe immédiatement après l’initiation de la réplication?
Séquestration d’OriC dans la membrane cytoplasmique.
Séquestration d’OriC dans la membrane cytoplasmique.
- Protéine SeqA s’attache aux séquences GAT méthylées à un seul brin ADN.
- 11 séquences GAT dans la région OriC.
- Suite à l’initiation à OriC, les 11 séquences GATc sont hémi-méthylées.
- Protéine SeqA peut interagir avec les séquences et séquestrer région OriC à l’intérieur de la membrane cytoplasmique
Qu’est-ce que fait la séquestration d’OriC dans la membrane cytoplasmique?
Empêche une nouvelle initiation de la réplication à OriC : région n’est plus disponible pour protéine DnaA.