Cours 10.2 - Dx Labo Infections

Question 1

<p>Nommez les phases dans le cheminement diagnostique en infectiologie</p>

Answer 1

<ul> <li>Phase pré-analytique</li> <li>Phase analytique</li> <li>Phase post-analytique</li></ul>

Question 2

<p>Décrire : Phase pré-analytique</p>

Answer 2

<ul> <li>Patient consulte avec des symptômes/signes d’une maladie infectieuse</li> <li>Diagnostic clinique tentatif</li> <li>Prescription de prélèvements de culture</li> <li>Prélèvements identifiés au nom du patient puis acheminés au laboratoire avec la demande d’analyses</li> <li>Réception des prélèvements au laboratoire</li></ul>

Question 3

<p>Décrire : Phase analytique</p>

Answer 3

<ul> <li>Examen direct sur le prélèvement</li> <li>Rapport partiel émis au médecin: interprétation</li> <li>Mise en culture du prélèvement</li> <li>Incubation des milieux ensemencés</li> <li>Lecture des milieux (le lendemain)</li> <li>Identification bactérienne</li> <li>Rapport partiel: interprétation</li> <li>Finalisation de l’identification</li></ul>

Question 4

<p>Décrire : Post-analytique</p>

Answer 4

<ul> <li>Émission du rapport final</li> <li>Interprétation finale du médecin</li></ul>

Question 5

<p>Nommez les raisons pour effectuer un examen direct (4)</p>

Answer 5

<ul> <li>Quantifier les globules blancs présents dans le prélèvement: ceci nous informe sur la réponse inflammatoire et la «purulence» de l’échantillon.</li> <li>Dans certains cas, exprimer en valeur relative la quantité de polynucléaires présents dans le prélèvement.</li> <li>Observation de micro-organismes pour poser un diagnostic présomptif: <ul> <li>bactéries</li> <li>éléments mycéliens (champignons)</li> <li>levure</li> <li>structures parasitaires</li> <li>inclusions virales</li> </ul> </li> <li>Évaluation de la qualité du prélèvement pour décider si le résultat final sera fiable</li></ul>

Question 6

<p>Quelle est la pertinence de faire :Sérum physiologique</p>

Answer 6

<ul> <li>permet d’observer la mobilité de certains micro-organismes</li> <li>permet d’évaluer rapidement les micro-organismes avec des formes particulières, ex.: levures</li></ul>

Question 7

<p>Quelle est la pertinence: Hydroxyde de potassium (KOH)</p>

Answer 7

<ul> <li>KOH 10 % digère la kératine</li> <li>utile pour diagnostiquer des éléments mycéliens (champignons) à partir de prélèvement <ul> <li>d’ongles</li> <li>peau</li> <li>cheveux</li> </ul> </li></ul>

Question 8

<p>Quelle est la pertinence : Iode</p>

Answer 8

<ul> <li>colore les noyaux et organelles cytoplasmiques</li> <li>utile pour colorer rapidement les selles d’un patient et diagnostiquer la présence de protozoaires (ex.: amibes)</li></ul>

Question 9

<p>Quelle est la pertinence : Encre de Chine</p>

Answer 9

<ul> <li>met en évidence la capsule entourant certains micro-organismes (ex.: <em>Cryptococcus</em>)</li> <li>moins utilisée depuis l’avènement des tests antigéniques (Section 4.1)</li></ul>

Question 10

<p>Quelle est la pertinence : Fond noir</p>

Answer 10

<ul> <li>utile pour mettre en évidence des micro-organismes mal visualisés en microscopie optique standard et qui se colore difficilement</li></ul>

<p>(ex.: spirochète)</p>

Question 11

<p>Quelle est le principe de la coloration de Gram</p>

Answer 11

<ul> <li>La teneur en lipide de la paroi cellulaire des bactéries est variable.</li> <li>Les parois pauvres en lipides retiennent plus le colorant cristal violet (Gram positif).</li> <li>Quand la paroi est riche en lipides, le cristal violet ne s’imprègne pas de façon permanente. Le décolorant le déloge (Gram négatif).</li></ul>

Question 12

<p>Quelle est le technique de la coloration de Gram?</p>

Answer 12

<ul> <li>étaler sur une lame une couche mince du prélèvement à colorer</li> <li>fixer à la chaleur</li> <li>cristal violet (1 minute)</li> <li>laver</li> <li>iode (1 minute) pour bien fixer le cristal violet</li> <li>décolorer quelques secondes à l’acétone alcool</li> <li>laver</li> <li>safranine (1 minute)</li> <li>laver, assécher</li> <li>lire au microscope</li></ul>

Question 13

<p>Comment interpréter la coloration de Gram si la bactérie est bleue?</p>

Answer 13

<ul> <li>Le cristal violet n’a pas été décoloré par l’acétone alcool: la contre-coloration à la safranine (rose) a été inefficace.</li> <li>La couleur finale de la bactérie est bleue ce qui implique une paroi pauvre en lipide: bactérie Gram positif (ex.: <em>Staphylococcus</em>). </li></ul>

Question 14

<p>Comment interpréter la coloration de Gram si la bactérie est rose?</p>

Answer 14

<ul> <li>La paroi est riche en lipides.</li> <li>Le cristal violet est facilement libéré de la paroi par le décolorant.</li> <li>La contre-coloration avec la safranine est possible car la paroi est libre de colorant: bactérie Gram négative (ex.: <em>Escherichia coli</em>).</li></ul>

Question 15

<p>Quelle est l'utilité de la coloration de Gram?</p>

Answer 15

<ul> <li>Permet de reconnaître rapidement le ou les bactéries possiblement pathogènes présentes dans le prélèvement et d’en informer rapidement le clinicien.</li> <li>Permet d’évaluer la présence ou l’absence de flore normale quand le prélèvement provient d’un site non stérile.</li> <li>Permet d’évaluer la réponse inflammatoire car les globules blancs sont colorés dans le processus.</li> <li>Permet de quantifier de façon relative les polynucléaires versus les cellules mononucléées. Ceci aide dans certains cas à distinguer les infections bactériennes des infections virales.</li></ul>

Question 16

<p>Quel est le principe de la coloration de Ziehl-Neelsen</p>

Answer 16

<ul> <li>La paroi de certains micro-organismes est épaisse et cireuse et ne se colore pas facilement.</li> <li>Une fois les parois colorées par contre elles résistent à la décoloration par un solvant tel l’acide-alcool.</li> <li>Ces bactéries sont appelées par conséquent «bacilles acido-alcoolo résistants» ou B.A.A.R.</li></ul>

Question 17

<p>Quelle est la technique de la coloration de Ziehl-Neelsen?</p>

Answer 17

<ul> <li>préparer une lame à partir du prélèvement comme la coloration de Gram</li> <li>«carbol fuchsin»</li> <li>laver</li> <li>acide-alcool</li> <li>laver</li> <li>bleu de méthylène</li> <li>laver, assécher</li> <li>lire au microscope</li></ul>

Question 18

<p>Comment interpréter la coloration de Ziehl-Neelsen si la bactérie est rose?</p>

Answer 18

<ul> <li>La paroi épaisse et cireuse a capté le premier colorant de la coloration de Ziehl-Neelsen («carbol fuchsin») et a résisté au décolorant.</li> <li>La contre-coloration au bleu de méthylène s’est avérée inefficace.</li> <li>La couleur finale est rose.</li> <li>Il s’agit d’un bacille acido-alcoolo résistant (BAAR) ex.: mycobactéries.</li></ul>

Question 19

<p>Comment interpréter la coloration de Ziehl-Neelsen si la bactérie est bleue?</p>

Answer 19

<ul> <li>La paroi plus mince de la bactérie, moins imperméable que dans le cas précédent, a pris le «carbol fuchsin» (rose) mais n’a pas résisté au décolorant.</li> <li>La contre-coloration avec le bleu de méthylène a été possible.</li> <li>La couleur finale est bleue.</li> <li>Il ne s’agit pas d’un bacille acido-alcoolo résistant.</li></ul>

Question 20

<p>Quelle est l'utilité de la coloration Ziehl-Neelsen?</p>

Answer 20

<ul> <li>Permet l’identification présomptive des mycobactéries sans pouvoir les identifier à l’espèce.</li> <li>D’autres germes sont des B.A.A.R., ex.: <em>Nocardia</em></li></ul>

Question 21

<p>Nommez les caractéristiques macroscopiques des bactéries (4)</p>

Answer 21

<ul> <li>forme de la colonie</li> <li>couleur de la colonie</li> <li>grosseur de la colonie</li> <li>présence ou non d’hémolyse autour de la colonie</li></ul>

Question 22

<p>Lors d'une identification préliminaire, quel est l'aspect macroscopique d'un staphylocoque?</p>

Answer 22

<p>grosse colonie convexe, jaune, hémolyse Bêta (complète)</p>

Question 23

<p>Lors d'une identification préliminaire, quel est l'aspect macroscopique d'un streptocoque?</p>

Answer 23

<p>petite colonie convexe, translucide, hémolyse Bêta large</p>

Question 24

<p>Lors d'une identification préliminaire, quel est l'aspect macroscopique d'un pneumocoque?</p>

Answer 24

<p>colonie plate, ombiliquée, translucide, hémolyse alpha (incomplète - aspect verdâtre)</p>

Question 25

<p>Lors d'une identification préliminaire, quel est l'aspect macroscopique d'un entérobactérie?</p>

Answer 25

<p>colonie surélevée, semi-opaque, grise</p>

Question 26

<p>Lors d'une identification préliminaire, quel est l'aspect macroscopique d'un pseudomonas?</p>

Answer 26

<p>colonie plate, opaque, verdâtre, odeur fruitée</p>

Question 27

<p>Nommez les sites normalement stériles.</p>

Answer 27

<ul> <li>Le sang et tous les liquides biologiques tels: <ul> <li>liquide céphalo-rachidien</li> <li>liquide synovial</li> <li>liquide pleural</li> </ul> </li></ul>

Question 28

<p>Pour prélever le liquide céphalorachidien, on pique où?</p>

Answer 28

<p>à travers la peau vis-à-vis la colonne lombaire.</p>

Question 29

<p>Nommez des sites non stérile du corp</p>

Answer 29

<ul> <li>bouche</li> <li>vagin</li> <li>peau</li> <li>rectum ou selles</li></ul>

Question 30

<p>Pour bien interpréter les résultats de cultures obtenus à partir de sites non stériles, il faut quoi? (2)</p>

Answer 30

<ul> <li>connaître la flore normale de ces sites</li> <li>porter attention seulement aux bactéries qui ne font pas partie de cette flore ou qui sont reconnues pour causer des infections.</li></ul>

Question 31

<p>Expliquez : Méthode moléculaire (diagnostic rapide)</p>

Answer 31

<ul> <li>Ces méthodes consistent à <strong>amplifier</strong> une partie du génome du germe à identifier dans un premier temps </li> <li>Par la suite, il suffit d’appliquer une méthode de <strong>détection</strong> de la portion du génome maintenant amplifiée pour confirmer la présence d’un pathogène suspecté.</li> <li>utiles quand le germe à détecter se cultive difficilement ou qui se trouve en faible quantité dans un prélèvement donné, ce qui rend sa détection difficile.</li> <li>Par contre, l’application d’une méthode d’amplification de type PCR («Polymerase Chain Reaction» ou Test d’amplification des acides nucléiques (TAAN)) à partir du même liquide céphalorachidien révèle habituellement la présence d’herpès simplex.</li></ul>

Question 32

<p>Quel est le principe de la sérologie?</p>

Answer 32

<ul> <li>est de mettre en évidence des preuves indirectes de la présence d’un agent infectieux.</li> <li>Au lieu de détecter le germe directement, il s’agit ici de détecter la présence <strong>d’anticorps spécifiques</strong> produits par le patient colonisé ou infecté par un germe.</li> <li>Ces anticorps produits par le système immunitaire sont présents dans le sérum de la personne atteinte d’où l’appellation générale «sérologie».</li></ul>

Question 33

<p>Quelle est l'utilité de la sérologie?</p>

Answer 33

<p>La recherche d’anticorps est particulièrement utile pour faire le diagnostic des infections virales, les virus étant en général plus longs et difficiles à mettre en évidence par culture.</p>

<p>Voici certains des virus ou maladies où la sérologie est la méthode diagnostique la plus utilisée pour poser un diagnostic infectieux:</p>

<ul> <li>virus d’immunodéficience humain (VIH)</li> <li>hépatite A, B, C</li> <li>rougeole</li> <li>rubéole</li> <li>varicelle</li></ul>

Question 34

<p>Nommez les deux types d’anticorps utiles en microbiologie diagnostique</p>

Answer 34

<ul> <li>Anticorps (immunoglobulines ou Ig) de type M ou IgM</li> <li>Anticorps (immunoglobulines ou Ig) de type G ou IgG</li></ul>

Question 35

<p>Les anticorps (immunoglobulines ou Ig) de type M ou IgM apparaissent quand dans une maladie?</p>

Answer 35

<ul> <li>Ces anticorps apparaissent en phase aiguë de la maladie et leur présence indique une infection actuelle ou très récente, ex.: hépatite A.</li> <li>Quand la phase aiguë de la maladie est passée, ce type d’anticorps disparaît et un deuxième type d’anticorps apparaît alors.</li> <li>Il s’agit des IgG.</li></ul>

Question 36

<p>Les anticorps (immunoglobulines ou Ig) de type G ou IgGapparaissent quand dans une maladie?</p>

Answer 36

<ul> <li>En phase de convalescence d’une infection, c’est ce type d’anticorps qui est produit et qui confère une immunité long terme contre l’agent infectieux en question.</li> <li>Au début d’une infection, les IgG sont absents. Quand un deuxième sérum est prélevé aux moins deux semaines plus tard, la présence d’IgG spécifiques à l’infection en cause est documentée.</li></ul>

Question 37

<p>Définir : Séroconversion</p>

Answer 37

<ul> <li>Le passage des IgG de négatif à positif est appelé séroconversion.</li> <li>Le principe de la séroconversion s’applique à la vaccination: la recherche d’anticorps est effectuée sur un premier échantillon de sérum pris avant la vaccination et sur un deuxième échantillon prélevé quelques semaines post-vaccination.</li></ul>