cre-loxP conditionele mutagenese

Question 1

cre-loxP

Answer 1

= mutatie veroorzaken in multicellulair org op voorwaardelijke wijze
- Cre = enzym werkt op Lox sites (rec/mut)
- P (overgenomen uit bacteriofaag P1)
- extrene stimulus expressie Cre
- eukaryoot

Question 2

cre recombinase

Answer 2

• recombineert kort specifieke doelwitsequenties = Lox sites = loxP sites = Lox sequenties (34bp)
• cre conditionele promotor
  > celspecifieke expressie; enkel in dat weefsel Lox sites ageren

Question 3

kruising & deletie tekening

Answer 3

p115

Question 4

cre-lox directionaliteit + tekening

Answer 4

• cre recomb. bind 1e & laatste 13 bp regio’s lox > dimeer
• dimeer bind dimeer andere lox > tertameer = functioneel
  p116

Question 5

toepassing CreLoxP kankergen

Answer 5

• construct LoxP sites
• genactiviteit uitstellen (kanker niet ontwikkelen bij embryo)
  > beta-actine = constitutieve promotor
  > cre niet geexpresseerd > GFP expressie
  > cre rec. actief door stimulus afhankelijke promotor LoxP = richting > GFP verwijdert > K-ras gevormd > kanker

Question 6

tekening homozygoot vs heterozygoot

Answer 6

p116

Question 7

cre-lox in praktijk

Answer 7

• manipuleren embryonale stamcellen (ES)
  > random geninsertie P Cre
• gerichte geninsertie op specifieke sites voor loxP upstream & downstream van endogeen gen X