expressie met additionele EWseq: tags

Question 1

tag

Answer 1

• extra sequentie aan EW gehecht (mee gecodeerd) => fusie EW/tagged protein
• ener welke doelwitcel

Question 2

tags doelen

Answer 2

• opzuivering
• herkenning expressie
• lokalisatie
• prot-prot interactie
• sturen lokalisatie intracellulair
• sturen lokalisatie extracellulair (secretie)

Question 3

voordelen

Answer 3

• makkelijker te zuiveren -> verstoring conformatie cellulaire lokalisatie
• eiwitlokalisatie manipuleren
• herkenning

Question 4

nadelen

Answer 4

• vreemde sequentie immunogeen
• EW mogelijk niet biologisch actief

Question 5

tags voor opzuivering

Answer 5

• HIS6 (metaalaffiniteitschromatografie) > klein
• GST (glutathionaffiniteitschromatografie) > groot

Question 6

tags herkenning

Answer 6

• flag (& HA)
  > klein, beads + prot + gekoppeld AL
• GFP
  > AL, microscoop

Question 7

tags voor sturen lokalisatie/visualisatie

Answer 7

• secrectie signaal
  > vermijden inclusion bodies
  > signaalpeptide (N-terminaal tag) lokalisatie bepaald door prot.OI/opvouwing
  > signaalpeptiden gastheer gebonden