Fraccionamiento celular Flashcards
¿Cuál es el propósito del fraccionamiento celular en investigación biológica?
El fraccionamiento celular se utiliza para separar y purificar los componentes celulares individuales a partir de una muestra celular compleja. Esto permite el estudio individual de orgánulos y estructuras celulares para comprender mejor su función y composición.
¿Qué métodos se utilizan comúnmente para el fraccionamiento celular?
centrifugación diferencial, la centrifugación en gradientes de densidad, la cromatografía de afinidad y la cromatografía de exclusión molecular.
Diferencia entre centrifugación diferencial y por gradiente
Diferencial: el solvente tiene la misma composición pero se modifica la fuerza .
Gradientes: se modifica la concentración del solvente, colchones de sacarosa.
¿Por qué se utilizan gradientes de densidad en el fraccionamiento celular?
Los gradientes de densidad se utilizan para separar orgánulos celulares de densidades similares. Esto se logra creando un gradiente de densidad en un tubo de centrifugación, donde las partículas celulares sedimentan en posiciones específicas según su densidad y tamaño.
¿Cuál es la importancia de validar la pureza de las fracciones celulares obtenidas?
Es importante validar la pureza de las fracciones celulares para garantizar que se hayan separado correctamente y que no haya contaminación con otros componentes celulares. Esto asegura la precisión y la fiabilidad de los resultados obtenidos durante el análisis de las fracciones celulares.
es mejor utilizar la fuerza centrífuga expresada en gravedades (g) en lugar de revoluciones por minuto (rpm)
> Utilizar g permite establecer una fuerza centrífuga constante y reproducible, independientemente del tamaño de la centrifugadora y del radio del rotor utilizado.
La fuerza centrífuga es una medida directa de la aceleración experimentada por las muestras, lo que proporciona una mejor precisión en los experimentos y resultados de centrifugación.
Expresar la fuerza centrífuga en g facilita la comparación entre diferentes experimentos y protocolos de centrifugación, ya que es una medida estándar y no depende de la configuración específica de la centrifugadora.
Tipos de homogeneización
Mecánica, química, ultrasonidos, congelación-descongelación, por presión.
Homogeneización no mecánica
Choque osmótico (físico), detergentes (químico), enzimas
Ejemplo de homogeneización mecánica
Prensa francesa y perlas de vidrio, rompen los componentes subcelulares.
Ultrasonicación
Frecuencia de sonido que genera burbujas que generan implosión, solo usarlo si las neuronas no son relevantes
Solventes químicos
EDTA, quelantes que hacen hoyos en la membrana. Benzeno, DMSO, ether y tolueno.
Cuáles son los 3 factores a considerar en la centrifugación
-Carga de superficie
-Tamaño
-Densidad (la más importante)
Principio de centrifugación
La aplicación de fuerza centrífuga a una muestra en un tubo de ensayo o un rotor de centrifugadora. Cuando se aplica fuerza centrífuga a una muestra en rotación, las partículas en la muestra experimentan una fuerza hacia afuera desde el centro de rotación, lo que les hace moverse en direcciones radiales.
Fuerza centrífuga
Es proporcional a la velocidad angular de rotación, el radio desde el centro de rotación y la masa de las partículas.
F=mw2r
w2=velocidad angular
m=masa
r=radio
