gateway cloning

Question 1

overbodig

Answer 1

restrictie & ligatie
-> homolge recombinatie tss faag lambda & E.coli bij lysogene cyclus
-> behouden ORF (lage foutenmarge)

Question 2

procedure

Answer 2

1) entry clone (DNA)
2) insert verplaatst nr ander vector met LR clonase
-> homologe rec herkenningssites obv gateway att sites (BP clonase)

Question 3

rec insertie

Answer 3

lysogene fase

Question 4

rec excisie

Answer 4

lytische fase

Question 5

tekening

Answer 5

p26/28? online

Question 6

toepassingen destination vector

Answer 6

• species of cel specifieke promoters expressie GOI in verschillende systemen
• epitoop tags voor handige opzuivering/detectie EW

Question 7

toep gateway kloning

Answer 7

• onderzoek functionaliteit eiwit gen
• proteïne lokaliseren door coderen GFP
• extra tag aan gen -> proteine in cel -> opzuivering door prot
• celvrije transcriptie-translatie -> genexpressie in vitro vec
• proteïne interacties
• RNAi expressie via gencodering siRNA aan gen
• combinatie verschillende genen samen tot fusie DNA of EW
• klonering library

Question 8

voordelen

Answer 8

• directionele klonering (cont orientatie)
• leesraam behouden
• geen RE, geen ligatie
• snel, hoge kloneerefficientie
• geen hersequenering door lage foutenmarge
• geautomatiseerd
• omkeerbare reactie
• vele destinatie vectoren

Question 9

nadelen

Answer 9

• tijdrovend initiele set-up
• lock-in syndroom
• duurder