Introduction to confocal microscopy Flashcards

1
Q

מה מאפשרת לנו רזולוציית זמן-מרחב?

A

הבנה מעמיקה של תהליך - התפתחות גידול או כל תהליך ביולוגי

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
2
Q

מה אפשר להגיד על איכות הרזולוצייה בשיטת ה omics?

A

רזולוציה לא טובה

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
3
Q

באילו יחידות זמן מודדים את התאים ב

molecular imaging?

A

שניות ומילי שניות

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
4
Q

אילו יסודות הכללים בגישת ביולוגיה מערכתית ב

molecular imaging?

A
  • MI דאתא
  • prediction validation
  • מידול חישובי
  • אינטרקציות בין מערכתיות
  • זיהוי רכיבים שונים במערכת
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
5
Q

האם MI

נחשבת לשיטה חודרנית?

A

לא

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
6
Q

האפ בMI

ניתן לעשות חקר בזמן אמת?

A

כן

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
7
Q

מהו המפתח להבנת תהליכים ב-MI?

A

היכולת שלנו לשים מולקולות בודדות בזמן ובמרחב כמה שיותר קרוב למצב הטבעי, בתאים או בחיות שלמות

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
8
Q

על אילו מאפיינים היה מבוסס הצילום ב

traditional imaging?

A

מורפולוגיה וסטרוקטורה

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
9
Q

האם traditional imaging

נחשב לתהליך ספציפי?

A

לא

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
10
Q

מהם המאפיינים המשולבים ב MI?

A
  • חומרים מולקולריים

- אמצעי צילום מתקדמים

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
11
Q

כיצד MI

תורם להתפתחות של ענף הרפואה המדייקת?

A

כך אפשר ללמוד על שינויים ברמת התפתחות

של מולקולות ספציפיות בחולה שנוכל לתווך באמצעות תרופות ביולוגיות חדשות

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
12
Q

אילו חלבונים צובעים בבדיקה של סרטן השד?

A

אסטרוגן,
פרוגסטרון ו
-her2

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
13
Q

האם MI

יכול לשמש בתור כלי דיאגנוסטי תרפואטי?

A

כן

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
14
Q

מה היה סף הרזולוציה הגבוה במיקרוסקופיה לאורך שנים לפני עידן הסופר רזולוציה?

A

250-200 ננו מטר

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
15
Q

מה הרזולוציות אליהן מגיעים היום בעידן הסופר-רזולוציה?

A

20 nm ברקמות חיות

ו-1 nm ברקמות מקובעות

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
16
Q

מהם התהליכים שקורים בריאקציה אנזימטית?

A

שינוי בהתאמה המרחבית, החלבונים מתקפלים, עוברים אינטראקציה ומעבר סיגנל

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
17
Q

subבאיזו רזולוציה מסתכלים על פרטים ב

imaging molecular ?

A

כמה ננוטמרים

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
18
Q

על אילו שיטות מתבססות טכנולוגיות של סופר רזולוציה?

A

Tailored illumination
Nonlinear fluorophore responses
Precise localization of single molecules

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
19
Q

מהו גודלו הממוצע של נוגדן?

A

150 kDa

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
20
Q

מהו גודלו הממוצע של פלורופור?

A

30 kDa

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
21
Q

כיצד מפריע הפלורופור למערכת?

A

מכניס אליה הרבה רעש

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
22
Q

מהי שיטת SIM?

Structured illumination microscopy

A

שיטה בה מעררים את הדגימה עד להיווצרות דפוס - הפרעה הידוע כאפקט מויר. מקבלים מספר תמונות באמצעות מחשב מקבלים תמונה אחת בסופר רזולוציה

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
23
Q

כיצד תוכנות חישוביות עוזרות להשיג מידע נוסף?

A

מאפשרות כימות של מולקולות בזמן ובמרחב

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
24
Q

באילו תוכנות משתמשים לאנליזה של תמונות שהתקבלו ממיקרוסקופ?

A
  • Huygens
  • Imaris
  • Bitplane
  • Scientific volume imaging
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
25
Q

מהו מישור פוקאלי?

A

האיזור שעליו נמצאת הדוגמה, במאונך לעדשה

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
26
Q

באילו ענפים/מכשירים היה צורך בהתקדמות טכנולוגית כדי לפתח מיקרוסקופ קונפוקלי

A
  • לייזר
  • מחשבים חזקים
  • CLSM
  • Multi photon microscopy
  • High resolution CLSM
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
27
Q

מהם היתרונות במיקרוסקופ קונפוקלי?

A

הורדת הטשטוש – צמצום הבלרינג שנוצר מפיזור האור
הגדלת הרזולוציה האפקטיבית
העובדה שאפשר להסתכל במישור פוקאלי אחד, מאפשרת להסתכל ברקמות יותר עבות
ניתן לראות עומק ב- Z section images
נותן יש מגניפיקציה של העדשה וגם מגניפיקציה אלקטרונית

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
28
Q

האם מיקרוסקופ קונפוקלי מגדיל את הרזולוציה?

A

לא, הוא מוריד את הרעש

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
29
Q

כיצג משפיע מיקרוסקופ קונפוקלי על היחס בין סיגנל לרעש?

A

משפר אותו

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
30
Q

באיזו שיטת הארה שתמשים במיקרוסקופ קונפוקלי כדי כדי להגביר את הסיגנל לעומת הרעש?

A

פלואורסנציה

31
Q

עבור כמה מרחבים המיקרוסקופ הקונפוקלי מספק מידע?

A

4 - X,Y,Z

ומישור הזמן

32
Q

איזה סוג רזולוציה ה- super resolution confocal

משפר?

A

הרזולוציה האמיתית

33
Q

דוגמאות ל Super Resolution Confocal Microscopes?

A

Ventura

Leica (Sted)

34
Q

מה מאפיין פלורסנציה בהקשר לצבעים?

A

שינוי בצבע, באורך הגל

35
Q

האם שינוי צבע זאת הופעה אנרגטית?

A

אכן, כי מתרחש שינוי באורך הגל

36
Q

איזה תהליך פיזיקלי קורה בפלורופור?

A

מקרינים את
האלקטרון באמצעות פוטון, הוא מקפיץ את האלקטרון
לרמה גבוהה לא יציבה, יורד לרמת ביניים תוך איבוד
אנרגיה ואז יורד לרמת הבסיס

37
Q

מדוע פלורופור משנה את צבעו בעת העירור?

A

לרוב לפלורופור יש מבנה טבעתי שעירעורו מוביל לרזוננס המתבטא בשינוי רמת האנרגיה של האלקטרונים וכך משתנה אורך הגל שלו וצבעו

38
Q

על כמה פלורופורים ניתן להסתכל במקביל במיקרוסקופ פלורוסנטי?

A

3

39
Q

על כמה פלורופורים אפשר להסתכל בו זמנית במכשיר FACS?

A

על פלורופורים רבים

40
Q

כיצד מוגדר

strokes shift?

A

הפרש האנרגיה בין הרמה האנרגטית הנמוכה ביותר של בליעה, לבין האנרגיה הגבוהה ביותר של הפליטה

41
Q

מה היתרונות בשימוש בלייזר בתור קרן אור?

A

האמפליטודה שלו היא מאד צרה ולכן אפשר לעשות
אקסיטציה באורך גל מאד מוגדר ואז לבדוק את
האמיציה

42
Q

איך מתבצעת הפרדה בין שני פלורופורים שונים?

A

אקסיטציה באורך גל שונה באמצעות הלייזר לכל פלורופור בנפרד,
קולטים באמצעות פילטרים אך ורק את האקסיטציה
המסוימת של אורך הגל מסוים

43
Q

מהי “זליגת פלורופורים”?

A

כשפלורופור אחד נכנס לתתך הקליטה של הפלורופור השני

44
Q

מה מאפשרת לדעת קו-לוקליזציה של חלבונים?

A

כמה החלבונים “יושבים” אחד על השני

45
Q

מה המקור של מולקולת ה GFP?

A

יצורי ים

46
Q

כמה חומצות אמינו מכיל GFP

ומהו משקלן המולקולרי?

A

238 ח”א

20-30 kDa

47
Q

מכמה ח”א מורכב הפלורופור שבתוך ה GFP?

A

כ-65

48
Q

מהו המבנה הכללי של ה-GFP?

A

מעין חבית עם אלקטרונים

49
Q

כיצד יצרו YFP?

A

באמצעות מוטציות ששינו את מבנה

החלבון ואת הרזוננס

50
Q

כיצד מגיבים פרובים אשר עוברים חימצון על ידי מי חמצן?

A

משנים את הצבע שלהם

51
Q

איזו תוצאה ניתן להשיג באמצעות LINEAR UN-MIXING – SPECTRAL DECONVOLUTION?

A

צביעה של חלקים ספציפיים בתא

52
Q

מהי “דה-קונבלוציה”?

A

שחזור פונקציה מקורית מפונקציה נתונה, שנוצרה מזו המקורית בעקבות פעולה של
פונקציה שלישית

53
Q

ראשי התיבות של FRAP?

A

fluorescence recovery after photobleaching

54
Q

מה ניתן להסיק באמצעות FRAP?

A

קצב התנועה של החלבון בממברנה

55
Q

איזו תופעה לא רצויה קורית לרוב כשמקרינים אזור

מסוים בממברנה של התא בעוצמת לייזר חזקה?

A

bleaching

56
Q

באיזה שלב של תנועת האלקטרון קורה blecahing?

A

כשהאלקטרון עוזב את האורביטלה שלו

57
Q

למה משמשת מיקרוסקופיית FRAP?

A

למדוד דינמיקה של חלבון על ידי מדידת פלורסנציה בשלב ה”התאוששות” של התמונה מהבליצ’ינג

58
Q

מה מודדים באמצעות אנליזה לאחר ניסוי FRAP?

A

את הפרקצייה המובילית והלא מובילית של החלבון

59
Q

מה משמעות הקיצור של

FRET?

A

fluorescence resonance energy transfer

60
Q

מה דרוש שיקרה בין שני הפלורופורים בעת ניסוי FRET?

A

שתהיה בניהם אינטרקציה וחפיפה ספקטרלית

61
Q

כיצד אנו מכנים זוג של פלורופורים בניסוי FRET

A

donor and acceptor

62
Q

מה המרחק המינימלי שיכול להיות בין שני חלבונים בניסוי FRET?

A

10 ננומטר

63
Q

למה גורמת האמיציה של חלבון הdonor?

A

אקסיטציה של חלבון הacceptor

64
Q

מה יקרה בניסוי FRET

שבו אין מספיק אינטרקציה בין הפלורופורים?

A

כל אחד יגיב בנפרד

65
Q

כיצד תהליך ה-

2 photon משפיע על כיוון ב- exitation?

A

ממקד אותה לאותו

focal plane

66
Q

מה דרוש ממערכת בה משתמשים ב

multiphoton microscopy?

A

עירור חזק של המון פוטונים כדי שסטטיסטית 2 יוכלו לפגוע באותה נקודה, יתרחש מיקוד של העדשה לאותה נקודה ואז אקסיטציה

67
Q

באיזה סוג לייזר משתמשים ב

multiphoton nicroscipy?

A

לייזר פולסטיבי

68
Q

מהי תדירות יריית הפוטונים בשיטת המולטיפוטון?

A

ירייה כל 10 ns

69
Q

מה דורש פלורופור שניתן לעשות לו פוטו-אקטיבציה כדי להפוך לפלורוסנטי?

A

הקרנה של אור כחול / UV

ואז הוא מסמן את האיזור הדרוש באברון

70
Q

מה אפשר להגיד על פלורופור שניתן לעשות לו פוטו-סוויצ’

A

נראה מההתחלה אך משנה את צבעו לאחר קבלת אור UV
או אור כחול
ומאפשר לראות את האיזור הרצוי בתא

71
Q

מה דרוש מלייזר טוב שישמצב במיקרוסקופיה קונפוקלית?

A

Affordable
Low noise,
low power consumption lasers
370-1200 nm

72
Q

מהי הדרישה העיקרית מ

detector טוב

A

שתהיה לו רגישות גבוהה

73
Q

במה חשוב שתתאפיין סריקה איכותית?

A

מהירות וגמישות