kloneren

Question 1

toepassingen kloneren

Answer 1

• sequeneren
• expressiescreening
• grote hoeveelheiden eiwitproduct bekomen
• mutaties gen
  voorbereiding recombinante vector (hogen org. transgeen)

Question 2

hybridisatie

Answer 2

2 strengen samenvoegen, basenparen, via label opsporen

Question 3

expressieklonen

Answer 3

klonering zodat insert/vector tot expressie komt in doelwitcel

Question 4

genetische variantie

Answer 4

screenen verschillende basenvolgorde binnen 1 soort organisme

Question 5

post-genomisch

Answer 5

RNA,eiwitten, eiwit-eiwit interactie

Question 6

transgenese

Answer 6

gen uit organisme X in organisme Y brengen, transgeen organisme

Question 7

intermoleculaire ligatie

Answer 7

2 DNA moleculen; genfragment van interesse en vector

Question 8

optimale ratio sticky en blunt ends

Answer 8

st= 3:1 of 1:3
bl= 1:5

Question 9

controle resultaat

Answer 9

• antibioticum resistentie
• sequentie vector gekend: PCR primers
• restriction mapping: pDNA opnieuw verknipt, AGEF
• sequenering na PCR

Question 10

voorkomen ongewenste ligatie

Answer 10

• defosforylatie insert/vector
• dubbele restrictiedigest

Question 11

fosfatase enzym voorbeeld en hoe opzuiveren

Answer 11

bacterieel alkalisch fosfatase en kalf intestinaal fosfatase
anionachromatografie en fenolextractie + ethanolprecipitatie

Question 12

conversie 3’ uiteinden

Answer 12

bacteriofaag T4 polymerase
5’-3’ polymerase
3’-5’ exonuclease

Question 13

conversie 5’ uiteinden

Answer 13

T4 polymerase of klenow
5’-3’ polymerase

Question 14

linkers

Answer 14

korte synthetische stukken DNA met gekende sequentie, RE herkenningsplaats

Question 15

adapters

Answer 15

2 korte ss oligonucleotiden gedeeltelijk complementair aan elkaar (vaak 5’ gedefosforyleerd)

Question 16

homopolymeerstaart

Answer 16

met terminaal deoxynucleotide transferase:
geen template
aan elk 3’OH staart zelfde ntp
aan insert complementaire ntp

Question 17

functie plasmiden

Answer 17

eigenschappen doorgeven via conjugatie