lentivirale vectoren Flashcards
1
Q
lentivirale vectoren (eigenschappen)
A
- (delende) en niet delende
- gentransver bij G0 rustfase
- transport vector via pre-integratie complex door nucleair membraan doelwitcel
- HIV-afgeleide vectoren = effectief tegen t-helpercellen en macrofagen
2
Q
def lentivirussen
A
humane retrovirussen geassocieërd met immuundeficiëntie & neurologische symptomen
3
Q
lentivirussen eigenschappen
A
- lage immuunrespons
- diploide RNA genoom: 2ss (+)RNA als genoom
- uiteinden = long terminal repeats
- psi-seq: verpakkingssignaal
- delende & niet delende cellen (uitz g0)
4
Q
lentivirussen besmetting
A
- reverse trans enzym (ssRNA -> cDNA)
- DNA polymerase
- integratie door virale enzym: integrase
-> provirus: repliceren met genoom
-> budding: nieuwe virussen verlaten cel via knopvorming
5
Q
opbouw lentivirale vectoren
A
- packaging =/= target cell
- lentivirale genther. vector: th. of rapporteergen inbouwen in vector
- verpakkingscellijnen: manipulatie productie virale proteïnen nodig voor verpakking (niet geflankeerd, geen deel gentherapie)
- viruspartikels die replicatie)deficiënt zijn, GOI afleveren in doelwitcel, onmogelijk recombinante viruspartikel zelf vermenigvuldigen
6
Q
expressie lentivirale vectoren
A
- aangemaakt in transiënt transfectiesysteem, eukaryote cellijn & verpakkingscellijn getransfecteerd met 3 verschillende plasmiden (circ ds DNA)
1 transfervector
2 packaging vector
3 plasmide met heteroloog enveloppe gen ander virust
7
Q
transfervector
A
- sequentie gen voor EW-> rec viruspartikel doelwit kan inf
- RE herkenningsplaats na eukaryotisch actieve promoter
- originele enveloppe gen verwijderd
8
Q
transvervector inhoud
A
LTR - psi - RRe - promoter - transgen - LTR
RRE = rev respons element
9
Q
verpakkingsplasmide
A
- ruggengraat virale vectorsysteem
- elementen voor verpakking relevante transcript
-> structurele EW, HIV genen, enzymen die viruspartikel genereren
-> genen onder controle hCMV promoter constitutief actief in euk
10
Q
verpakkingsplasmide inhoud
A
promoter - gag - pol - tat&rev (RRE) - poly A
11
Q
virale verpakkingsproteïne (opbouw virion)
A
- env
opp glycoproteïne (spikes)
transmembranaire proteïnes (door virusmembraan) - gag
matrix, capside & nucleocapside
12
Q
virale verpakkingsproteïnen (transcriptie tot RNA dat verpakt wordt)
A
- pol
reverse transcriptase RNase H activiteit
integrase
protease - tat
transactivator
verhoogt initiatie & elongatie - rev
reguleert mRNA splicing & transport
regulator virionexpressie
13
Q
derde plasmide met enveloppe
A
- env ontbreekt -> stabielere & efficientere aanmaak viruspartikels
- meer verschillende doelwitcellen door andere env genen
14
Q
enveloppe expressieplasmide inhoud
A
promoter - VSV-G - polyA
15
Q
IRES
A
internal ribosome entry site translatie in gastheer
