Mini Teste (T9) Flashcards
Para se perceber o mecanismo de replicação foi crucial o conhecimento da estrutura da cadeia dupla de DNA. Porquê?
Após o conhecimento da estrutura tridimensional do DNA por Watson e Crick foi possível perceber o mecanismo de replicação semi-conservativa desta molécula.
Qual a importância da experiencia de Meselson e Stahl para perceber o mecanismos de replicação do DNA?
Meselson e Stahl demostraram, em 1958, que a replicação de DNA é um processo semi- conservativo pela introdução de azoto-15 em cultura, que foi introduzido em cadeia filhas. Como se verificou a prevalência das cadeias parentais, com azoto-14, demonstrou-se a semi- conservação deste processo.
Qual a importância da existência de varias origens de replicação num mesmo cromossoma?
As várias origens de replicação permitem a redução do tempo total de replicação de cromossomas.
Qual a fase do ciclo celular em que ocorre a replicação do DNA?
Na fase S.
Porque razão é necessária a presença de uma proteína com actividade de RNA polimerase no inicio da replicação de cada cadeia ou fragmento de DNA?
A DNA polimerase não tem capacidade de introduzir os primeiros nucleótidos da cadeia filha, por isso, é necessário a atividade de uma RNA polimerase (neste caso, RNA polimerase alfa) para aplicar primers, que são pequenas sequências de nucleótidos de RNA que são colocadas no ínicio das sequências filhas.
A DNA polimerase tem actividade de correcção na direcção 3’ para 5’ mas sintetiza de 5’ para 3´. Explique esta frase.
A atividade de correção 3’®5’ permite à DNA polimerase corrigir erros de nucleótido que colocou anteriormente, cortando a ligação fosfodiéster e removendo o nucleótido incorreto. Isto limita a quantidade de mutações que podem ocorrer.
Durante a replicação de uma cadeia dupla, e a partir de cada origem de replicação, uma das cadeias filhas é replicada de forma continua e outra de forma descontinua, com recurso a fragmento de Okasaki. Porquê? Qual a composição de cada fragmento de Okasaki?
Isto deve-se ao facto da DNA polimerase apenas conseguir adicionar nucleótidos na direção 5’®3’. Como apenas na cadeia adiantada (ou contínua) é que isto ocorre, a outra cadeia, a atrasada (ou descontínua), é replicada de uma forma descontínua com a formação de fragmentos de Okasaki. Os fragmentos de Okasaki são pequenas sequências com cerca de 200 nucleótidos de DNA e com RNA primer (na extremidade 5’ da cadeia) com cerca de 12-16 nucleótidos (isto nos eucariotas).
Qual a função das topoisomerases e sua importância no processo replicativo.
As topoisomerases têm como função o relaxamento da cadeia dupla, através de cortes na cadeia a jusante da forquilha de replicação. A topoisomerase I corta apenas uma das cadeia enquanto que a dois cortar a dupla hélice. Estas enzimas têm um papel importantíssimo no processo replicativo, por facilitarem o acesso da maquinaria.
Porque razão a presença de uma enzima com actividade Helicase é crucial para o inicio da replicação?
Para que ocorra a replicação é necessário que ocorra a separação das cadeias, para que maquinaria de replicação as possa aceder, de modo a formarem-se as cadeias filhas.
Qual a função das proteínas SSB?
As proteínas SSB são proteínas de ligação às cadeias simples, ou seja, elas estabilizam as cadeias simples de DNA de forma transiente para prevenir a degradação nucleotídica e da formação de estrutura secundária.
Qual a função da DNA ligase e onde atua durante o processo replicativo?
A DNA ligase une os gaps fragmentos de Okasaki atuando, portanto, sobretudo, na cadeia atrasada.
Indique em que fase do processo replicativo atuam as diferentes polimerases.
Para que as cadeias filhas sejam comportas unicamente de DNA é necessário remover os primers de RNA. Como é feito esse processo e quais as proteínas envolvidas.
A remoção de primers em eucariotas ocorre nas seguintes etapas:
* DNA polimerase d estende o fragmento de Okasaki na direção 5’®3’. Quando encontra o primer de RNA de outro fragmento, faz uma clivagem da extremidade 5’ deste, deixando-o “pendurado” e separando esse troço da cadeia nuclease.
* Este chamado RNA flap é removido por endonucleases específicas, a FEN1 e RPA.
* Uma vez retirado o primer, a polimerase continua a sintetizar a cadeia filha substituindo
as zonas que tinham o primer.
* Para fechar o último gap, entre o último nucleótido colocado e o nucleótido que já existia
que estava associado ao primer. Esta ligação é feita pela DNA ligase.
