P5- SEPARAÇÃO POR GRADIENTE DE DENSIDADE

Question 1

celulas no sangue

Answer 1

eritrocitos

leucocitos (glob brancos)
- granulocitos
a)neutrofilos
b)eosinofilos
c)basofilos
- linfocitos (T,B,NK)
- monocitos

cels dendriticas

plaquetas

info
-proprocao leucocitos:eritrocitos (1:1000)
-nos leucocitos, 60% neutrofilos e 20% linfocitos

Question 2

a) mononucleares

Answer 2

• linfocitos
• monocitos
  (ambos leucocitos)

Question 3

objetivo do teste e o seu motivo

Answer 3

• separar linfocitos
• cels responsaveis p resposta adaptativa q da memoria e especificidade

Question 4

procedimento

Answer 4

ETAPA A
1) ficoll num tubo
- ficoll é polissacarideo transparenete com densidade conhecida, diferente da do sangue e e que se encontra entre as dif densidades das cels do sangue, permitindo seprar por densidades

2) colocar sangue sobre ficoll
- mt devagar p nao misturar

3) cetrifugacao
- puxa cels do sangue contra polimero, cels com maior densidade descem e com menos mantem se a superf)
- 2 fases liquidas p 4:
a) plasma e plaquetas
b) mononucleares (anel de ficoll)
c) ficoll
d) eritrocitos e polimorfonucleares

ETAPA B
1) tirar camada de mononucleares
- tirar plasma todo e depois o anel ou diretamente o anel

2) cels recolhidas num tubo
- isolamos populacao rara

3) lavar celulas
- diluir com tampao BPS

4) centrifugar

5) descartar liquido por cima

6) ressuspender cels em 1ml PBS

ETAPACA C (contagem)
1) saber n cels mortas e viablidade
- retiramos pequena amostra e coramos com azul triptano (10 d amostra e 10 corante, ficando a amostra diluida 1:2)
- cels mortas a azul pois corante atravessou a membrana, pois membrana das vivas é lhe impermeavel

2) camara de Neubauer ou hemocitometro
- quadrado grande com 1mm largura, composto por 16 quadrados pequenos
- sendo o espaco entre lamina e lamela de 0.1mm, volume em cada quadrado grande é 110.1=0.1mm cubicos

3) calculos
- contamos cels em quadrado pequeno
- multiplicamos por 16 p numero de cels no quadrado grande
- multiplicamos por 2 p causa do fator diluicao
- regra de 3 simples p transf n celulas q tmos em 0.1mm cubicos (0.1 coisolitros) em 1000 coisolitros (1 ml, que é o que tinhamos no tubo)

Question 5

importancia da tecnica com separação de ficoll

Answer 5

• permite estudar uma populacao rara fora de uma mistura de celulas

Question 6

viabilidade

Answer 6

cels vivas/cels mortas