PCR Flashcards
Proceso para hacer PCR
(Desnaturalización 30 s @ 94ºC
Alineamiento 30 s
Extensión @72ºC, 1 kb/min) 30X
Mantenimiento 4ºC, infinito
Reactivos de una PCR
DNA, Oligo Fw, Oligo Rv, Amortiguador, dNTP’s, MgCl2, DNA polimerasa, Agua
¿Qué es una PCR anidada?
El DNA molde que se utiliza es el amplicón obtenido previamente de otra PCR. Se pueden utilizar los mismos primers.
Aplicaciones de la PCR
Clonación, secuenciación, diagnósticos clínicos, amplificación de mutaciones, analísis de genomas, identificación de organismos
Usos de una RT-PCR
Clonación, construcción de bibliotecas, síntesis de sondas, evaluar expresión de gen de interés
¿Qué es una RT-PCR?
Se basa en detección y cuantificación de un reportero. Es fácil y sensible pero se puede sobreestimar y el equipo es costoso
¿Qué es un gel de agarosa?
Polímero extraído de algas, sujeto a campo eléctrico constante provocando que DNA migre hacia +
¿En un gel, cómo migran las moléculas de ADN?
Por tamaño y forma
Proceso para purificación de ADN total
Cultivo, spearación de cultivo, rompimiento celular, extracción del ADN
¿Qué tecnología se puede utilizar para purificar ADN?
Cromatografía de intercambio aniónico
¿En qué consiste la purificación de DNA plasmídico?
Lisis mini, midi, maxi-prep. SDS+NaOh desnaturaliza proteínas, neutraliza con acetato de K y pDNA es purificado por cromatografía.
