Testes Laboratoriais Flashcards
Quais são os testes laboratoriais de análise de DNA?
Exames para diagnóstico pré-natal (amniocentese e biópsia das vilosidade corionicas)
FISH
CGH
PCR
Quais são os testes laboratoriais de análise de proteínas (utilizam reação antígeno-anticorpo)?
ELISA
Testes imunohistoquimicos
Western Blot
No que consiste o teste de cariótipo pré-natal? Quando ele é indicado e qual o diagnóstico mais comum?
Ele é um teste onde são extraídas células fetais do líquido amniótico (amniocentese) ou das vilosidades coriônicas (biópsia - transcervical ou transabdominal), para se conseguir o DNA e analisar o cariótipo do feto.
- coleta
- cariotipagem
- gimsa (coloração): bandas G - padrão de bandas claras (genes ativos) e escuras (genes inatvos)
É indicado para mães de idade avançada (ou pais).
O diagnóstico mais comum é a Síndrome de Down.
- alterações cromossômicas no 21
1. translocação robertosiana 2. isocromossomo 3. deleção
Explique o teste “fluorescence in situ hybridization”. Para que ele é usado?
São utilizadas sondas que, quando hibridizadas com o DNA da amostra, emitem uma cor específica. Caso haja recombinação gênica, a cor será diferente, e então uma alteração (presença ou ausência da sequência ) é descoberta.
Explique o teste “comparative genomic hybridization”. Para que ele é usado?
O DNA da amostra é corado com vermelho e o DNA controle, de verde. Eles são colocados para hibridização e resultam na cor amarela se o DNA da amostra for igual ao controle (normal).
Caso haja ganho de DNA, haverá células vermelhas; e perda, verdes.
É usado para analisar ganho/perda no genoma.
Explique as etapas do RT-PCR
- coleta da amostra (nasofaringe); rompimento da membrana (isolamento do material genético)
- RT-PCR: transcrição reversa:
- transformar RNA em DNA - transcriptase reversa
- RNA é instável por conta da OH a mais - Ciclagem:
3.1 desnaturação (separação das 2 fitas)
3.2 anelamento (hibridização com os primers)
3.3 extensão (ação da Taq polimerase)
O ciclo é repetido várias vezes. - Análise
Gel de agarose: separação das moléculas por peso. Se houve extensão, a sequência estará presente em determinado ponto do gel.
Explique o sequenciamento de DNA
Determinação da ordem dos nucleotídeos:
- separação da dupla fita de DNA
- nucleotídeos modificados são adicionados (sem o grupamento OH no C’3
- o nucleotídeo que seria adicionado é puxado para um capilar, pois a ligação fosfodiéster não é mais possível
- sequenciamento é feito por uma máquina
Qual a importância dos testes de imunohistoquímica?
Estes testes permitem a detecção de uma proteína específica em um tecido (cortes histológicos), por meio da ligação antígeno-anticorpo.
Permitem a definição de histogênese de neoplasias.
Auxílio na diferenciação entre neoplasias e estados reacionais.
Como funciona o teste ELISA?
É um teste sorológico que visa a detecção do anticorpo ou do antígeno por meio da ligação antígeno-anticorpo, que emite uma luz.
- coleta
- detecção do antígeno:
2. placa de ELISA com anticorpos primários
3. a amostra é colocada com micropipetas
4. antígenos (se tiver) se ligam aos anticorpos primários
5. são adicionados anticorpos secundários (conjugados) que são ligados a enzimas. Ao se ligarem com o antígeno, emitem uma luz
6. annálise - detecção do anticorpo:
2. placa de ELISA com o antígeno
3. amostra sorológica é colocada. Se houver anticorpos, estes se ligam ao antígeno
4. são adicionados anticopos (anti-anticorpos) conjugados, contendo a enzima, que se ligam com o anticorpo e produzem luz
5. análise no espectofotômetro
Explique o teste alfa-feto proteína sérica materna
.
Explique o Western Blot e sua importância.
É um teste que visa a detecção de proteínas separadas previamente por peso molecular.
- cultura de células
- lise celular (detergentes)
- proteínas são carregadas negativamente
- colocadas no gel de agarose, onde são separadas por peso molecular
- são passadas para uma membrana (carimbadas)
- adicionado anticorpo - se liga à determinada proteína
- adicionado anticorpo secundário, com a enzima e o substrato, que emite luz se houver a proteína.
