שיעור 1 - מוטגנזה Flashcards
מהן 3 הדרכים לעשות מוטגנזה (יצירת מוטציות)
- מחיקה
- הוספה
- התמרה=החלפה
S1Nuclease מה הוא
אנזים רסטריקציה לאתר A , עושה לינאריזציה של הפלסמיד
מוטציית מחיקה
מי הוא Bal31
אנזים בעל פעילות של אקזונוקלאז המעכל כל פעם נוק’ אחד בכל קצה. משתמשים בו שוב ושוב
לקבלת מולקולות קצרות יותר ויותר.
למה אנחנו עושים מוטציית מחיקה?
עוזר לנו ללמוד על פעילות הפרומוטורים ואיזורי בקרת השעתוק
הכנה אקראית- למה מחדירים TDNA?
ניתן להפיק דיאןאיי לאחר ההחדרה, לרצף, ולראות איפה הוחדר ה-TDNA. לאחר מכן נחקור על הרצפים שמשפיעים על פעילות הגן.
מה היא הכנסה באתר רסטריקציה ידוע
הוספת 4 נוק באתר רסטריקציה ידוע, כך נוספה חא והדתנתה מסגרת הקריאה.
אופציה נוספת, היא הכנסת 3 זוגות נוק , מתקבלת חא נוספת או סטופ קודון. אין שינוי ברצף הקריאה
אופציה אחרונה - החדרה של לינקר - מחדירים באקראי מקטעי DNA קטנים באורך כ-10 נוקליאוטידים
(linker (לגן משובט בפלסמיד. על פי מיקום המחדר, ניתן לחקור ולמפות את הרצפים
המשפעים על פעילות הגן .
WHAT IS T-DNA
Based on the ability of the soil bacterium Agrobacterium tumefaciens to introduce part of
its plasmid into the plant cell genome . The T-DNA is inserted
at random sites, sometimes disturbing functional genes
EXAMPLES OF T-DNA USES THAT WE LEARNED
ARABIDOBSIS
RICE
כיצד בהתמרה מתבצעת דה אמינציה של C
על ידי נתרן ביסולפט CG מוחלפים ב AT C הופך להיות U ואז הפולימראז מזהה אותו בתור T
כיצד בהתמרה-החלפה מתבצעת שיטת EMS
CG מוחלף בAT
כיצד שיטת EMS מועילה ליבולים
שיטת EMS מגבירה את
השונות הגנטית ביבולים
חקלאיים.
EMS TOMATOS
מוטנים ב:
נביטת הזרעים, גודל הצמח, מורפולוגית הצמח והעלה, צבע העלה, פריחה,
גודל הפירות ומספרם, פוריות, מחלות ותגובות ללחץ
התמרה- אוליגונוקלאוטידים מוטנטים
השיטה השימושית ביותר למוטגנזה נקודתית
הכנסת ווקטור, PCR,