1 - Évaluation Quantitative De La Culture

Question 1

Impact des cellules en suspension sur un milieu de culture :

Answer 1

Elles restent dans le liquide, rendant le milieu de culture brouille; car les cellules bloquent un peu la lumière.

Question 2

Impact des cellules adhérentes sur un milieu de culture :

Answer 2

Elles adhèrent au fond de la boîte et commencent à croitre et s’étaler pour prendre de la place. Le milieu est limpide, car les cellules sont toutes au fond; elles ne bloquent pas la lumière.

Question 3

À quoi s’attaque la Trypsine et à quoi elle sert ?

Answer 3

Elle s’attaque à toutes les protéines de surface (doivent les refaires une fois qu’elles sont détachées).
Elle sert à séparer les cellules les unes des autres et à les séparer du fond (substrat).

Question 4

Quel terme désigne une boîte de culture qui est ‘‘pleine’’ de cellules et que faut t’il faire ?

Answer 4

La culture est à confluence.

Il faut faire des repiquages.

Question 5

Quantifier l’état de la croissance cellulaire permet de :

Answer 5

1. Connaître le meilleur temps pour faire un repiquage.
2. Mesurer l’effet des changements apporté à l’environnement des cellules.
3. Prendre conscience d’une problématique avec la culture (ex: contaminations).

Question 6

Synonymes de sous-culture :

Answer 6

Repiquages/passages

Question 7

Ce dont est fait un tissu :

Answer 7

Les cellules et la matrice.

Question 8

Identification des différentes méthodes pour le comptage :

Answer 8

1. Hémacytomètre
2. Compteur électronique
3. Mesure par colorimétrie

Question 9

Description de la méthode lors d’un comptage à l’hémacytomètre :

Answer 9

o Nettoyer la surface et la lamelle + humecter (eau démin) les bordures du verre dépolis à l’endroit où va s’appuyer la lamelle. Celle-ci doit être bien fixé (détermine la bonne profondeur de la chambre de mesure lors de l’ajout de l’échantillon).
o S’assurer de la propreté (microscope) avant l’utilisation.
o Minimum de 1X10^5 c/mL pour un comptage significatif.
o Homogénéiser avec bleu trypan (colorant dont les molécules sont trop grosses pour pénétrer la membrane cellulaire des cellules vivantes) et prendre ±15 µL
o Introduire par capillarité dans la cavité de l’hémacytomètre.
o Regarder à 100x et faire le comptage.

**Plus long que compteur électronique.

Question 10

Erreurs lors d’un comptage à l’hémacytomètre :

Answer 10

Mauvais échantillonnage et mauvais transfert de cellules aux chambres (ne pas laisser les cellules adhérer aux parois de la pipette par un transfert trop lent).

Question 11

À quelle densité faut-t’il faire le repiquage :

Answer 11

80-90% de densité.

Question 12

Fonctionnement d’un compteur électronique :

Answer 12

o Suspension bactérienne passe au travers un orifice. Un courant électrique circule de cet orifice et des électrodes, qui sont de part et d’autre de l’ouverture, mesurent la résistance électrique.
o Chaque fois qu’une cellule passe au travers du système, la résistance électrique augmente et la cellule est comptée.

Question 13

Fonctionnement de la colorimétrie :

Answer 13

o Estime nombre de cellules viables.
o Méthode par réduction MTT (très utilisée)
• MTT = colorant jaune soluble dans l’eau, réduit par les c vivantes seulement, en un produit violet insoluble en solution aqueuse.
o AlamarBlue

Question 14

Raisons de l’utilisation de la colorimétrie :

Answer 14

 Analyses cytotoxicité.
 Vérifier stimulation par des facteurs de croissance.
 Optimiser les conditions de culture.
 Quantifier l’apoptose.
 Vérifier l’efficacité d’agents anticancéreux.

Question 15

3 grandes phases du cycle de croissance :

Answer 15

1. Phase de latence ou d’adaptation (lag phase).
2. Phase exponentielle (log phase).
3. Phase stationnaire ou de plateau (phase de plateau).

Question 16

À quoi sert une courbe de croissance :

Answer 16

Permet de prédire des tendances et certains comportements des cultures.

Question 17

Caractéristiques de la phase de latence/adaptation (lag phase) :

Answer 17

o Temps suivant l’ensemencement où le nombre de c reste stable.
o Atteinte du maximum de densité (densité de saturation).
o Les c remplacent les éléments du glycocalyx perdus lors de la trypsinisation.
o Les c s’attachent au substrat et se répandent/diffusent.
• Durant la diffusion : cytosquelette réapparaît; les enzymes, tels que le DNA polymérase, augmentent la synthèse de l’ADN et des protéines de structure.
• Des produits spécialisés peuvent disparaître et ne réapparaîtront qu’à l’arrêt de la prolifération cellulaire, atteinte en haute densité.

Question 18

Caractéristiques de la phase exponentielle (log phase) :

Answer 18

o Mesure du DT (utilisé pour quantifier la réponse des cellules aux différentes conditions de stimulation ou d’inhibition de croissance).

Période exponentielle plus longue peut indiquer une adaptation, une perte de c, une réduction de la densité de saturation…

o Fraction de croissance élevée (90-100%).
o Culture dans sa forme la plus reproductible.
o Meilleur temps pour échantillonner (population au plus uniforme et excellent viabilité).
o La culture devient confluente à la fin de la phase log (taux croissance réduit et parfois, la prolifération cellulaire arrête presque totalement après 1 à 2 autres doublages).

Question 19

Quelles phases donnent des informations vitales concernant la lignée cellulaire :

Answer 19

Exponentielle et plateau.

Question 20

À quoi peut servir le DT :

Answer 20

Quantifier la réponse des cellules aux différentes conditions de stimulations ou d’inhibitions de croissance telles que : les variations de la concentration des nutriments, les effets hormonaux, les substances toxiques, les médicaments etc..

Question 21

Caractéristiques qui influencent la durée de la phase exponentielle :

Answer 21

Densité d’ensemencement
Taux de croissance des cellules
Densité à laquelle la prolifération cellulaire est inhibée par la densité.
(Plus de c au début = croissance moins longue, car ça va prendre moins de temps pour atteindre la densité maximale).

Question 22

Caractéristiques de la phase stationnaire/plateau :

Answer 22

o Atteinte du maximum de densité cellulaire (densité de saturation).
o Croissance réduite (fraction c en croissance de 0-10%).
o Morphologie différentes (plus différenciées et peuvent être polarisées).
o C difficiles à séparer, car plus grande quantité de matrice extracellulaire.
o Moins mobiles et occupent moins de surface.
o Recommencent à produire certaines substances spécialisées.
o C restent vivantes grâce à des produits de réserve.
• Peut y avoir une croissance résiduelle, compensé par la mort de certaines cellules.

Question 23

Quelles cultures vont habituellement atteindre une densité cellulaire plus grande dans la phase de plateau que les cellules normales :

Answer 23

Les cultures qui ont été transformées soit spontanément, soit par des virus ou soit par des produits cancérigènes.

Question 24

Formule de la pente :

Answer 24

Pente = (Log y2 - Log y1) / x2 -x1

Question 25

Formule du DT :

Answer 25

D.T. = log 2 / pente

Question 26

Pour savoir un nombre de c à ensemencer :

Answer 26

N = Ni x 2^n

ou n = nombre de divisions = ΔT2/D.T.