semaine 3

Question 1

Lors de quelles étapes l’intégrité de la protéine peut être perdue?

Answer 1

lors du bris cellulaire ou lors des étapes subséquente de purification

Question 2

Quelles sont les causes de la perte de l’activité d’une enzyme?

Answer 2

• Modifications de la protéines (protéolyse, purification, etc)
• Phénomène physique (liaison aux surfaces, précipitation)

Question 3

Vrai ou faux
On devrait d’abord identifier les principaux paramètres qui affectent la stabilité de la protéine que l’on veut purifier

Answer 3

Vrai

Question 4

Comment peut on prévenir la perte d’activité d’une protéine en controlant le pH?

Answer 4

• Regarder l’influence de la température et de la force ionique sur le tampon
• Capacité du tampon
• interaction possible du tampon avec certains ion étalliques
• Compatibilité du tampon avec les étapes subséquentes de purification

Question 5

Comment peut-on choisir le bon pH?

Answer 5

Faire une étude de stabilité à différents pH

Question 6

Comment peut-on controler la température pour prévenir la perte d’activité de la protéine?

Answer 6

• Lors du bris cellulaire la température peut augmenter
• Toujours refroidir les solutions et l’appareillage

Question 7

Comment peut-on faire pour prévenir la perte d’activité des protéines à cause de la protéolyse?

Answer 7

• ajouter des inhibiteurs de protéases

Question 8

Comment est-il possible de protéger les groupements thiols contre l’oxydation et les métaux lourds?

Answer 8

• inclure du b-mercaptoéthanol ou du dithiothréitol
• Inclure de l’EDTA pour chélater les ions metalliques

Question 9

Que peut-il arriver si une solution est mélangée vigoureusement?

Answer 9

dénaturation par oxydation

Question 10

Comment est-il possible de protéger les protéines contre les radicaux libres?

Answer 10

Inclure des sucres réducteurs comme le glucose

Question 11

Vrai ou faux
Le stress de congélation peut affecter l’activité d’une protéine

Answer 11

Vrai

Question 12

Vrai ou faux
Il est mieux de garder les protéines dans des solutions diluées.
Expliquer

Answer 12

Faux
plusieurs protéines vont vont perdre leur activité lorsqu’elles sont diluées ou vont adhérer aux parois de verre.
Concentrer, ajouter une protéine inerte comme le BSA ajouter du glycérol

Question 13

Vrai ou faux la lyse enzymatique des cellules est souvent effectuée en présence d’un détergent ionique

Answer 13

Faux, non-ionique

Question 14

Quelles sont les avantages et les désavantages de la lyse des cellules par procédé enzymatique?

Answer 14

Avantages :
- Minimise la dénaturation
- Indépendant de la quantité
-Permet une certaine sélectivité dans le relachement des produits cellulaires
Désavantages :
-Beaucoup de variables à tester
- Surtout pour des petits volumes et plusieurs échantillons
- Efficacité moindre donc parfois couplé à une méthode mécanique
$$

Question 15

Quelle est la procédure enzymatique pour les bactérie à gram -

Answer 15

Utilisation du tris et de EDTA pour relacher les LPS et perméabiliser la membrane externe
digestion de la paroi avec lysozyme
cycle gel/dégel
Choc osmotique
utilisation d’un détergent non ionique

Question 16

Selon quoi sont généralement classés les détergents

Answer 16

Leur groupement hydrophile

Question 17

Est ce que ses détergents sont fortement ou faiblement dénaturant? donne un exemple pour chaque
-Anionique
- Cationiques
-non ioniques
-amphotères

Answer 17

• fortement - SDS
• Fortement - CTAB
• Faiblement - triton x-100
  -Faiblement - CHAPS

Question 18

Quelles sont les avantages et désavantages de la lyse des cellules par procédé mécanique?

Answer 18

Avantages:
- Pas d’ajout d’agent chimique
indépendant de l’espèce
- Économique à l’emploi
Désavantages:
-force mécanique se traduit en chaleur
- Peut provoquer la formation de broue (oxydation)
- Relachement de l’ADN chromosomique

Question 19

Quels facteursinfluencent l’efficacité lors de la lyse des cellules par agitation avec des billes de verre ou de zirconium?

Answer 19

-concentration des cellules
- Vitesse d’agitation
- Durée d’agitation
-Concentration des billes
- Diamètre des billes

Question 20

Quels facteurs influence la lyse des cellules par agitation avec un abrasif?

Answer 20

-opérateur
-pénible
-petits échantillons seulement
- Plus douce des méthodes mécanique s

Question 21

Comment fonctionne la presse de French?

Answer 21

Passage rapide d’une très forte pression à la pression atmosphérique fait éclater les cellules

Question 22

Vrai ou faux
La lyse des cellules par presse de French est peu efficace

Answer 22

Faux

Question 23

Quel est le désavantage de la presse de French?

Answer 23

Appareil fragile lourd et encombrant

Question 24

Quels sont les avantages de l’emulsiflex par rapport à la presse de French?

Answer 24

Peu de pièce mobile
moins fragile
Simple et efficace

Question 25

Qu’est ce que la sonication?

Answer 25

Bris des cellules généré par des pulses intenses d’ultra-sons

Question 26

Quels sont les avantages et inconvénients de la sonication

Answer 26

• brise l’ADN en petit fragments

-Efficace pour de petits volumes surtout
-rechauffe l’échantillon rapidement