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Biomol > 8. Técnicas de biología molecular > Flashcards

8. Técnicas de biología molecular Flashcards

1
Q

Sirve para diagnósticos de bacterias o virus

A

PCR en tiempo final

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2
Q

Proceso de PCR en tiempo final

A

Proceso de termociclado, se toman fragmentos de 200 pb para que se vea.
Con temperatura elevada (94) se separa, baja temperatura se unen primers (72°), baja temperatura y se une polimerasa, termina ciclo y todo de nuevo

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3
Q

dNTPs

A

Nucleótidos de óxidos para que la polimerasa arme el ADN, se encuentran libres en la prueba PCR

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4
Q

Enzima taqpolim

A

Taq polimerasa, aguanta la temperatura para que funcione

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5
Q

Ciclos en PCR de termociclado

A

Normalmente 40 ciclos.
Entre más energía libre de gibbs es la probabilidad de que sí se amplifiquen

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6
Q

Después de PCR qué haces

A

Electroforesis, tiene que ser del tamaño que diseñaste, se utilizan marcadores de peso molecular para saber

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7
Q

Bromuro de etidio

A

Carcinogénico, se une intercalado en el DNA, es lo que brilla

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8
Q

RFLP

A

Fragmentos de restricción de longitud polimórfica

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9
Q

Cómo funciona la RFLP

A

Enzimas de restricción que cortan el ADN, cortan secciones palindrómicas
Eco: ecoli
R: rest
1: 1°

Pones la sección en donde está la mutación, si no está sólo una línea, si está 2, si tienes una y una 3

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10
Q

Prueba para anemia falciforme

A

RFLP:
mutación específica, glu por val

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11
Q

RFLP con 3 alelos

A

Te ayuda a determinar el genotipo que tienes
Puede ser 1/1, 1/2, 1/3, 2/2, 2/3, 3/3

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12
Q

Prueba para diagnóstico de Huntington

A

RFLP
Con cada replicación aumenta el número de repeticiones, va a ser más pesada la cadena.

Normal: 18 repeticiones
Mutante: 48 repeticiones

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13
Q

Microsatélites

A

DNA satélite no codifica pero es útil para identificar

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14
Q

Para qué sirven los microsatélites

A

Determinar quién se quedó con qué parte del DNA

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15
Q

DNA fingerprinting

A

Se usan microsatélites del DNA que quieres comparar con otros DNAs sospechosos.
Ej: papá o asesino

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16
Q

Southern Blot

A

Lee DNA, ayuda a detectar mutaciones en caso de que no haya un sitio específico de corte para la mutación

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17
Q

Proceso de southern blot

A

Se pone el DNA con enzimas de restricción (endonucleasa), se hacen fragmentos, se electroforisa, se pone en un gel y se pasa a un papel de nitrocelulosa, se lava y se pone con un isótopo radioactivo con DNA complementario al gen de interés, se toma una placa y se obtiene el resultado

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18
Q

rt PCR

A

Semicuantitativo: te mide pixeles, dice si hay más pero no cuánto más

Ayuda a medir niveles de RNA por la transcriptasa reversa

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19
Q

qPCR

A

Cuantitativa

BHQ: quita luz
R: brilla

También se puede hacer RT-qPCR

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20
Q

Proceso de qPCR

A

Se toman los datos del amplification plot, se convierte en curva estándar de cantidad, y se hace una melt curve, después se toma la expresión de cada gen, se cuenta y se obtiene el resultado

21
Q

Quién quita la luz en el qPCR

A

el quencher (blackhole quencher)

22
Q

Prueva COVID PCR qué PCR es

A

PCR cuantitativa
qPCR

23
Q

Northen blot

A

Ve RNA, detecta expresión del gen, es semicuantitativo

24
Q

Proceso Northen blot

A

Se mete el RNA, electroforesis, se pasa a un filtro y se pone un isótopo radioactivo, se pasa el filtro y se toma una placa

25
Q

Control del northen blot

A

Expresión de actina, para que veas que fue igual en todos

26
Q

Microarreglos

A

Se ponen arreglos en una placa de pozos y se ponen muestras de dos RNA, se hace transcripción reversa y se compara el DNA generado por los dos
Puede ser de dos RNA separados o un RNA pero en distinto tiempo

27
Q

Western blot

A

Detecta proteínas, tamaño en kDa (kilodaltons), es de lo más usado en el mundo.
Las proteínas pueden ser+,-,o

Gel : poliacrilamida, bisacrilamida, son neurotóxicos
Tinción: azul de coomasie

Semicuantitativo

28
Q

Proceso western blot

A

Se ponen las proteínas, se pasan a un filtro, se exponen a anticuerpos (1° se une, 2° peroxidasa de rábano),
Luminol funciona hasta que actúa la peroxidasa, es lo que se ve en la foto gris

Lo rosa: rojo de Punzau

29
Q

Se usa mucho en VIH

A

Western Blot

30
Q

Electroforesis en segunda dimensión

A

Se tiñen con plata, dependiendo del pH y pK, las proteínas se quedan en un momento de la hoja, por lo que se pueden separar proteínas específicas

31
Q

ELISA

A

Semicuantitativa: puede ser directa, indirecta o sándwich

En la directa no se puede usar suero del paciente

Se hace en tripletes

32
Q

Dot blot

A

Elisa + western blot

33
Q

Proceso dot blot

A

Se pone la proteína, se une a membrana, se meten anticuerpos, se da un color
Es semicuantitativa

34
Q

Secuenciación

A

Se compara DNA de base/referencia con un DNA de una persona para detectar mutaciones

35
Q

Proceso de secuenciación

A

Fragmentación de DNA, se hace PCR, cada nucleótido da una señal, se hace un electroforograma
Es más específica pero más cara

36
Q

Electroforograma

A

Secuenciación, fragmentos de DNA ampliados por PCR, cada nucleótido da una señal

El electroforograma es la manera en que se muestran los resultados de la secuenciación

37
Q

Anomalías cromosómicas

A

Deleción, duplicación, inversión, sustitución, traslocación

38
Q

Pruebas de citogenética

A

Sirven para ver el cariotipo, se ven en blanco y negro, se hace una tinción

39
Q

ALL: leucemia linfoide aguda

A

En el cariotipo se ve el cromosoma filadelfia: sustitución 22/9 (traslocación)

40
Q

Citogenética más utilizada

A

Bandas G (por tinción Gimsa)

41
Q

Uso de tripsina en citogenética

A

La tripsina degrada proteínas y tiñe al cromosoma
Los colorantes son afines al DNA, se tiñen más si están más condensados

42
Q

Citogenética: Bandas C

A

Las bandas C tiñen heterocromatina

43
Q

Bandas R

A

Lo contrario a bandas G.
Se tiñe lo opuesto a lo que se tiñe en la banda G

44
Q

FISH

A

Sonda complementaria con fluorescencia.
Se pintan los cromosomas de acuerdo con lo que se busca:
- Normal: 2 rojos, 2 verdes
- Traslocación robertsoniana en leucemia: se ven 1 rojo, 1 verde y 2 amarillos

45
Q

Tinción en FISH

A

Puede ser pericentromérica o pancentromérica
En fluorescencia se tiñe DNA con azul “DAPi”

46
Q

Cariotipo espectral

A

A cada cromosoma se le da un color. Si hay alteraciones se combinan los colores

47
Q

CGH: arreglo citogenético

A

Se usa para deleciones y duplicaciones.
Si se va más hacia el lado del paciente es una duplicación, si se va más hacia el control es una deleción.

48
Q

MLPA

A

Se utiliza para duplicaciones o deleciones. Ayuda a detectar mutaciones concretas

Tiene varios pasos:
1. Denaturalización
2. Hibridación (con MLPA probes y buffer)
3. Ligado (se añaden ligasas)
4. Amplificación con PCR
5. Separación de fragmentos dependiendo de su tamaño. Se mide con un electroferograma
6. Análisis de la información

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