Métodos de secuenciación de genes Flashcards
¿En qué año surgió la secuenciación completa del genoma humano?
1985
¿Qué es la secuenciación de Sanger?
Secuenciación del ADN basándose en la terminación del alargamiento de la cadena durante la síntesis por medio de di-desoxinucleótidos.
¿Cómo es el método de secuenciación por síntesis Seq Ilúmina?
- Se corta el DNAg en pedazos y se une a adaptadores en los extremos 3’ y 5’. (Tagmentación)
- Las hebras se separan y se ponen en una superficie cubierta con imprimaciones que se adhieren como “briznas de hierba”
- Cada cadena se adhiere al primer y se amplifica por PCR
- Método PCR puente
- se separa y da dos hebras
Los adaptadores de PCR son:
Secuencias cortas que se hibridan con primers de PCR complementarios para amplificar.
Permiten la unión con el chip de los fragmentos de DNA a amplificar:
Adaptadores
¿Qué es el método PCR puente?
La cadena alargada de DNA sólo está anclada de un lado, y el otro está libre para unirse con un primer casi complementario
¿Cuál es el resultado de Seq ilúmina?
Pequeño grupo de productos de PCR idénticos, que sirven como templados de secuenciación.
Como cada nucleótido tiene un fluoruro específico, aparece una señal fluorescente en:
Donde se incorpora un nucleótido en particular.
¿Cuál es el mecanismo de la secuenciación de torrente de iones (semiconducción)?
- Los adaptadores de PCR se adhieren a cuentas microscópicas cuando el DNA se diluye y se mezcla con cuentas.
- Se añaden reactivos de PCR y mezcla emulsionada con aceite
- Las cuentas se dispersan en pequeñas cámaras de chip (aquí es la secuenciación)
- Cada que se una un nucléotido a la cadena complementaria, habrá una variación de PH por un micro pozo detectado por un semiconductor.
¿Cuál es la función de la emulsión?
Mantiene cada cuenta en su pequeño compartimento de agua, donde se lleva a cabo la reacción de PCR
¿Cuál es el mecanismo de secuenciación de una sola molécula de DNA?
- Cada nucleótido con una sonda fluorescente se agrega al chip, se libera una señal.
- Terminadores reversibles + detector óptico que convierte la señal fluorescente en electrónica
¿Cuál es el mecanismo de secuenciación de nanoporos?
Para lecturas muy largas
- DNA monocatenario reconocido por proteína motora, a través de proteína transmembrana
- Cada que pasa un nucleótido a la membrana, cambia la conductancia de esta
¿Cuál es el inconveniente de la secuenciación por nanoporos?
Los nucleótidos pueden pasar sin detección, nucleótidos fantasma
