3. Imuno-histoquímica

Question 1

para que servem análises imuno-histoquímicas?

Answer 1

detetar a presença de marcadores de proteínas especificas

Question 2

o que se consegue ver com análises imuno-histoquímicas?

Answer 2

• morfologia das células
• sinalização celular
• mecanismos da célula
• localização de proteínas

Question 3

em análises imuno-histo o staining vem depois de que parte?

Answer 3

sectioning

Question 4

quais são os passos a seguir para fazer uma análise imuno-histo?

Answer 4

1. retirar a parafina e reidratação
2. antigen retrival
3. blocking
4. coloração
5. contracoloração (se necessário)
6. stabilizing with mounting medium
7. Ver a coloração ao microscópio

Question 5

como é retirada a parafina e feita a reidratação?

Answer 5

imersão da parafina num solvente em que ela é solúvel (xileno) e mergulha-la em solventes decrescentes de álcool

Question 6

o que é antigen retrival?

Answer 6

é um método de fixação dos tecidos, que bloqueia a ligação na epitope a outras proteínas, restauranto a epitope-antybody

Question 7

que tipos de antigen retrival há? e quais as diferenças?

Answer 7

HIER (+ comum) e PIER

a HIER é induzida por calor, altamente sensível a pH, temperatura, tempo e buffer

a PIER é induzida por proteoloticos como as proteínas K, trypsin e pepsin, a amostra é inculada só a 37ºC

Question 8

para que é usado o blocking?

Answer 8

para minimizar ligações nao especificas a anticorpos

Question 9

em que se baseia a coloração imuno-histo?

Answer 9

na seleção de anticorpos que reagem com antigenes marcados

Question 10

qual é a diferença entre coloração direta e indireta

Answer 10

Direta:
- 1 passo
- lig direta entre o anticorpo e o antigénio especifico
- sinal fraco
- mais caro (anticorpos diretos marcados)

Indireta:
- multi-passos
- um anticorpo primário não marcado liga-se ao antigen
- um segundo anticorpo liga-se ao primeiro, este já está marcado e pode ser menos especifico
- mais barato

Question 11

em que consiete o labelling de anticorpos?

Answer 11

em marcá-los com um reagente flourescente ou cromogénico

Question 12

no caso do sinal ser muito fraco o que se faz?

Answer 12

tecnicas de amplificação do sinal, criando várias ligações
- Avindin - biotin complex (ABC): 4 binding sites, tradicional
- labelled streptavindin - biotin (LSAB): complexo mais pequeno
- palymer- based: menos passos

(todos métodos indiretos e estão por ordem crescente de sensibilidade)

Question 13

para que serve a contracoloração?

Answer 13

para dar info morfológica adicional

Question 14

para que serve staining with mounting medium?

Answer 14

estabiliza, aumenta a fluorescência e reduz o photobleaching

Question 15

sistemas de classificação de neoplasias são baseados em quê?

Answer 15

• prognóstico (benigno, maligno e borderline behavior)
• histopenico (epitelial, conectivo, muscular, neural,..)
• TNM

Question 16

em que se baseia a classificação de tumores TNM

Answer 16

T - tamanho do tumor
N - nodulos linfaticos
M - metastases

Question 17

na classificação TNM quantos níveis há em cada?

Answer 17

T: 1 - 4 (quando rompe a pele e se cola
N: 0 - 3 (nodulos muito inchados)
M: 0 - 1 (tem metastases)

Question 18

que outros sistemas de classificação de neoplasias é que há? tirando o TMN

Answer 18

Nottingham grading system: mais usado para cancro da mama (notas de 1 a 3)
- glandular
- nuclear pleomorphism
- mitose

FIGO grading system: cancro cervical (stage I a IV): nota de 1 a 3

Wilms tumor staging: cancro do rim (nota de I a V)

Gleason’s score: prostata (nota de 1 a 5)

Question 19

qual é a origem de coleta de um biospecimen de amostras histológicas?

Answer 19

biopsias, autopsias, necropsias

Question 20

qual é a origem de coleta de um biospecimen de amostras citológicas?

Answer 20

urina, sangue, fluidos, …

Question 21

qual é a utilidade da histologia?

Answer 21

• dá info sobre sistemas vivos
• diagnóstico e stagiamento
• prognóstico
• seleção de tratamentos
• descoberta de drogas
• determinar caucas da morte

Question 22

de que é que dependem as análises histológicas?

Answer 22

• tipo de amostra
• quantidade de cortes preparados
• info adicional como a dada na anamnese
• corte representativos
• limitação dos equipamentos disponíveis
• resolução dos microscópio

Question 23

que estratégias complementares à histo-patologia existem?

Answer 23

• reconstrução 3D
• microscopia de flourescencia
• Microscopia eletronica
• Atomic force microscopy
• estratégias computacionais

Question 24

porque é que a recontrução 3D é util?

Answer 24

porque os cortes feitos podem não ser representativos de todo o tecido e é difícil analisar vários cortes em separado

Question 25

é suficiente preparar cortes sequenciais de aplicar volume redenring methods?

Answer 25

NO, o tecido pode estar deformado, podendo tb estar associados a diferentes ângulos de rotação

Question 26

há necessidade de alinhar os cortes para análise?

Answer 26

sim

Question 27

o que torna possivel a reconstrução 3D?

Answer 27

- identificar ROI - quantificar o tanhamos de tumores - ter conhecimento da dimensões 3D

Question 28

quais são as desvantagens da reconstrução 3D?

Answer 28

- alto custo - computacional power - ficheiros pesados - tendencia de se perder a amostra que pode vir a ser necessária

Question 29

o que permite a microscopia de fluorescencia?

Answer 29

identificar moléculas biológicas especificas, através de um corante especifico permite a expressão de multiplos biomarcadores na mesma imagem (diferentes cores), mas os espectros da cores não devem se sobrepor, e é boa prática que o corante menos intenso signifique menos quantidade

Question 30

Porque é que a microscopia eletronica e util?

Answer 30

porque há estruturas que não se conseguem ver com microscopia otica

Question 31

quais os 2 tipos de microscopia eletronica?

Answer 31

SEM (3D) e TEM (2D)

Question 32

quais são as denvantagens a EM face à otica?

Answer 32

- máquinas maiores, - usa feixes de eletões - funciona no vacuo - só estuda organismos mortos ou secos - cor preta e branca - a amostra tem de ser muito fina - caro

Question 33

a SEM baseia-se na deteção de eletrões transmitidos?

Answer 33

NAO, na dispersão de eletões

Question 34

A TEM baseia-se na deteção da dispersão de eletrões?

Answer 34

NÃO, na deteção da transmissão dos eletões

Question 35

A AFM (atomic force microscopy) gera imagens 3D?

Answer 35

Sim

Question 36

quais as vantagens da AFM face à EM?

Answer 36

- nao requer vacuo - não é necessário uma preparação intensiva da amostra - permite medir a força de adesão, forças magnéticas e propriedades mecânicas

Question 37

Quais são as vantagens do uso de tencicas de computação?

Answer 37

- diminui o trabalho de lab - minimiza o erro humano - permite diagnosticos mais rápidos

Question 38

quais são as esvantagens do uso de tecnicas computacionais?

Answer 38

- Alto poder computacional - é necessária uma grande validação dos métodos de preveem outcomes - são necessárias equipas multidisciplinares