5-manipulation de l'ADN Flashcards
v ou f : l’ADN est un polymère
Vrai
En fonction de quoi varie la taille de l’ADN?
du nombre de nuclotide
Décrivez la charge de l’ADN
forte charge négative (chargé et peu de groupement hydrophobe)
Comment (conditions) varie la solubilité de l’ADN en solution?
selon les conditions saline et presence de substance organique dans l’eau
Comment est-ce qu’on précipite généralement l’ADN?
avec de l’éthanol (isopropanol)
Donne deux raisons pour lesquelles on précipiterait l’ADN?
pour le concentrer ou changer son tampon
Donne un protocole typique de précipitation d’ADN (ethanol)
-l’ajout de 2.5 volumes d’éthanol et 0.25M d’acétate de sodium
à une solution contenant de l’ADN
- la solution est ensuite mise à -20°C pendant au moins 30 minutes
et l’ADN est récupéré par centrifugation à 10,000 rpm pendant 10
minutes à 4°C dans une microcentrifugeuse
- une certaine quantité de sels sera aussi précipité avec l’ADN. Des lavages
subséquents avec de 70% l’éthanol permettra de les enlever
Expliquez la méthode de partition de phase (extraction de l’ADN)
les acides nucléiques sont retrouvés
dans la phase aqueuse et les protéines, pour la plupart dénaturées, partitionnent(se séparent)
dans le phénol, la phase plus dense, et à l’interface des deux phases
sur quel phénomène se base le principe de partition de phase (extraction de l’ADN)
polarité des solvants (eau et phenol)
Donnez le protocole typique de précipitaton (extraction au phenol)
-Agiter doucement 1 vol du phénol neutralisé avec 1 vol de la solution contenant de l’ADN et extraire 2 fois
-éliminér les traces résiduelles de phénol par extraction avec du chloroforme immédiatement après
-(le pH du phénol doit d’abord être ajusté à un pH autour de 8 - l’ADN est partiellement soluble dans le phénol acide)
À quoi servent les protéases dans l’extraction au phenol?
servent a dégrader les protéine pour faciliter leur extraction du phenol
Lors de l’utilisation de la méthode de partition de phase, à quoi sert le chloroforme et comment est-il éliminé ?
il sert à enlever les trace de phénol et il est éliminé par précipitation avec l’éthanol
Définir la température d’hybridation des amorces
température qui détermine la stabilité de l’hybride une fois l’appariement amorse/matrice fait
De quoi dépend la température d’hybridation des amorces (PCR)?
-longueur des amorces (+ c’est long, + T élevé)
-Composition en nucléotides (+ ya des C/G, +T est élevé)
Donne la température de polymérisation optimale de la Taq polymérase
72 degrés
V ou F : tous les ADN polymérase sont identiques
Faux
V ou F : on ne peut pas utiliser l’électrophorèse sur gel pour les acides nucléiques
Faux, ce sont des molécules chargées
Quel est le gel utilisé pour l’électrophorèse des acides nucléiques et pourquoi?
le gel d’agarose, les acides nucléiques pénètre difficilement le polyacrylamide (marche juste avec petit acides nucléiques- peu de nucléotides-quelques centaines)
De quoi dépend la séparation de l’ADN dans un méthode d’électrophorèse?
de la masse moléculaire de l’ADN, donc aussi de la taille des fragments d’ADN
Par quoi et comment sont coloré les bande d’ADN dans la méthode d’électrophorèse?
par bromure d’éthidium (molécule aromatique) qui s’intercale entre les base
V ou F : il est possible d’utiliser les même techniques de chromatographie utilisé pour purifier les protéines pour la purification des acides nucléiques
Vrai
Quelle est la particularité de la chromatographie par échange d’ions pour l’ADN/ARN?
on doit utiliser un échangeur anionique pcq A.N = charge négative
Dans quel cas la filtration dur gel des acides nucléiques est-elle utilisé?
surtout utilisée pour déssaler des oligonucléotides
À quoi sert la chromatographie d’affinité pour les acides nucléiques?
utilisé pour purifier les ARNm des cellules eucaryotes
