Chapitre 2 : Culture et Fractionnement

Question 1

Quel est le but des cultures cellulaires ?

Answer 1

Comprendre le fonctionnement cellulaire
Aider au diagnostic
Créer des outils thérapeutiques

Question 2

Quel est le but du fractionnement cellulaire ?

Answer 2

Désorganiser les cellules

Isoler les organites

Question 3

Quelles sont les 2 grandes sources de cellules ?

Answer 3

Les cellules isolées dans les liquides biologiques (ex : sang)
Les cellules d’organes

Question 4

Quelles sont les 3 étapes d’isolement pour obtenir une cellule eucaryote animale ?

Answer 4

Dissociation (si organes)
Séparation
Mise en culture dans un milieu approprié

Question 5

Quelles sont les différentes dissociations possibles ?

Answer 5

Par dissection
Par dissociation enzymatique
Par dissociation mécanique

Question 6

Décrire la dissection (dissociation)

Answer 6

Fragmentation des organes en morceaux de 1 à 4 mm3 = explants
Flacon de culture dans un milieu nutritif
Les cellules vont se multiplier et migrer

Question 7

Quels sont les inconvénients d’une dissection ?

Answer 7

La lenteur

Le flacon de culture peut être envahi par des cellules non désirées

Question 8

Décrire la dissociation enzymatique

Answer 8

Tissus en contact avec enzymes protéolytiques qui vont digérer la MEC
Méthode rapide

Question 9

Quels sont les inconvénients de la dissociation enzymatique ?

Answer 9

Les cellules peuvent être altérées par les enzymes

Question 10

Quelles sont les enzymes protéolytiques de la dissociation enzymatique ?

Answer 10

La trypsine
La collagénase
La pronase

Question 11

Décrire la dissociation mécanique

Answer 11

Uniquement pour les tissus mous *

Les tissus sont dilacérés à la pipette par des cycles d’aspiration et de refoulement

Question 12

Quelles sont les 4 méthodes de séparation de différents types cellulaire ?

Answer 12

La centrifugation
La capacité d’adhérence
La cytométrie en flux
Piégeage par billes magnétiques

Question 13

Décrire la centrifugation

Answer 13

Séparation en fonction de la taille et de la densité des cellules

Question 14

Décrire la technique basée sur la capacité d’adhérence

Answer 14

Le verre et le plastique

Des matrices recouvertes d’anticorps spécifiques des types cellulaires que l’on veut isoler

Question 15

Décrire la cytométrie en flux

Answer 15

Les différents types cellulaires possèdent des molécules (marqueurs de surface distincts)
Cellules spé = reconnues par un anticorps couplé à des agents fluorescents
Les cellules reconnues vont fluorescer
Un détecteur reconnaît la fluorescence et attribut des charges + aux cellules spé
Champ électrique qui isole les cellules spé
Plusieurs milliers e cellules par seconde

Question 16

Décrire le piégeage par des billes magnétiques

Answer 16

Anticorps spé fixés sur billes magnétiques
Complexe cellule-bille magnétique
Aimant qui retient les cellules reconnues par les billes magnétiques
Lavages successifs
Aimant décroché = récupération des cellules

Question 17

Quels sont les différents types de culture ?

Answer 17

Les cellules en suspension
Les cellules adhérentes
Les cultures primaires

Question 18

Qu’est-ce que les cultures de cellules en suspension ?

Answer 18

Pas de support pour survivre
Que certains types de cellules (sanguines, de lignée continue)
Facile à récupérer par simple centrifugation

Question 19

Qu’est-ce que les cultures de cellules adhérentes ?

Answer 19

Support obligatoire
Verre, plastique traité, plastique recouvert de MEC
Cellules difficiles à récupérer (grattage ou enzymes)
Réalisent une monocouche

Question 20

Qu’est-ce que les cultures primaires ?

Answer 20

Prélevées des organes puis dissociation et séparation
Mise en culture avec milieu approprié
Prolifération jusqu’à confluence (se touchent)
Inhibition de contact

Question 21

Comment s’appelle l’étape de prolongement de la culture, où il est nécessaire de prélever les cellules à confluence et de les répartir ?

Answer 21

Le repiquage

Question 22

A partir du premier repiquage, on ne parle plus de culture primaire mais de ?

Answer 22

De subculture

Question 23

Quelles sont les caractéristiques des cellules issues de cultures primaires ?

Answer 23

Caractéristiques proches des cellules présentes dans les tissus
Caractère non tumoral
Support obligatoire
Inhibition de contact

Question 24

Quels sont les inconvénients des cellules issues de culture primaire ?

Answer 24

Perte possible d’expression des gènes
Variation dans l’expression d’un gène
Durée de vie limitée
Faible quantité de cellules obtenues

Question 25

A quoi oppose t-on les cellules primaires ?

Answer 25

Les lignées cellulaires

Question 26

Comment sont obtenues les lignées cellulaires ?

Answer 26

Après plusieurs repiquages

Question 27

Quelles sont les caractéristiques des cellules issues de lignées cellulaires ?

Answer 27

Grande quantité de cellules obtenues

La capacité de se multiplier

Question 28

Quels sont les 2 types de lignées cellulaires ?

Answer 28

Durée de vie limité

Continues

Question 29

Qu’est-ce que les lignées cellulaires à durée de vie limitée ?

Answer 29

Nombre de repiquage limité (entre 20 et 80)
Vieillissement
Les cellules se multiplient (sénescence)
Mourir

Question 30

Qu’est-ce que les lignées cellulaires continues ?

Answer 30

Immortelles
Transformation : mutations spontanées ou manipulation génétique 
Perte de l'inhibition de contact
Perte de la dépendance au support 
caractéristiques des cellules tumorales

Question 31

Quelles sont les bonnes conditions de culture ?

Answer 31

Apport d’éléments nutritifs
Maintien des conditions physico-chimiques appropriées
Apport de facteurs de croissance

Question 32

Quelles sont les caractéristiques d’un milieu de culture de base ?

Answer 32

Stérile 
Constituants minéraux 
Substances énergétiques 
AA
Vitamines 
Sérum de veau foetal SVF à 10 ou 20% (hormones, vitamines, facteurs de croissance, fibronectine)

Question 33

Quelles sont les caractéristiques d’un milieu synthétique non défini ?

Answer 33

Milieu de culture de bas associé au sérum

Addition de sérum

Question 34

Quelles sont les caractéristiques d’un milieu synthétique défini ?

Answer 34

Milieu de culture de base sans addition du sérum
Addition de :
Facteurs de croissance 
Transferrine 
Albumine 
Fibronectine ou collagène

Question 35

A quel niveau se fait le maintien du pH sanguin ?

Answer 35

Entre 7,2 < pH < 7,4

Question 36

Que peut-on utiliser pour réguler le pH ?

Answer 36

Des systèmes tampons : bicarbonate (alcaliniser) et CO2 ( acidifier)

Question 37

A quelle température l’enceinte doit être régulée ?

Answer 37

A 38° ou 39°

Question 38

Fractionnement : quelles sont les 2 étapes pour obtenir les organites ?

Answer 38

Briser les tissus ou les cellules : homogénéisation

Isoler les organites : isolement

Question 39

Qu’entraîne l’étape d’homogénéisation ?

Answer 39

La rupture des membranes de certains organites

Question 40

Lors de l’homogénéisation, quels organites ne perdent pas leur membrane ?

Answer 40

Le noyau et les mitochondries

Question 41

Quel est le principe de l’homogénéiseur ?

Answer 41

On applique un cisaillement au matériel biologique en le faisant passer au travers d’un espace très fin

Question 42

Quel est le principe du broyeur ?

Answer 42

Le déchiquetage des tissus grâce à des lames rotatives qui tournent à grande vitesse

Question 43

Quel est le principe de la sonication ?

Answer 43

Une tige métallique qui est plongée dans le liquide contenant les cellules isolées qui émet des ultrasons qui vont provoquer la lyse des cellules

Question 44

A combien de degrés se font les cycles de congélation-décongélation ?

Answer 44

• 20°C

Question 45

Par quoi sont représentées les vitesses de sédimentation ?

Answer 45

Par le coefficient de sédimentation, en unités Svedberg