cours 4

Question 1

vrai ou faux
une seule purification lors de centrifugation est suffisante

Answer 1

faux
le composé peut ne pas être pur donc il faut faire une combinaison de plusieurs méthodes de purification

Question 2

chromatographie

Answer 2

Ensemble de méthodes qui assurent la séparation des constituants d’un mélange en
utilisant deux phases non miscibles

Question 3

phase stationnaire

Answer 3

immobile choisie pour sa grande affinité pour les divers solutés
liquides, gazeuses ou solides

Question 4

phase mobile

Answer 4

entraîne les divers solutés le long de la phase stationnaire
liquides, gazeuses

Question 5

sur quoi repose la séparation

Answer 5

sur l’affinité des substances pour la phase stationnaire
(ou la phase mobile)

Question 6

que signifie une grande affinité pour la phase stationnaire

Answer 6

Migration + lente

Question 7

que signifie une petite affinité pour la phase stationnaire

Answer 7

Migration + rapide

Question 8

sur quoi influence l’affinité des molécules

Answer 8

sur leur solubilité différente dans chaque phase (phase liquide ou aqueuse)
sur leur adsorption (et désorption) sur la phase stationnaire (phase solide)

Question 9

classification des chromatographies

Answer 9

A) Selon l’état des phases
B) Selon le mode d’immobilisation de la phase stationnaire
C) Selon le principe des interactions entre les solutés et la phase stationnaire
D) Selon les modalités de migration de la phase mobile

Question 10

classification selon l’état des phase

Answer 10

toujours se fier à la phase mobile pour déterminer l’état des phases

Question 11

classification selon le mode d’immobilisation de la phase stationnaire

Answer 11

phase stationnaire immobilisée par l’étendue sur une surface plane : chromatographie de surface ou soit à l’intérieur d’une colonne :
chromatographie sur colonne

Question 12

classification selon le principe des interactions entre les solutés et la phase stationnaire

Answer 12

adsorption
partage
échange d’ions
filtration sur gel
affinité
interactions hydrophobes
chélation

Question 13

adsorption

Answer 13

liaisons de faibles énergies assurant la fixation des solutés à la phase stationnaire.

Question 14

partage

Answer 14

solubilisation différentielle des solutés entre phases mobile et stationnaire liquides.

Question 15

échange d’ions

Answer 15

liaisons ioniques entre les charges du soluté et de la phase stationnaire.

Question 16

filtration sur gel

Answer 16

(pas de liaison) diffusion/exclusion des solutés dans une phase stationnaire solide
poreuse

Question 17

affinité

Answer 17

interactions biospécifiques (E-S, Ag-Ac) entre les solutés et la phase stationnaire porteuse d’un ligand

Question 18

INTERACTIONS HYDROPHOBES

Answer 18

liaisons hydrophobes entre la phase stationnaire et les solutés.

Question 19

chélation

Answer 19

liaisons entre un métal divalent (phase stationnaire) et les solutés porteurs de doublets d’É libres

Question 20

classification selon les modalités de migration de la phase mobile

Answer 20

chromatographie par élution
chromatographie par déplacement

Question 21

chromatographie par élution

Answer 21

-Sortie des solutés de la phase stationnaire grâce à un éluant ajouté à la phase mobile
(solvants/tampons)
- Variation brusque ou continue de la concentration ou composition de l’éluant
- Brise les interactions solutés/phase stationnaires (force ionique, polarité)

Question 22

chromatographie par déplacement

Answer 22

• Maintien des solutés dans la phase stationnaire (déplacement)
• Révélation des solutés présents dans la phase stationnaire (coloration ou autre)

Question 23

chromatographie sur couche mince (phase liquide)

Answer 23

phase stationnaire fixée sur une plaque généralement polaire
phase mobile migre par capillarité et moins polaire
Chaque composant se déplace à sa propre vitesse derrière le front de solvant

Question 24

comment se fait la rétention des solutés par la phase stationnaire

Answer 24

surtout par adsorption par forces électrostatiques (et solubilité)

Question 25

calcul du rapport frontal pour chaque composé séparé

Answer 25

𝑅𝑓 = 𝑑 (𝑠𝑜𝑙𝑢𝑡é)/ 𝐷 (𝑠𝑜𝑙𝑣𝑎𝑛𝑡)

Question 26

Rf faible

Answer 26

molécule très hydrophile lien avec la silice donc très polaire

Question 27

Rf élevé

Answer 27

molécule très hydrophobe car se solubilise dans le solvant

Question 28

application de la CCM

Answer 28

Permet un contrôle facile et rapide de la pureté d'un composé organique. * Très utile pour rechercher le meilleur solvant avant d'entreprendre une séparation par chromatographie sur colonne

Question 29

révélation de la CCM

Answer 29

directe ou indirecte

Question 30

révélation de la CCM directe

Answer 30

Pour substances naturellement colorées

Question 31

révélation de la CCM indirecte

Answer 31

UV (230-365 nm) pour composés absorbants dans cette région - Révélateurs chimiques (méthode destructive) - Parfois les deux

Question 32

chromatographie sur colonne

Answer 32

filtration sur gel affinité hydrophobe échanges d'ions

Question 33

chromatographie par filtration sur gel synonyme

Answer 33

Gel-filtration Chromatographie d’exclusion Tamis moléculaire tamisage moléculaire

Question 34

chromatographie par filtration sur gel

Answer 34

Méthode de séparation basée selon la taille des solutés qui utilise un tamis moléculaire. * Phase stationnaire: microbilles poreuses. * Séparation basée sur la capacité des différentes molécules à diffuser dans les pores * Aucune liaison moléculaire entre le soluté et la phase stationnaire

Question 35

Vo

Answer 35

Les solutés >> limite d’exclusion sont éluées dans le volume mort

Question 36

Velution

Answer 36

Dans la zone de séparation, les molécules sont éluées en fonction de leur PM

Question 37

Vtotal

Answer 37

Les molécules de plus petites tailles sont éluées dans un volume égal ou supérieur au volume total du gel

Question 38

coefficient de partage (Kav)

Answer 38

Le soluté est distribué entre l’eau interne et l’eau externe

Question 39

K=0

Answer 39

le soluté est totalement exclu

Question 40

0 < K < 1

Answer 40

le soluté est partiellement inclus

Question 41

K = 1

Answer 41

valeur théorique (inclusion totale)

Question 42

K > 1

Answer 42

le soluté est inclus et adsorbé

Question 43

chromatographie d'affinité

Answer 43

Repose sur l’interaction spécifique entre deux molécules (affinité) * Le soluté à séparer se fixer réversiblement à un ligand spécifique attaché à une matrice insoluble (covalent) * Ex: anticorps sur matrice, liaison spécifique avec antigène à purifier

Question 44

exemples d'application de la chromatographie d'affinité

Answer 44

enzyme-substrat, anticorps-antigène, ligand-récepteur... GÉNÉRALEMENT EN CONDITIONS NON-DÉNATURANTES

Question 45

élution

Answer 45

Gradient de pH ou force ionique croissante (continu ou discontinu) - Gradient de ligand avec plus forte affinité (compétition)

Question 46

que nécessite la chromatographie d'affinité

Answer 46

Nécessite une connaissance préliminaire de la structure et de la spécificité biologique du composé à purifier OU * Utilisation d’étiquettes protéiques (tags) via génie génétique

Question 47

IMAC

Answer 47

Affinité entre protéine et atome métallique Résine populaire: Ni-NTA (6 liens de coordination (partage d’É) Utilisation d’étiquette 6xHis-tag * Élution via imidazole (ou pH <6)

Question 48

chromatographie d'interactions hydrophobes

Answer 48

Séparation selon le degré d’hydrophobicité des composants. * Phase stationnaire: on utilise des résines portant des groupements hydrophobes (cycliques ou aliphatiques). * Phase mobile: tampon avec gradient de concentration en sels (+ vers -). * Les sels favorisent les interactions hydrophobes (masquent interactions électrostatiques et compétitionnent pour les molécules d’eau)

Question 49

vrai ou faux Plus une protéine est hydrophobe, moins elle a besoin de sels pour interagir

Answer 49

vrai