CRIOPRESERVACAO Flashcards by Carol Coelho

quais os objetivos de uma criopreservacao?

○ Aumentar longevidade p ser usado há mais tempo do q fresco e resfriado
○ Preservação de mat genetico - ato valor zootécnico ou em perigo de extinção
○ Pressernvacao da biodisvsidade
○ Aumento de heterozigose e reducao de consanguinidade

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quais as vantagens da criopreservacao?

○ Guardar e usar por mais tempo
○ Mandar p mais longe
○ Evitar transporte de macho ate a fêmea e vice versa
○ Reprodução de aniamis em atv esportavia sem ter q parar
○ Preservação do semen congelado p sempre, desde q mantido o nivel de N no tanque - sem alteração do semen a longo prazo
○ Fácil distribuição do semen
○ Fertilização das femeas nas propriedades de origem
○ Uso em numero ilimitado de femeas - depende do numero de doses

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quais as desvantagens da criopreservacao?

○ Causa mais danos aos esp do q resfriar
○ Queda de qualidade seminal - alteração em membrana plasmática
○ Investimento em botijao
○ Maior custo de IA
○ Relativamente poucas doses por coleta
○ Fertilidade menor
○ Menor tempo de vida do esp - lesoes em membrana q leva a reducao de tempo de vida
○ Percisa ter Intensificação do controle de cresc foliar

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em termos de congelabilidade, qual a espécie com maior e menor congelabilidade?

maior congelabildiade = BOVINO
menor congelabilidade = SUÍNO

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qual a composição das membranas biológicas?

BICAMADA FOSFOLIPIDICA
lipídeos
- fosfolipideos moveis
- colesterol
- glicolipideos

proteinas
- integrais
- perifericas

glicideos - carbs

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é feito congelamento de semen suino?

gearlmente nao
- so resfria a 16-18˚C, antes da modificacao de membrana

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qual a desvantagem do resfriamento de semen suino a 16-18˚C?

nao ha tanta reducao de tx metabolica e espermatozoide gasta mt atp e reduz fertilidade

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quais as necessidades p uso da tecnica?

av de qalidade espermatica
av de longevidade espermatica
sistema de acondicionamento p transporte
assistência mv qualificada
boa comunicacao entre propriedades

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o q e choque termico?

rearranjo proteico em certa região da memrbana, formando micela invertida permanente c fosfolipideos, oriundo de resfriamento inadequado
- conhece entre 18 e 8˚C = ocorre mudanca na conformacao da MP e forma micela invertida

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quais as consequências do choque termico?

perda de ions e morte de esp
reducao de tx metabolica
aumento de permeabilidade
separação de prot e lipídios da MP

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quais as doses inseminantes mínimas p semen resfriado e congelado?

RESFRIADO = 500 mi esp
CONGELADO = 200 mi esp

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pq a dose inseminante minima é menor p semen congelado do q resfriado, msm q o congelamento gere mais danos?

msm gerando + danos, no congelamento, se induz ovulacao na egua e insemina em momento mais sincronizado, pois se reduz janela de ovulacao da femea

ja no semen resfriado, insemina-se a cad 48h, com menor controle de sincronização e antecipação de ovulacao, pq o semen tem mais motilidade e vigor

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quais os fatores influenciam a sensibilidade ao choque temrico no esp de diferentes espécies?

1- proporção de colesterol:fosfolipideos
2- saturação da cauda de ac graxos
3- lipídeos predominantes
4- area de superfície da cabeca
5- ac graxos predominantes
6- comprimento da cadeia de ac graxos

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quais os componentes básicos dos diluídores de resfriamento e congelamento?

RESFRIAMENTO = leite + glicose
CONGELAMENTO = gema + glicerol

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qual deve ser o pp componente energetico do semen de eq?pq?

glicose, pq tem mais receptor p glicose do q p frutose

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como a proporção de colesterol:fosfolipideos interfere no choque temrico?qual a espécie com menor proporcao de colesteorl?

quanto mais colesteorl, maior resistência ao choque
- suino tem menos colesterol

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como a saturação da cauda de ac graxos interfere no choque temrico? qual especie tem menor quant de insaturacoes?

quanto maior o numero de insaturacoes, + resistente ao choque termico
- eq tem menor quant dee insaturacoes

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como o lipideo predominante interfere no choque temrico?

FOSFATIDILCOLINA - favorece choque temrico (eq e suino)
PLASMENILCOLINA - mais proteção contra choque termico (bov)

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como a proporção de colesterol:fosfolipideos interfere no choque temrico? qual espécie tem maior susceptibilidade?

quanto maior area de superfície de cabeca, mais sensível ao choque
- suino - maior area de superfície de cabeca

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como os ac graxos predominantes interferem no choque temrico?

apenas nos equinos
- composicao de fosfolipideos entre os garanhoes causa diferença de resistencia e sensibilidade

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como o comprimento da cadeia de ac graxos interfere no choque temrico?

quanto mais cumprida a cadeia, mais sensível ao choque

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do q os danos espermático s sao resultantes?

○ Altraecao de estrutura das membranas
○ Toxicidade de sais
○ Desidratação
○ Formacao de gelo intracelular
○ Flutuações de volume celular pela area de superfície
○ Choque osmótico
○ Deseq metabolico - lesiona memrbana

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quais as 3 formas de desidratação do esp

perda de agua pela diferenca de osmolaridade apos adc de diluidor
agua extracelular congela primeiro q o esp, pq a MP protege o esp, de modo q ocorre perda de agua p meio extracelular
aumetno de osmolaridade

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o q acontece com a osmolaridade apos adc de diluidor?

aumenta de 300 mil p 800 mil

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qual o objetivo da desidratação?

retirar água intracelular p evitar cristalizar ao

o q e o efeito solucao?

quando o congelamento é mt lento, o meio extracelular se concentra mt e fica toxico ao esp

quais as consequencias de uma tx de congelamento mt lenta e mt rapida?

lenta - efeito solucao rapida - cristais de gelo intracelular

quais devem ser os 3 cuidados p reduzir danos ao esp durante congelamento?

1- diluidor com crioprotetor 2- controlar tx de resfriamento na 1 etapa 3- controle de congelamento e descongelamento

qual tipo de crioprotetor deve ser usado p congelamento?

crioprotetor penetrante - p temp abaixo de 0˚C

quais os beneficios do uso de crio protetores penetrantes?

- evita efeito solucao - aumenta area do esp a ser congelada - impede formacao de cristais de gelo - auemnta area de solucao nao congelada

o q determina a velocidade de resfriamento?

o diluidor usado

qual deve ser a velocidade de resfriamento de um diluidor com GLICEROL?

- resfriamento lento < 0,33˚c/min - pq glicerol entra aos poucos na MP

qual deve ser a velocidade de resfriamento de um diluidor com AMIDAS?

resfriamento rapido >1˚C/,in - amida entra rapidamente na MP e se demora a resfriar, amida pode ficar em excesso e gerar toxicidade

como deve ser o descongelamento em um congelamento lento? qual a consequência se ocorre o contrario?

descongelamento lento - p dar tempo de o esp se reidratar - senão esp morre desidratado

como deve ser o descongelamento em um congelamento lento? qual a consequência se ocorre o contrario?

descongelamento rapido - se demora a descongelarem, os cristais de gelo intracelular formados no congelamento rapido se unem e forma grandes cristais, q geram lesao de membrana

quais as caract de um bom diluidor de semen?

○ Osmolaridade ○ Ph neutro ○ Propriedade tampão ○ Atóxico ○ Não dificultar exame microscópico ○ Estável após estocagem ○ Barato e de fácil aqisicao ○ Substrato p esp - energia p continuar c bom metab

quais componentes imporante presente no leite e na gema de ovo? pq sao importantes?

- leite = CASEÍNA - ovo = LDL - ambos impedem capacitação in vitro antecipada ao se ligar as prot capacitantes do plasma seminal, reduzindo retirada de colesterol

qual deve ser o momento da IA com semen resfriado?

1- avaliacao de fólico pre ov 2- folic pre ov com min de 35 mm insemina 3- faz us p chegar se houve ovulacao e deve encontrar o corpo lúteo 4- se n tiver ovulado, faz nova IA apos 48h

qual o tempo de viabilidade do semen fresco/resfriado?

48h

no resfriamento, qual a concentração ideal após adc diluidor?

entre 25 ee 50 mi de esp

no resfriamento, qual o volume ideal da DI ?

entre 20-50 ml

qual o numero de esp viaveis no momento da IA, tanto em viagens curtas quanto em logan’s?

viagem curta = 500 mi esp viaveis viagem longa (50% de perda) = 1 bi esp viaveis

qual o minimo da diluição no semen resfriado?

min de 2x + diluidor q semen

quantos mi de esp/ml se deve ter apos adc de diluidor?

entre 25 e 50 mi esp

como calcular o volume de semen na DI no resfriamento?

500 mi esp viaveis/ x esp viaveis ou 1 bi esp viaveis/ x esp viaveis

no resfriamento, como calcular a quant de DI?

vol semen/vol semen na DI

no resfriamento, como calcular o volume de diluente total necessário?

vol esp total x diluição usada

como deve ser a ordem do calculo no resfriamento de semen?

1- calculo da diluição 2- calculo de esp viaveis/ml 3- calculo de mLs de semen na DI 4- calculo de quant de diluídor 5- calculo de quant de DI

qual a formula da concentracao espermatica?

esp contados/2 ———————— 1/10 x 1/5 x 1/100

a q temperatura fica o semen refrigerado?

5˚C

a q temperatura fica o semen congelado?

-196˚C

quais as 13 etapas do congelamento de semen?

1- coleta de semen do garanhao com vagina artificial 2- av de caract seminais 3- adc de diluidor de resfriamento 1:1 + av de motilidade 4- centrifugação com 450-600 giros/10 min 5- descarte de 90% do sobrenadante 6- homogeneizar sedimento 7- calculo da concentração do semen concentrado 8- adc de volume de diluente calculoado + av de motilidade 9- envase em palhetas de 0,5ml + selagem 10- resfriamento ate 5˚C 11- por palhetas no valor de Nliq 12- mergulhar palhetas no N2 liq 13- descongelar palhetas p calculo da DI

qual o defeito mais comum no semen congelado?

cauda enrolada

qual deve ser a motilidade progressiva mínima de um esp p congelar?

maior ou igual a 50

quando se avalia motilidade nas etapas do congelamento?

logo apos a coleta e apos a adc de qualquer subst

qual o tempo e a quant de giros da centrifugação do semen p congelamento?

450-600 giros/10 min

qual o objetivo da centrifugação nas etapas do congelamento?

retirar plasma seminal, q causa capacitação in vitro

pq apos a centrifugação p congelamento do semen se mantem 10% do sobrenadante?

tem antixoxidantes improantes no plasma

quantos % do sobrenadante deve ser retirado após centrifugação p congelamento?

90%

como deve ser o calculo da concentração do semen concentrado pos centrifugação no cogenlametno?

1 - calcular [] usando diluição 1/400 2- calculo de adc de diluidor a partir do volume final Vi x []i = Vf x []f []f é fixa em 100 x 10 a 6 esp/ml 3- adc de diluente Vf-Vi = volume de diluente

qual a diluição usada no calculo da concentração de semen após centrifugação no congelamento?

1/400

no processo de congelamento, como deve ser a introducao das palhetas no vapor de N liq? qual tempo o devem ficar?

palhetas devem estar a 2,5-3 cm acima do N2 liq 20 min a temp de -80 a -120˚C

como deve ser o descongelamento das palhetas p calculo da DI?

a 37˚C por 30 seg

apos descongelar palhetas, qual deve ser a motilidade minima ideal?

maior ou igual a 30%

quais os 3 cálculos a serem feitos apos descongelamento do esp?

1- quant de DI 2- quant palhetas/DI 3- volume da DI

qual a DI minima do semen congelado?

200 mi esp viaveis

quais os 4 passos p calcular quant de DI no semen congelado?

a- []f x 0,5 ml de palheta = esp totais b- esp totais/palheta x MT = quant esp viaveis/palheta c - DI = 200 mi esp viaveis//quant de esp viaveis por palheta d - volume final/volume de cada DI

no semen congelado, como calcular quant palhetas/DI?

200 mi esp viávels /quant esp viaveis por palheta

como calcular o volume da DI no semen congelado?

quant palhetas de 0,5ml/2

no semen congelado, como insemrinar as eguas?

com pipeta intrauterina profunda

no semen congelado, qunado insemrinar as eguas?

quando o folic pre ov atinge 35mm induz ovulacao com HCG ou gnrh volta 24h p ver se ovulou se n ovulou, volta a cada 6h

no semen congelado, onde insemrinar as eguas?

prox da junção utero tubarica, com pipeta intrauterina profunda pq est tem q chegar na tuba antes de 6h, pois e quando ocorre lib de neutrofilos

CRIOPRESERVACAO Flashcards

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