Delni Izpit

Question 1

Kaj so sistenske napake. Ali so rezultati pri meritvah s sistemsko napako lahko točni oz. natančni?

Answer 1

Sistemske napake opredeli BIAS, povzroči jih lahko analitik/analiztor, na primer neustrezna kalibracija analizatorja, napačno nastavljena valovna dolžina na spektrometru, okvare v delovanju analizatorja.

Vplivajo na točnost, rezultati so NATANČNI (st. Deviacija enaka) niso pa točni.

Izračunamo: z absolutno in relativno napako (izmerjena vrednost - prava vrednost)/prava vrednost*100

Question 2

Če pri HPLC povečano hitrost pretoka mobilne faze (vse ostalo je nespremenjeno), se bo:

A) povečalo število teoretskih podov
B) zmanjšalo število teoretskih podov
C) znižala višina teoretskih podov
D) zvišala višina teoretskih podov
E) število teoretskih podov bo ostalo nespremenjeno

Answer 2

B) Zmanjšalo število teoretskih podov
D) Zvišala višina teoretskih podov

Question 3

Definiraj katere vrste tekočinske kromatografije visoke ločljivosti poznamo - oz. opredeli med tekoče-tekoče (LLC) in trdno-tekoče (LSC) kromatografijo.

Definiraj katere stacionarne faze in mobilne faze uporabljamo pri teh metodah.

Answer 3

HPLC: porazdelitvena (liquid-liquid), gelska izključitvena, adsorpcijska, ionska

LLC: tekoča stacionarna faza vezana na nosilec, tekoča mobilna faza ?

LSC: trdna stacionarna faza, tekoča mobilna faza?

Question 4

Kislo spojino s pKa=4,5 ektrahiramo iz plazme (pH=7,4) s toluenom. Ali moramo plazemske vzorce naalkaliti, nakisati ali ni potrebno nič? (Če je, do katerega pH okvirno, da se spojina dobro ekstrahira). Izračunaj stopnjo ionizacije spojine v plazmi.

Answer 4

Moramo nakisati do pH 2,5 (vedno za dve enoti razlike, ne želimo da pKa enak pH)

Stopnja ionizacije = 10na (pH-pKa)

Question 5

Kaj je GFP in za kaj ga uporabljamo? Kaj mu je prednost?

Answer 5

GFP = zeleni fluorescenčni fuzijski protein - biološki fluorofor

Prednosti: live cell imaging (opazujemo v živih organizmih fluorescenco), selektiven, ne rabimo povečati permeabilnosti memrane ali fiksirati celic, saj vnesemo v celico s plazmidom.

Slabosti: lahko povzroči spremenjeno biološko funkcijo, ker je velika molekula; ekspresija proteina povzroči nastanek reaktivnih kisikovi zvrsti (artefakti, toksičnost), manjša fotostabilnost, označevanje časovno potratnno.

Question 6

UV-Vis spekter paracetamola in metanola - kakšne so razlike?

Question 7

Naštejte in opišite 3 masne analizatorje. Kateri tip bi uporabili za analizo proteinskega vzorca?

Answer 7

TANDEMSKI MASNI SPEKTROMETER - za analizo proteinov (sklopitev dveh zaporedno vezanih masnih analizatorjev)

TOF - masni analizator na osnovi časa pretoka

KVADRUPOLNI MASNI ANALIZATOR

Question 8

Katere trditve so pravilne?

A) iz kemijskega premika v ‘H NMR sklepamo o okolju protova v preiskovani spojini
B) energija sevanja vzorca pri IR sprektroskopiji je večja kot pri UV-Vis
C) signal nihanja C=O ima večjo intenziteto od C-H
D) NMR se predvsem uporablja za določanje koncentracije v zmesi

Answer 8

A) iz kemijskega premika v ‘H NMR sklepamo o okolju protova v preiskovani spojini. DA

B) energija sevanja vzorca pri IR sprektroskopiji je večja kot pri UV-Vis. NE

C) signal nihanja C=O ima večjo intenziteto od C-H. NE

D) NMR se predvsem uporablja za določanje koncentracije v zmesi. NE?

Question 9

Kako se kaže učinek matriksa pri LC-MS/MS?

A) kot pojav dodatnih vrhov v masnem spektru
B) masni premik vrha ali fragmentiranega produkta (M-H, M+H)
C) premik retencijskega časa vrha analita in njegovega fragmentiranega produkta zaradi ko-eluirajočih se komponent ozadja vzorca
D) znižanje ali zvišanje intenzitete odziva na detektorje zaradi ko-elucije komponent ozadja ob retencijskem času vrha analita
E) pojav zmanjšuje lastnosti masne resolucije v spektru

Answer 9

D) Znižanje ali zvišanje intenzitete odziva detektorja zaradi ko-elucije komponent ozadja ob retencijskem času vrha analita

Question 10

Kaj najpogosteje povzroča učinek matriska pri bioanalitiki s LC-MS/MS?

A) neprimerna mobilna faza za masni detektor (nor. Forfatni pufer)
B) analit, ki nerad ionizira v pogojih atmosferske ionizacije
C) komponente iz biološkega ozadja vzorca, ki jih nismo uspeli med pripravo vzorca odstraniti v zadostni meri - soli, fosfolipidi…
D) izotopno označeni interni standard
E) interni standard brez izotopne oznake
F) standardni dodatek
G) neustrezna fragmentacija analita v kolizijski celici

Answer 10

C) komponente iz biološkega ozadja vzorca, ki jih nismo uspeli med pripravo vzorca odstraniti v zadostni meri - soli, fosfolipidi…

Question 11

Pri določanju nekega analita v krvni plazmi s kapilarno elektroforezo (CE) moramo bolj temeljito odstraniti proteine kot v primeru določanja analita v teh vzorcih s HPLC. Ali trditev drži?

A) DA, zato ker težje ločimo s CE proteine od analita kot v primeru HPLC

B) NE, ker (s steklom prevlečene) kapilare proteini ne poškodujejo, medtem ko HPLC kolono lahko uničijo

C) proteinov ni treba ločevati od vzorca ne pri eni ne pri drugi metodi

D) proteinov ni treba ločevati, saj se že ločijo s strjevanjem krvi (torej ko ločimo stran tudi eritrocite)

Answer 11

B) NE, ker (s steklom prevlečene) kapilare proteini ne poškodujejo, medtem ko HPLC kolono lahko uničijo

Question 12

Če želimo doseči ločevanje enantiomerov s kapilarno elektroferezo:

A) moramo vklopiti kiralni reagent v pufer - ciklodekstren
B) doseči tvorbo micelov s površinsko aktivnimi snovmi, ki sukajo polarizirano svetlobo
C) vgradiri tekoče kristale v kapilaro
D) to detekcijo uporabiti UV-detektor z nizom diod ali masni detektor (sklopitvena tehnika)
E) meriti sukanje polarizirane svetlobe pufra na koncu kapilare namesto merjenja absorbance z UV

Answer 12

???

A) moramo vklopiti kiralni reagent v pufer - ciklodekstren

Question 13

Naštej vrste napak in kako jih dobimo?

Question 14

Kaj je stokesov premik?

Answer 14

Stokesov premik je proces, v katerem moramo vzorec absorbirati z svetlobo za določeno energijo. Vzorec pa potem odda svetlobo drugačne energije, ki je malce manjša, ker odda toploto. To je premik emitirane svetlobe proti daljšim valovnim dolžinam - BATOKROMNI EFEKT.

Emitirana svetloba ima manjjšo energijo, večjo valovno dolžino.

Question 15

Naštej 4 lastnosti dobrega fluorescentnega označevalca.

Answer 15

• velik ekstinkcijski koeficient
• visok kvantni izkoristek
• ozek fluorescenčni in absorpcijski spekter (uporaba barvil)
• topnost v fizioloških spojinah
• fotostabilnost, selektivnost, stabilnost

Question 16

Kaj bi izbral za detekcijo težkih kovin?

Question 17

Kaj je izvor signala pri spektrometrih (eksakten odgovor)? Kateri del inštrumenta pretvori signal?

Question 18

Koliko H atomov imajo stacionarne faze pri reverzno faznih in normalno faznih kromatografijah?

Answer 18

REVERZNO FAZNE: C8, C18

NORMALNO FAZNE: C2CN, C3CN

Question 19

SLIKA IONIZACIJE (ESI)

Katera ionizacija in za katere vzorce je primerna?

Question 20

Kaj je kromofor?

Question 21

Kako in zakaj merimo proteine v UV-Vis spektru?

Question 22

Razvrsti po selektivnosti SRM, SIM, Full-Scan

Question 23

Ravrsti po padajoči selektivnosti tipe meritev LC-MS-MS:

Answer 23

MRM>SRM>SIM>Full-Scan

Question 24

Katera trditev je pravilna:

A) polarimetrija je analizna metoda, ki jo uporabljamo za določanje polarnosti vezi.

B) Energija EM sevanja pri IR spektroskopiji je manjša od energije za vzbujanje vzorca pri UV-Vis.

C) Signal za nihanje C=O vezi v IR ima manjšo intenziteto od signala, ki ustreza nihanju C-H

D) iz IR spektra lahko nedvoumno določimo strukturo preiskovanega vzorca

Answer 24

B) Energija EM sevanja pri IR spektroskopiji je manjša od energije za vzbujanje vzorca pri UV-Vis.

Question 25

Z masnimi deketorji vrste trojni dvadrupol večinoma pri bioanalitiki s poglavitvenim ciljem kvantifikacije znanih analitov izvajamo meritve v načinu:

A) SIM (“single ion monitoring) oz. Spreminjanje enega (iona) na enem kvadrupolu
B) SCAN (oz. Snemanje spektra) na obeh kvadrupolih)
C) SCAN v (kolizijski celici), oba masna filtra pa sta izklopljena
D) MRM (“multiple reaction monitoring” oz miltirezidualna analiza)
E) masni detektor uporabljamo le pri razvoju metod za porazdelitev identitete analitov, potem pa raje uporabljamo UV detektor z nizom diod.
F) tvorjenja CHO+ ionov, ki so merilo za kvantiteto C atomov analita

Answer 25

D) MRM (“multiple reaction monitoring” oz miltirezidualna analiza)

Question 26

V enakem času, najpogosteje uporabljen ionizator je:

A) APCI
B) ESI
C) APPI
D) MALDI
E) EI

Answer 26

B) ESI

Question 27

Določi katera separacijska tehnika (HPLC ali CE) je bolj primerna za naslednja dejanja:

A) iskanje genskih polimorfizmov
B) določanje hetero ali homozigotičnega stanja tumorja
C) analiza zlorabe drog v urinu
D) pripravljeno čiščenje po kemični sintezi za izolacijo produkta

Answer 27

A) iskanje genskih polimorfizmov = CE
B) določanje hetero ali homozigotičnega stanja tumorja = CE
C) analiza zlorabe drog v urinu = HPLC
D) pripravljeno čiščenje po kemični sintezi za izolacijo produkta = HPLC

Question 28

Katera sta dva pomembna procesa pri razvoju analitske metode?

Answer 28

IZBIRA METODE IN OPTIMIZACIJA

Question 29

Kako je opisano linearno območje v analitski metodi in katere so kalibracijske krivulje?

Answer 29

Območje gre od LOQ (spodnje limite kvantifikacije) oz meje ločljivosti do LOL (max. Koncentracije) limite do katere, je premica še linerna (limita linearnosti). Pri večjih koncentracijah to ne gre, ker pride do odstopanja linearnosri.

Question 30

Katere spremembevplivajo na retencijski faktor in kateri parametri ostanejo nespremenjeni?

A) T
B) hitrost pretoka mobilne faze
C) dolžina kromatografske kolone (z isto SF in MF)
D) če uporabljamo C18 namesto C8 pri reverzni fazi v koloni
E) če spremenimo koncentracijo MeOH v mobilni fazi s 40% na 50%

Answer 30

A) T NESPREMENJENO
B) hitrost pretoka mobilne faze NESPREMENJENO
C) dolžina kromatografske kolone (z isto SF in MF) NESPREMENJENO
D) če uporabljamo C18 namesto C8 pri reverzni fazi v koloni VPLIVA
E) če spremenimo koncentracijo MeOH v mobilni fazi s 40% na 50% VPLIVA

Question 31

Če je vrednost pKa bazične spojine pKa=0.1, kakšne so njegove acido-bazične lastnosti? Označi pravilne odgovore.

A) je močna kislina
B) je močna baza
C) je zelo, zelo šibka kislina
D) je zelo zelo šibka baza
E) glede na kislinsko-bazične lastnosti je podobna vodi
F) popolnoma disociira v vodi
G) disociira v vodi le raahlo
H) pH 1M raztopine je približno 7
I) pOH 1M raztopine je približno 7
J) pOH 1M raztopine je 0

Answer 31

A) je močna kislina N
B) je močna baza N
C) je zelo, zelo šibka kislina N
D) je zelo zelo šibka baza P
E) glede na kislinsko-bazične lastnosti je podobna vodi P
F) popolnoma disociira v vodi N
G) disociira v vodi le raahlo P
H) pH 1M raztopine je približno 7 N
I) pOH 1M raztopine je približno 7 P
J) pOH 1M raztopine je 0 N

Question 32

Graf etilacetat C4H8O2. Katera formula ustreza spektru in zakaj?*

Answer 32

B)

CH3 je najbolj zasenčen in se nahaja najbližje 0 oz. Ima najmanjši kemijski premik. Ima 2 sosedna protona in zato dobimo triplet, 3 bazne linije v spektru, ki ustrezajo signalu (N=n+1=2+1=3)

CH3 ima najvišji bazni signal pri 2 ppm. Nima sosednjih protonov, zato vidimo singlet v spektru oziroma 1 linijo, krivuljo (N=n+1=0+1=1)

CH2 je najbolj odsenčen oz. Najmanj zasenčen, ker se nahaja najbližje kisiku, ki je elektronegativen element, ki odtegne elektronsko gostoto stran od sosednih protonov. Ima 3 sosedne protone in zato dobimo kvintet (N=n+1=3+1=4)

Question 33

Katera je pravilna trditev:

A) polarimetrija je analizna metoda, ki jo uporabljamo za določanje polarnosti vezi

B) Energija EM sevanja pri IR-spektroskopiji je manjša od energije za vzbujanje vzorca pri UV-Vis

C) Signal za nihanje C=O vezi v IR ima manjšo intenziteto od signala, ki ustreza nihanju C-O

D) iz IR spektra lahko nedvoumno določimo strukturo preiskovanega vzorca

Answer 33

B) Energija EM sevanja pri IR-spektroskopiji je manjša od energije za vzbujanje vzorca pri UV-Vis

Question 34

Z Masnimi detektorji vrste trojni kvadrupol večinoma pri bioanalitiki s poglavitvenim ciljem kvantifikacije znanih analitov izvajamo meritve v načinu:

A) SIM (“single ion monitoring” oz spremljanje 1 iona) na enem kvadrupolu
B) SCAN (oz snemanje spektra) na obeh kvadrupolih
C) SCAN (v kolizijski obliki), oba masna filtra pa sta izklopljena
D) MRM (“multiple reaction monitoring” oz multirezidualna analiza)
E) masni detektor uporabljamo le pri razvoju metod za potrditev identitete analitov, potem pa raje uporabljamo UV detektor z nizom diod
F) tvorjenje CHO+ ionov, ki so merilo za kvantiteto C atomov

Answer 34

D) MRM (“multiple reaction monitoring” oz multirezidualna analiza)

Question 35

V enakem času, najpogosteje uporabljen ionizator je…?

Answer 35

ESI

Question 36

Kaj je pogoj za linearno kromatografijo?

Question 37

Nariši prvi derivacijski spekter običajnega absorpcijskega spektra