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Exam 2 sciences fondamentales 3 > Diagnostic de laboratoire des infections > Flashcards

Diagnostic de laboratoire des infections Flashcards

1
Q

Quelles sont les trois phases du cheminement diagnostique en microbiologie infectiologie ?

A
  • Phase pré-analytique
  • Phase analytique
  • Phase post-analytique
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Q

Quelles sont les différentes étapes de la phase pré-analytique?

A

1) Patient consulte avec sx clinique pouvant suggérer maladie infectieuse (il y a une hypothèse diagnostique)

2) Prescription de prélèvement selon le cas
- Examen directs
- Cultures
- Détections antagoniques/PCR
- Sérologie

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3
Q

Qu’est-ce que nécessite les prélèvement ?

A

La requête du prescripteur et l’identification double du spécimen du patient

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4
Q

Qu’est-ce qui important pour les culture?

A

De connaître les germes recherchés de routine et ceux nécessitant une demande spéciale (mycobactéries, etc.)

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5
Q

Qu’est-ce qui est indispensable pour un résultat diagnostic de qualité?

A

La qualité du prélèvement

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6
Q

Quelles sont les étapes pour les cultures bactériennes courantes? (phase analytique)

A

1) Ensemencement/incubation (durée variable selon le spécimen pathogène recherchée)

2) Isolement/épuration (but étant d’avoir une culture pure)

3) Lecture périodique (au 24 heures pour les pathogènes usuels)

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7
Q

Quelles sont les déterminants pour l’identification d’un pathogène à partir d’une culture? (phase analytique)

A
  • La morphologie de la colonie (grosseur, convexité, etc.)
  • L’hémolyse sur gélose de sang (béta = complète, alpha = partielle/verdâtre)
  • Des tests biochimiques rapides (catalases/oxydase, métabolisme du lactose, etc.)
  • Aspect au gram des colonies

Exemple:

  • Staphylocoque = cocci gram + en ammas
  • Strepto = cocci gram + en chaînette
  • Entéro = batonnet en gram -
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8
Q

Quelles sont les tests supplémentaires sur culture si nécessaire pour l’identification du pathogène?

A
  • Analyse biochimique de l’isolat (code numérique par des puits)
  • Malditof
  • Antibiogramme (limité selon l’espèce et les valeurs de références)
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9
Q

Vrai ou faux: les rapports se font pendant la phase post-analytique?

A

Faux, partiellement vrai les rapports se font durant la phase analytique (rapport préliminaires selon les étapes analytiques) et un autre pendant la phase post-analytique

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10
Q

Qu’est-ce qu’un résultat critique?

A

Un résultat qui nécessite un rapport sans délais au prescripteur

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11
Q

Qu’est-ce qu’il faut faire pendant la phase post-analytique?

A
  • Émission du rapport final par le microbiologiste infectiologue
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12
Q

Quelles sont les deux notions important dans le processus analytique ?

A
  • La validité du résultat
  • Le délais de réalisation analytique (analyse extra-mural peuvent prendre bcp de temps)
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13
Q

Qu’est-ce que le médecin prescripteur doit faire pour s’assurer d’une bonne interprétation selon si le résultat est sur un site stérile ou non?

A
  • Si le prélèvement a été fait à un site stérile: si il y a des germes à cette endroit il est important de faire une lecture attentive du rapport et faire une prise en charge conséquence
  • Si le prélèvement a été fait à des sites non stérile:
    Connaître la flore normale de ces sites et porter attention aux bactéries identifiés qui ne font pas partie de la flore normale ou qui sont reconnus pathogènes.
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14
Q

Quelles sont les bactéries de la flore normale retrouvées au niveau du vagin et des selles?

A
  • Lactobacillus
  • Entérobactéries
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15
Q

Nommer un exemple d’agent pathogène qui cause une vaginite?

A

La candida. (levures en grande quantité)

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16
Q

Nommer un exemple de pathogène qui cause une gastro-entérite?

A

Campylobacter

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17
Q

Voir exemple concret du cheminement diagnostic en microbiologie infectiologie

A

Diapo 20 à 25

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18
Q

Quelles sont les autres tests qui ne nécessitent pas de faire une culture?

A
  • Les examens directs
  • Les tests de détections rapides d’antigènes
  • Les tests biomoléculaires
  • La sérologie
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19
Q

Nommer les différents examens directs?

A
  • Coloration de Gram
  • Coloration d’acido alcohol résistance (Ziehl-Neelson et Kinyoun, kinyoun modifiée et Auramine)
  • Coloration d’immunofluorescence
  • KOH
  • Fond noir
  • Calcofluor
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20
Q

Quelle est l’examen microscopique le plus utilisé pour l’identification des bactéries?

A

La coloration de Gram (Hans Christian Joachim Gram en 1884)

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21
Q

La coloration de gram est basée sur quel principe?

A

La différence des parois entre Gram + et Gram -

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22
Q

Quelles sont les étapes de le coloration de Gram?

A

1) Colorant (crystal violet ->bleu) pendant 15 secondes

2) Lavage à l’eau/puis lugol (iode) comme mordant pendant 15 secondes

3) Acétone/alcool pour décoloré pendant 15 secondes

4) Lavage à l’eau

5) Contre colorant (safranine rose/rouge) pendant 15 secondes

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23
Q

Revoir la morphologie des bactérie (coque, bacille, etc.)

A

…

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24
Q

Quelles sont les limites du Gram?

A
  • Si la densité bactérienne dans la culture n’est pas élevé on ne voit pas très bien donc plus la sensibilité est élevé plus la densité se doit d’être élevé
  • Résolution optique certaine bactérie sont moins bien visible avec le test gram et le microscope
  • La présence ou non d’une paroi bactérienne (si il n’y a pas de paroi comme les mycoplasma alors la coloration fonctionne pas)
  • Certains types de parois sont non-visible avec cette coloration comme les mycobactéries
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25
Q

Qu’est-ce qui fait en sorte que certaines bactéries normalement visible au Gram peuvent ne plus l’être?

A
  • Les conditons de cultures (peut causer moins de densité par exemple)
  • L’exposition préalable à un antibiotiques
  • Les propriétés intrinsèque à se décolorer des bactéries
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26
Q

Quelles sont les utilités du Gram?

A
  • Reconnaître rapidement le ou les bactéries possiblement pathogènes (y compris parfois les éléments fongiques) dans le prélèvement et informer le clinicien
  • Évaluer la présence ou l’absence de flore normale quand le prélèvement provient d’un site non stérile
  • Évaluer la réponse inflammatoire car les globules blancs sont également colorés dans le processus
  • Quantifier de façon relative les polynucléaires vs les cellules mononucléée et aider à distinguer infection bactérienne et virale
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27
Q

Sur quels types de spécimen reçu la coloration Gram peut être faite en laboratoire?

A
  • De routine, en urgence : liquide céphalo-rachidien
  • De routine, non urgente : expectorations
  • Sur demande spéciale : prélèvement urinaire
28
Q

Vrai ou faux: lorsqu’on fait une hémoculture et le résultat est négatif ou positif il faut toujours appeler le médecin ?

A

Vrai

29
Q

Vrai ou faux: il faut faire la coloration de Gram sur toutes les hémocultures (toutes les hémocultures ont été incubés) ?

A

Faux, seulement sur les bouteilles ciblées positives par l’appareil

30
Q

Après combien de temps d’incubation les bouteilles qui seront positives le sont. Quel est le pourcentage des bouteilles qui sont positives le sont à ce même temps d’incubation ?

A

48 heures

90% des bouteilles qui seront positives le sont après 48h

31
Q

Pourquoi est-ce qu’on fait pas de gram dans les hémocultures en routine?

A

Étant donné que la densité de bactérie est normalement trop faible (site stérile)

32
Q

Les colorations d’acido-alcoolo-résistance s’adressent à quelles types de bactéries?

A

Les bactéries avec une parois riche en acide mycosiques (acides gras à longue chaînes) qui sont difficiles à colorer notamment au Gram

33
Q

Quel est le principe d’une coloration d’acido-alcoolo-résistance?

A

C’est une coloration où les bactéries résistent à une décoloration par un alcool acidifié. Donc elles gardent la même couleur que la première coloration si elles sont positives

34
Q

Nommer un exemple d’alcool acidifié utilisé pour les colorations d’acido-alcoolo-résistance et quelles sont les types de bactéries qui ont besoin de ce type de coloration ?

A

Éthanol/HCL dans le cas du Ziehl ou Kinyoun:

  • Pour les bacilles acido-alcoolo-résistants (BAAR)
  • Mycobactéries tuberculeuse et non tuberculeuse
35
Q

Quelle est la procédure pour une coloration d’acido-alcoolo-résistance?

A

1) Lame colorée avec Carbol Fuchine

2) Décoloration avec alcool acidifié

3) Contre-coloration bleu de méthylène

4) Résultats = Bactéries rouges sur fond bleutés

36
Q

Ziehl-Neelson est une coloration à … et Kinyoun une coloration à … et les deux s’adressent aux …

A

chaud

froid

mycobactéries

37
Q

La coloration Kinyoun modifié c’est à dire l’emploie d’un décolorant plus doux s’adresse à quelles espèces?

A

Aux espèces partiellement acido-alcoolo-résistantes comme la Nocardia

38
Q

Qu’est-ce que l’auramine?

A

Un fluorochrome non spécifique qui se lient aux acides mycoliques et résistent à la décoloration par l’alcool acidifié

39
Q

Quand est-ce que le résultat est positif lors des test avec l’auramine?

A

Lorsque la bactérie (batonnet) est fluorescente sur fond noir

40
Q

Vrai ou faux: le test avec l’auramine a une valeur diagnostic équivalente que le Ziehl-Neelson, mais la lecture est plus longue ?

A

Faux, lecture plus rapide par le technicien

41
Q

Quelles sont les limites de la coloration d’acido-alcoolorésistance lorsqu’effectuées sur les prélèvement reçus pour la tuberculose?

A
  • Susensibilité supérieure dans les prélèvement respiratoire que ceux extra-pulmonaire
42
Q

Quelles sont les valeurs de sensibilité des tests de coloration d’acido-alcoolorésistance pour la tuberculose?

A

Prélèvement respiratoire = 50 à 60%

Prélèvement extra-pulmonaire = 10 à 30%

43
Q

La mycobactérie est … à la coloration de Ziehl et … à la coloration de Kinyoun modifié.

La Nocardia est … à la coloration de Zihel et … à la coloration de Kinyoun modifié.

A

Positif et positif

Négatif ou +/- et positif

44
Q

Quel est le principe de l’immunofluorescence?

A
  • Anticorps combinés avec un marqueur fluorescent qui se lient à un antigène spécifique
45
Q

Comment est-ce qu’on observe un test d’immunofluorescence?

A

À partir d’un microscope à fluorescence (bactérie Légionella par exemple)

46
Q

Quand est-ce que le résultat est positif?

A

Lorsque la bactérie vert pomme granulaire sur fond noirâtre

47
Q

Vrai ou faux: l’immunofluorescence est la méthode qui est de plus en plus utilisée

A

Faux, au contraire elle est remplacée par d’autres méthodes immunologique (ELISA) et les PCR

48
Q

Quelle est l’utilisation du KOH 10% ?

A

Sur des spécimens cliniques (ongles, peau, cheveux) pour digérer la kératine et rendre plus visibles les éléments fongiques mycéliens

49
Q

Quel est le principe de la microscopie sur fond noir et pourquoi on l’utilise?

A

Utilisation de la diffraction de la lumière pour mettre en évidence les tréponèmes : spirochètes qui sont non visibles au Gram

C’est un examen direct au microscope ayant un condensateur dédié pour des prélèvement obtenue de chancres notamment (ulcère)

50
Q

Quand est-ce que le résultat est positif lors de microscope sur fond noir?

A

Lorsque la bactérie brille sur fond noir et est mobile

51
Q

Pourquoi est-ce que la microscopie sur fond noir est de moins en moins utilisée?

A
  • Étant donné qu’il y a une faible demande
  • Elle demande une expertise clinique
  • Meilleurs tests sérologiques disponibles
52
Q

Qu’est-ce que le calcofluor?

A

C’est un azurant optique (blanchiment) qui se lie à la cellule et la chitine, fluorescent à une longueur d’onde dédiée aux UV (microscope à fluoresence)

53
Q

Dans quelle situation on utilise le calcofluor?

A

Dans la détection de :

  • Champignons
  • Amibes pathogènes

Parfois utilisé concomitamment avec KOH

54
Q

Quand est-ce qu’on sait que le résultat est positif avec du calcofluor?

A

Élément fongiques blancs bleutés à verdâtre fluorescents sur fond noirâtre

55
Q

Quelle est le problème du calcofluor?

A

C’est une coloration non spécifique ce qui induit un risque de faux positif avec d’autres éléments tissulaires comme le collagène ou de l’environnement comme le coton

56
Q

Nommer des exemples de méthodes qui existent sur une base commerciale pour détecter rapidement la présence d’antigènes caractéristiques de certains micro-organisme?

A
  • Détection rapide des Streptocoque béat-hémolytique dans les gorges
  • Détection de Cryptococcus nerformans (levure pathogène) dans le sang ou les LCR (liquide céphalorachidien)
57
Q

Vrai ou faux: les tests antigéniques sont moins rapides que les cultures, mais plus sensibles?

A

Faux, inverse. Tests antigéniques plus rapide, mais moins sensibles

58
Q

Quel est le principe du PCR?

A

Utilisation d’amorces et d’amplification d’une partie du génome de l’agent microbien à identifier. Détection de la portion du génome amplifié.

59
Q

Vrai ou faux: les test biomoléculaires (PCR) sont en constant développement ?

A

Vrai

60
Q

Quelles sont les limitations des tests PCR?

A

Coûts et accessibilité (appareil)

61
Q

Quelle est le but de la sérologie?

A

Mettre en évidence des preuves indirectes de la présence d’un agent infectieux en détectant des anticorps spécifiques contre un agent infectieux habituellement dans le sérum.

62
Q

Dans quelles situations la sérologie est le plus souvent utilisé?

A

Dans les infections virales et parasitaires.

Le but étant de faire un diagnostic d’infection aigüe ou un dépistage d’immunité.

Médecin doit savoir si c’est aigüe ou non selon le type de résultat.

63
Q

Quelles sont les caractéristiques du dosage des IgM?

A
  • Apparition en phase aigüe de la maladie
  • Nécessite 1 seul sérum pour le diagnostic
  • Utile au diagnostic de l’infection aigue si la technique est performante pour le germe recherché (parfois une bactéries n’engendre pas la présence d’IgM)
64
Q

Quelles sont les caractéristiques du dosage des IgG?

A
  • Apparition en phase de convalescence de la maladie
  • Spécificité élevée
  • Nécessite 2 sérums pour le diagnostic (un négatif en phase aigue et un positif en phase de convalescence)
65
Q

Qu’est-ce que la séroconversion?

A

2 sérum analysés à 2 ou 3 semaines d’intervalle montrent un titre qui passe de négatif à positif.

En phase aigue, le corps n’a pas encore développé des anticorps.

Séroconversion permet confirmé diagnostic

66
Q

Qu’est-ce que cela induit si le titre augmente de 4 dilutions ?

A

Si par exemple dans la dilution de 1/4 il y a x quantité d’anticorps et que dans la dilution de 1/16 quelques semaines plus tard il y a x quantité cela veut dire que la positivité est beaucoup plus grande.

(MIEUX COMPRENDRE OU RÉÉCOUTÉ?)

67
Q

Quelle est la différence entre un IgG neutralisants et non neutralisant?

A

Neutralisant = signe d’une immunité à long terme

Non neutralisants = signe d’une exposition sans immunité (en aigue) donc se fixe à l’antigène sans créer d’effet

Cette notion et la compréhension des neutralisants ou non neutralisants permet de mieux interpréter les résultats

Exam 2 sciences fondamentales 3 (10 decks)

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