Electroforesis en gel Flashcards
¿Qué es la electroforesis en gel?
técnica usada para separar biomoléculas dentro de un campo eléctrico, típicamente ácidos nucleicos o proteínas, según su peso molecular, tamaño y carga
Un sistema electroforético consiste en:
dos electrodos de carga opuesta conectados por un medio tamponado llamado electrolito (rico en iones).
La diferencia de la velocidad de las moléculas en este medio está determinada por
su tamaño, forma, carga, la temperatura del medio y la porosidad del gel.
Proceso
- El ADN es cortado en fragmentos + pequeños usando enzimas de restricción
- Las muestras, una vez que se les ha añadido un componente que las haga más densas que el medio tamponado (colorantes), se colocan dentro de los pocillos del gel mediante el uso de pipetas/micropipetas.
- Entonces, se conecta el equipo de electroforesis y las cargas comienzan la distribución de las moléculas.
Las moléculas de carga negativa penetran los capilares del gel y se desplazan hacia
el electrodo positivo (ánodo)
las moléculas de carga positiva migran hacia el
cátodo (electrodo negativo).
Qué son las bandas en el gel?
Las bandas que se observan en el gel son conjuntos de moléculas con el mismo tamaño, las de menor tamaño son las que más se desplazan hacia su carga opuesta.
¿Qué son los marcadores?
Moléculas con estándares de tamaños (peso molecular) conocidos que se separan en el mismo gel y se comparan con la muestra que se busca comprender.
La visualización del gel requiere
colocar la placa bajo una luz UV, es decir, transiluminación y documentación UV.
Las bandas distintas bandas en la línea representan
Fragmentos de de diferentes tamaños
El uso de tintes en las muestras puede ayudar a visualizar las bandas, pero no necesariamente afecta el número de bandas que se observan. V/F
Verdadero
Pasos de la práctica de electroforesis en gel
