Exam 3 Flashcards
(30 cards)
Quelle séquence d’aa complète a été reportée avant : LacZ ou Beta-gal
Geta gal (1977) vs lacZ (1983)
Vrai ou faux? Glu-460 est un résidu impliqué dans la catalyse de la beta-ga?
Faux, glu 461
Vrai ou faux? Glu-538 est un résidu impliqué dans la catalyse de la beta-ga?
Faux, Glu 537
Comment les structures des nouvelles souches mutées sont elles produites?
À partir des cristaux de protéines en présence d’inhibiteurs ou d’analogue de substrat
Depuis 2020, quelle méthode est utilisée pour rapporter les structures d’enzymes
Cryo EM
Quelle réaction est catalysée par la beta gal
L’hydrolyse du lactose/ analogues de lactose en galactose et glucose OU en allolactose (trans-galactosylation)
Quel est le role des deux glutamate?
Glu 537 sert d’acide/ base
Glu 461 agit comme nucléophile
Quel est la particularité de G794?
Pas dans le site actif
Mutation G794D -> Augmente kcat
Mutation G794A -> Diminution kcat
Est ce que Met-502 fait partie du site actif de la beta gal
Oui
Comment pouvons nous confirmer le rôle d’un résidu dans le mécanisme catalytique?
Convention: muter par Alanine (car ne devrait pas être impliqué dans la catalyse)
Problème = l’aa original pourrait aussi avoir un rôle structural
Solution = muter par un résidu avec struct similaire ex Asparagine ou glutamine
Quel est le rôle de His-67
Pas clair si rôle dans la catalyse
Cartainement rôle structural (struct locale)
Comment pouvons nous identifier les résidus de surface impliqués dans des interactions proteine-proteine
En mutant les résidus de suface par un résidu de propriété opposé
+ <-> -
Hydrophile <-> Hydrophobe
Chaine R encombrante <-> chaine R de petite taille
Vrai ou faux? La mutation de résidus à la surface des protéines mène à un modification de l’expression ou de la solubilité
Faux
Comment peut on stabiliser une protéine par mutagénèse?
Mutagénèse rationelle ou semi rationelle
PAS MUTAGÉNÈSE ALÉATOIRE
Comment peut on verrouiller une protéine dans une conformation donnée?
En mutant un résidu impliqué dans l’hydrolyse de l’ATP. Sans ATP de disponible, il est impossible de changer de conformation
Quelles sont les deux valeurs de pourcentage d’inhibition typique qui permettent de déterminer le type d’inhibition?
30% et 75%
Quel graphique faut-il construire pour d’éterminer le type d’inhibition. Comment l’interpréter?
Lineweaver Burke avec des concentrations différentes d’inhibiteur
Si les droites se croisent sur l’axe des Y, compétitif
Si les droites se croisent derrière l’axe des Y, non- compétitive
Si les droites se croisent jamais, incompétitif
Comment déterminer la Ki d’une enzyme.
Calculer la Km de chaque droite à concentration particulière d’enzyme. Ce sont les Kmapparentes
Faire un graphique des km apparentes en fonction de la concentration d’inhibiteur.
L’ordonné à l’origine est la ki
Vrai ou faux? La NOS est une endonucléase
Faux, une oxydoréductase
À quel aa la NOS est-elle coordonnée?
Une cystéine
Vrai ou faux? La NOS ne possède aucun site de liaison à des cofacteurs
Faux elle en a plusieurs comme NADPH, FMN, FAD, CALMODULINE (CaM), etc
Vrai ou faux? La NOS est est un monomère
Faux, un homodimère
Quelle réaction la NOS catalyse-elle?
L-Arginine -> L-citrulline
Comment les NOS sont elles nommées chez les mammifères et chez les bactéries à gram +
mNOS : mammifères
bNOS : bacteria
