Examen 2 Flashcards
(44 cards)
On a un mélange de prot, comment faire pour identifier une seule des prots ?
Electrophorose couplé avec inmunobuvsrdaage
C quoi une electrophorèse de type SDS-PAGE et comment ca fonctionne? Dire les deux facteurs qui font varier la v de migration.
-Utilise sodium dodecyl sulfate (SDS)
- sur gel de polyacrilamide (PAGE)
SDS rend prots également négatives ET linéarité leur forme - migre selon seulement un facteur, leur poids mol
On peut donc faire varier vitesse migration par soit: viscosité ou voltage.
les grosses mol migrent moins vite à cause des mailles de polyacrylamide et les petites +++. En faisant varier la viscosité, ça affecte + les mol petites.
À quoi sert le tampon de chargement dans ou tampon de migration utilisé dans la préparation d’échantillon du SDS PAGE?
Contient du B mercaptoéthanol qui brise les ponts di sulfures des prots -> linéarise les prots
Pourquoi on utilise un gel de compression et un gel de résolution dans l’électrophorèse de type SDS PAGE
Gel de compression: pH 6,8 sert à mettre les prots à la même hauteur
Gel de résolution pH 8,8: sert à séparer les prots.
C quoi le rôle de APS et TEMED dans le SDS-PAGE
Agents oxydants qui catalysent la polymérisation du gel
- APS: ammonium persulfate
TEMED: met après et agit avec APS
Comment on fait passer les prots du gel à la membrane de nitrocellulose?
En se servant d’un courant électrique cathode -> anode so prot vont vers anode + car elles sont -
Une fois les prots transférées sur la membrane de nitrocellulose, on fait quoi?
- On met ronge de ponceau (colorant spécifique aux prots) pour voir si transfert à marché
- On retire le rouge avec tampon TBST
- On fait blocage avec TBST 5% lait (prots empêche nos anticorps de se fixer n’importe où sur membrane et d’aller juste sur leur prots spécifiques)
- Met membrane ERa dans sachet rempli d’anticorps primaire
- Met membrane Bactin dans sachet rempli d’anticorps de Bactin
Qu’est-ce que le Tamoxifene dans le traitement du cancer du sein hormonal dépendant.
C l’antagoniste du récepteur ERa, donc le traitement qui soigne le cancer (empêche croissance)
Lequel de MCF-7 et MDA-MB-231 ont le récepteur ERa? L’autre est cancéreuse pk ?
MCF-7: ERa
MDA: p53 mutée
Rendu à l’immunobuvardage de notre memvrane de Nitro, on fait quoi?
- Lave au TBST pour retirer les prots en excès qui sont pas fixées
(Juste pour membrane de ERa)
2. Incuber dans anticorps secondaire
3. Laver au TBST pour retirer prots non fixées
Pour les deux membrane
4. Laver au PBS1X
5. Ajouter réactif TMB
6. Couleur apparaît où y’a l’enzyme HRP (donc l’anticorps)
C quoi l’enzyme utilisée dans l’immunobuvardage et le réactif utilisé avec dans labo 6?
Enzyme: HRP horseradish peroxydase. En présence de H2O2 elle transforme TMB
réactif: TMB , tetramethylbenzidine se fait hydrolyser et devient bleuté.
Quantité de couleur proportionnelle à qt de prots
C quoi les cycles de PCR
Dénaturation 98oC
Hybridation 60-65oC
Amplification 72oC
Repeat
AVEC TAQ POL
Au labo 9 explique ce qu’on fait vite vite
On veut voir le génotype de nos souris pour déterminer lesquelles sont transgéniques.
On étudie le rôle de Akt et ses trois isoformes dans les cancers en faisant des KO dans des tissus spécifiques grâce a la CRE recombinase et ses sites LoxP.
On insère la gène de la CRE dans le gène du récepteur de progestérone.
DÉPISTAGE GÉNÉTIQUE
Pourquoi est-ce qu’on chauffe nos prots dans western Blot?
Pour assurer une dénaturation complète avec l’action du SDS et du B-mercaptoéthanol
Quel est l’avantage de la technique direct zol DNA/RNA miniprep kit
Tu as ton ADN et ARN dans une colonne et fais éluer les d’eux séparément en utilisant des tampons diff
C quoi et a queoi sert le TRIzol dans le labo 7?
Solution thiocynate de guanidium et phénol.
On s’ne sert pour solubiliser le culot.
- dénature prots (désactive RN/DNase)
- phenol extrait prots et acides nu
C quoi le chelex et a quoi ça sert dans labo 7? Pk on s’en sert juste sur les aliquotd de B?
-Solution qui se lie aux ions 2+ nécessaires aux nucléases (inhibent)
- purifie ADN et ARN
On s’en sert sur B parce que elles peuvent sécréter RNases et DNases
C quoi de l’eau DEPC
Eau traitée au diethylpyrocarbonate pour inhiber les RNases
On fait quoi avec le surnageant dans le labo 7?
Au début après avoir solubilisé les cellules et mis le trizol -> on le récupère (contient protsARN et ADN)
Quels éluats on garde dans le labo 7?
- ARN celui qu’on fait eluer aveccde l’eau
- ADN: celui qu’on fait eluer avec le tampon ADN elution
Comment fonctionne le NANodrop? Et permet de donner quelles données?
C un UV spectrophotomètre (mesure ABS de lumière UV)
- concentrations en ng/uL
- ratio de pureté vs prots et sels
L’ABS de ADN et ARN c 260nm
À quoi sert le EDTA dans le labo 8 pour faire migration
Molécule qui désactive enzymes dépendantes aux métaux (nucleases) en se liant au Fe et Ca2+
À quoi sert le TBE et c quoi dans la confection des gels d’agarose?
Tri borate EDTA buffer.
Utile pour la séparation de petits fragments. C un buffer pour le EDTA
Décrire P53 à quoi elle sert et quelle forme à la protéine et de que ça fait.
C un supredseur de tumeur qui bloque le cycle cellulaire à un point de contrôle pour s’assurer que l’ADN est bien correct.
C un tétramère, si un seul allèle mute ça devient dominant
