Extracción de ADN

Question 1

¿Para qué se requiere la extracción de ADN?

Answer 1

Es el primer paso para los estudios de biología molecular y tecnicas de DNA recombinante, secuenciación, mutagénesis

Question 2

Campos en los que se usa la extracción de ADN

Answer 2

• Forense
• Bioinformática
• Nanotecnología de ADN
• Historia y Antropología

Question 3

¿De qué depende la elección del método de extracción? (4)

Answer 3

• Tipo de Ac. Nucleico que se va a extraer (mRNA, rRNA, ssDNA…)
• Organismo origen (proacariota, virus, planta)
• Fuente de ác nucleico(cultivo celular, tejido, sangre, suero, expectoración, orina y LCR)
• Técnica en que se utilizará ác nucleico

Question 4

Fuentes de Ác. Nucleico

Answer 4

• Sangr
• Suero
• Plasma
• Biopsia
• Orina, heces
• LCR
• Líquido sinovial/ amniótico
• Esputi
• Semen
• Raspado bucal
• Floículo capilar

Question 5

Características del fenol cloroformo

Answer 5

• Obtienes ADN de buena calidad y cantidad
• Reactivos tóxicos
• Pérdidas significativas de DNA (sino se decanta bien)

Question 6

Pasos para extraer el ADN

Answer 6

1. Lisis de la célula (con amonio y buffer)
2. Separación de proteínas de DNA
3. Purificación (lavado sin alcohol)
4. Precipitación
5. Lavado
6. Disolución (50 ml agua)

Question 7

Técnica fenol-cloroformo (sangre)

1. Lisis de célula y liberación de DNA

Answer 7

Lisis de eritrocitos: cloruro de amonio
Lisis de mebranas celulares y nucleares: SDS (dodecilsulfato sódico)

Question 8

Técnica fenol-cloroformo (sangre)

2 Extracción de proteínas y lípidos

Answer 8

Se usan solventes orgánicos
* Fenol: cloroformo: alcohol isoamílico 25:24:1
* Fase orgánica: fenol: lípidos, proteínas y debris celulares
* Fase acuosa: acidos nucléicos

Question 9

Técnica fenol-cloroformo (sangre)

3 Precipitación de DNA

Answer 9

Mediante sol salina saturada y etanol al 100%

Question 10

Técnica fenol-cloroformo (sangre)

4 Lavado de DNA

Answer 10

Con etanol al 70% y agua

Question 11

Extracción por columnas

Answer 11

De extrae la muestra, se rompen células, se mete muestra en tubo con un filtro de membrana por debajo (que atrae el ADN y lo atora)
Se lava DNA para quitar desecho en el frasco debajo
Se quIta filtro para ver ADN

Question 12

Técnica columnar ventajas /desventajas

Answer 12

No se obtiene tanto ADN pero es de más calidad

Question 13

Espectrofotometría

Answer 13

Solución con moléculas suspendidas que permite el paso de un haz de luz a través de ella en proproción inversa a las moléculas que contiene

Mientras más luz absorba mayor concetración

Question 14

Función espectrofotometría

Answer 14

Comporbar que DNA se haa extraído bien y no haya residuos

Question 15

A los cuantos nm de luz UV se absorbe el
* DNA/RNA
* Proteínas
* Fenol

Answer 15

• DNA/RNA absorción: 260nm
• Proteínas : 280 nm
• Fenol: 270

Entre+ proteínas o fenol= más contaminada está la extracción, sirve -

Question 16

Espectrofotometría en pocas palabras

Answer 16

Metodo específico para ver DNA, pones 1ml y se puede ver la cantidad de DNA y proteínas