Fundamentos Flashcards
Hematoxilina y eosina
Tricrómico de Masson
Núcleo: la hematoxilina férrica con pH acido al estar asociada a un mordiente férrico forma un catión (+) que le permite unirse a los ácidos nucleicos presentes en el núcleo de la célula tiñéndolos de color negro
Citoplasma y colágena: al usar la solución de escarlata-fucsina esta tiñe todos los elementos acidófilos del tejido, como lo son la colágena, citoplasma y fibras musculares. Para corregir esto se usa la solución de heteropoliácidos esto hace que la escarlata difunda de la colágena, pero no del citoplasma, esto se da porque las fibras colágenas son mas permeables y permiten la unión del azul de anilina mientras que las fibras musculares y citoplasma se mantendrán teñidos con la escarlata fucsina
- Los heteropoliácidos se ubican al interior de la colágena y tienen múltiples grupos ácidos, lo que les permite al azul de anilina ser el colorante catiónico que se une al colágeno por medio del heteropoliácidos
Impregnación argéntica con Gomori
Las fibras reticulares al ser argirófilas son capaces de absorber la plata sin reducirla, por lo que la impregnación de las fibras reticulares se da por iones de plata, los que una vez reducidos se transforman en plata metálica en las fibras reticulares la que se ve de color negro al microscopio
Tinción de fibras elásticas con orceína acida
La tinción selectiva de las fibras elásticas por la orceína se da porque es un colorante anfotericos apolar que presenta un gran numero de sitios de unión al colorante la que se da por medio de puentes de hidrogeno y fuerzas de Van der Waals, además las fibras elásticas al ser apolar repelen menos a los colorantes catiónicos y las fibras elásticas al ser poco permeables una vez que se unen al colorante es resistente a la extracción con alcohol lo que permite teñirlas de color rojo violáceo
Tinción de fibras elásticas con hematoxilina férrica de Verhoeff
Las fibras elásticas se unen al colorante por medio de puentes de hidrogeno en donde el colorante es el dador de hidrogeno y las fibras elásticas las receptoras del sustrato, además tienen una fuerte afinidad por el complejo hierro-hematoxilina (mas que los otros componentes del tejido) por lo que retiene el colorante en el paso de diferenciación con cloruro férrico que actúa como mordiente manteniendo teñidas las fibras elásticas de color negro, mientras que los demás elementos tisulares se decoloraran
Tinción de Gram para identificación de bacterias
En la tinción de Gram el cristal violeta tiene afinidad por los peptidoglicanos que están en la pared bacteriana, el Lugol hace el papel de mordiente (fija el color) e impedirá la salida de cristal violeta mediante la formación de un complejo cristal-yodo que satura los espacios del peptidoglicano que está en la pared bacteriana, el alcohol-acetona se encarga de deshidratar la pared bacteriana y cierra los poros de la misma, además destruye la membrana externa (presente en las bacterias Gram negativas) debido a que es soluble a la acción de disolventes orgánicos como el alcohol-acetona. Las bacterias gran positivas (morado) al tener mayor cantidad de peptidoglicano en comparación a las negativas (rosado) retiene con mayor fuerza el complejo cristal violeta-yodo. En esta tinción la safranina es un colorante secundario o de contra tinción que se encarga de teñir las bacterias que no pudieron retener el complejo cristal violeta-yodo
Tinción de Ziehl-Neelsen
La tinción se basa en las propiedades de la pared celular de los microorganismos acido alcohol resistente que está formada por ácidos micólicos, la tinción de Ziehl Neelsen al tener un compuesto fenólico carbol fucsina como colorante básico permite interactuar con los ácidos grasos de la pared celular la que se puede mejorar con presencia de calor debido a que la cera se derrite y las moléculas del colorante se mueven hacia el interior de la pared celular del Mycobacterium. Como colorante secundario se utiliza azul de metileno que hace el contraste de fondo permitiendo que las células decoloradas con el ácido sean teñidas con azul de metileno, quedando teñidas con fucsina solo las que son alcohol acido resistente.
Tinción de Kinyoun
Tiene el mismo fundamento, pero la diferencia es que no utiliza calor y se usa una concentración mayor de fenol en la preparación de fucsina fenicada
Tinción de Fite-franco para identificación de bacilos acido resistentes como bacilo de Hansen (lepra) o nocardia, también llamada tinción de ZN modificada con acido mas débil
Se usa porque el bacilo de la lepra tiene una pared menos resistente a la decoloración con acido que los bacilos de la tuberculosis (bacilo de Koch), por lo tanto, necesitan de una decoloración con solución de acido acuoso para que se mantengan teñidos. Es importante evitar o disminuir los pasos por alcohol porque la decoloración se hace con acido sulfúrico al 10%
Tinción de hongos con método PAS (ácido peryodico-Schiff)
Se usa el reactivo de Schiff que es un leuco colorante (fucsina que fue tratada con anhídrido sulfuroso y que como resultado se obtuvo una solución incolora porque la fucsina con la sulfuración pierde los grupos cromóforos (paraquinoide) pero que tiñe y mancha de color fucsia)
Este reactivo reacciona con grupos químicos como los aldehídos los que no se encuentran en los tejidos pero sí hay grupos hidroxilos próximos entre sí en la mucosa los que son potencialmente transformados en aldehídos, esto último se hace con una previa oxidación con ácido periódico para transformar los grupos hidroxilos a grupos aldehídos
Los grupos aldehídos como se tratan después con el reactivo de Schiff haciendo que reaccionen formando un compuesto coloreado porque readquiere los grupos cromóforos formando un complejo diferente al original de color fucsia, a estas sustancias que se colorean con tratamiento de ácido periódico se les llama PAS positivo
La pared de los hongos es rica en mucina las que tienen glúcidos con grupos transformantes en aldehídos dan PAS positivo
Tinción de Hongos con método de Grocott
Al igual que en el método de PAS, se oxidan los potenciales grupos aldehídos que en este caso se usa ácido crómico como oxidante de las paredes de los hongos en donde se obtienen los aldehídos
Se impregna con un complejo alcalino de plata-metenamina lo que permite que se depositen iones de plata sobre las zonas donde hay aldehídos que después se ven de color negro porque son argentafines
Tinción de Giemsa para identificación de protozoo como tripanosoma y muestras citológicas
Usa un contraste entre colorantes ácidos (eosina) que tiñe la hemoglobina (porque es básica) y básicos (azul de metileno) que tiñe los ácidos nucleicos (porque son ácidos), para lograr teñir las estructuras básicas y ácidas. El azul de metileno al ser colorante metacromático entrega una tonalidad variable a las distintas estructuras de acuerdo a la carga de polianiones que tengan y la eosina entrega una coloración mas estable tiñendo de color rojo-naranja
Tinción para muestras citológicas con método de Papanicolau
Es una técnica que emplea hematoxilina de Harris para la tinción nuclear y una mezcla de colorantes ácidos para la tinción citoplasmática.
Los colorantes ácidos utilizados son eosina Y, verde luz y Orange G.
Sirve para teñir de diferentes tonalidades los citoplasmas de las células provenientes de los distintos estratos del epitelio escamoso cervical:
- Las células basales, parabasales, endocervicales y endometriales se tiñen de color cian (azulado)
- Las células del estrato intermedio se colorean en tono ligeramente azulado
- Las células superficiales o elementos patológicos con signos de cornificación se colorean rosado anaranjado
Tinción para muestras citológicas con método de May-Grunwald Giemsa
Modificación que agrega a la tinción con Giemsa dos colorantes adicionales que es la eosina y azul de metileno en solución metanólica.
En metanol, los colorantes se encuentran en estado no iónico y al agregar agua se ionizan y se unen al sustrato coloreándolo (sustrato basófilo, eosinófilo o neutrófilo)
Al igual que en el Giemsa simple, la coloración puede ser ortocromática o metacromática
Tinción para muestras citológicas con método de May-Grunwald Giemsa
Modificación que agrega a la tinción con Giemsa dos colorantes adicionales que es la eosina y azul de metileno en solución metanólica.
En metanol, los colorantes se encuentran en estado no iónico y al agregar agua se ionizan y se unen al sustrato coloreándolo (sustrato basófilo, eosinófilo o neutrófilo)
Al igual que en el Giemsa simple, la coloración puede ser ortocromática o metacromática
