Histogicka technika MS Flashcards

Question

Metachromázia

Answer 1

jav kedy sa niektoré štruktúry farbia iným odtieňom ako je tón použitého roztoku farbiva. Podľa farebného tónu rozoznávame: Metachromázia beta: - fialovočervené sfarbenie Metachromázia gama: - červeným až rúžovočerveným sfarbením Kyslé mukopolysacharidy sú pozit. gama-metachromatické a negat. beta- metachromatické. Mukoproteíny a glykoproteíny sú negat gama-metachromatické a negat. alebo slabo pozit. beta-metachromatické.

Answer 2

Konžská červeň tvorí nepolárne vodíkové väzby s amyloidom, pričom vzniká červené až rúžové sfarbenie. Pri pohľade polarizačným mikroskopom: je pre amyloid charakteristický jablkovo zelený dvojlom a dichromizmus. Používajú sa preparáty fixované neutrálnym formolom zaliate do parafínu.

Answer 3

Amyloid: tmavočervený /tehlovočervený jadrá bb.: modré

Answer 4

Nie je plne špecifické, pretože pozitivitu dávajú aj eozinofilné granuly a eslastické vlákna.

Answer 5

STATOR: - pevná časť - nachádzajú sa na nej 2 časovacie disky, na ktorých sa nastavuje požadovaný čas (po ktorý je spracované tkanivo ponorené v roztoku) - novšie typy sú riadené počítačom (stačí vložiť potrebný program) - sú tu umiestnené kyvety: stúpajúca rada alkoholov, acetón, acetón-xylén, xylén na roztoky a parafínové piecky (56-58°C). ROTOR: - pohyblivá časť - zabezbečuje presun košíkov z jednej kyvety do druhej, na nej sú upevnené kryty na nádoby, kt. zabraňujú vyparovaniu roztokov. - ramienko na zavesenie košíka s excíziami

Answer 6

1. odvodnenie 2. presýtenie látkou rozpúšťajúcou parafín 3. presýtenie parafínom

Answer 7

1. odvodnenie 2. presýtenie látkou rozpúšťajúcou parafín 3. presýtenie parafínom 4. vlastné zalievanie

Answer 8

v stúpajúcej rade alkoholov: 70%, 80%, 96%, 96% OH. Robíme to preto aby sme predišli zvrášteniu tkaniva vložením priamo do konc.OH.

Answer 9

Alkohol sa musí z tkaniva odstrániť lebo parafín sa v alkohole nerozpúšťa. Preto sa tkanivo presycuje látkou, kt. dobre rozpúšťa parafín, ale súčasne sa zlučuje s alkoholom. Používané látky presycujúce tkanivo: S nižším bodom varu: dajú sa z tkaniva dobre odstrániť v parafínovom kúpeli alebo v termostate, napr. benzén 80°C, xylén 140°C. S vyšším bodom varu: nedajú sa z tkaniva dobre odtrániť, ale vytvárajú s nimi dobre rezateĺnú hmotu (vysoká cena) napr. metylbenzoát 190°C, metylsalicylát 220°C, cédrový olej 240°C.

Answer 10

Po presýtení látkou rozpúšťajúcou parafín prenášame tkanivo do tekutého parafínu a to buď priamo alebo cez parafín-xylén. Ide o nesýtený roztok parafínu v xyléne pri 40°C. Z parafín-xylénu sa tkanivo prenesie do čistého parafínu.

Answer 11

Princípom zalievania do parafínu je presýtenie odvodneného tkaniva parafínom pri teplote 56-58°C. Parafín vyplní mikroskopické štrbiny v tkanivách, následne je možné tkanivo rezať na niekoľko mikrometrov. Ide o najpoužívanejšiu metódu zalievania tkaniva histologickej technike. My na zalievanie používame automatický prístroj Leica.

Answer 12

+ : - ľahká a rýchla - parafín je dostupný, lacný - tkanivá je možné rezať na veľmi tenké rezy -: - zvráštenie tkaniva po odvodnení a presýtení parafínom pri vysokej teplote - parafín nie je vhodný na zalievanie tuhých tkanív, šlachy, chrupky, kosť - nie je vhodná na zalievanie tkanív, v ktorých máme dokázať lipidy

Answer 13

riedením 40% formalínu vodovodnou vodou v pomere 1:9

Answer 14

+: - rýchlo preniká do tkaniva - tkanivo sa po fixácii dobre farbí - tkanivo sa dobre spevňuje a konzervuje - pri krátkej fixácii nerozpúšťa tuky -: - v tkanivách bohatých na krv spôsobuje: hrdzavohnedé formolové zrazeniny, nepatrné napučiavanie tkaniva

Answer 15

pripravíme ho riedením neutrálneho formolu fyziologickým roztokom v pomere 1:9 = 1 diel neutrálneho formolu a 9 dielov fyzilogického roztoku. Neutrálny formol: Do flaše s neriedeným formolom nasypeme CaCO3 a pretrepávame. V priebehu niekoľkých dní sa formol zneutralizuje. Takýto formol sa riedi vodou 1:9.

Answer 16

HCl spôsobuje uvoľňuje Fe3+ z väzby na bielkovinu. Železo v ďalšom kroku reaguje s ferokyanidom draselným za vzniku farebného komplexu nazývaný berlínska (pruská) modrá. Nakoniec sa pikrofuchsínom ofarbí svalovina na žlto a kolagénové vlákna na červeno.

Answer 17

jadrá: modrofialové železo (hemosiderín): modré ery: žlté svalovina: žltá kolagénové väzivo: červené

Answer 18

Nie. Je dvojzložkové farbivo.

Answer 19

Princípom farbenia je prítomnosť 2 farbív: kyslého a zásaditého. Zásadité farbivo je hematoxylín a ako kyslé farbivo sa používa eozín. Eozín farbí cytoplazmu, svalovinu, ery a ostatné tkanivové štruktúry. Zásadité (bázické farbivo) farbí jadrový chromatín, čo zafarbuje jadro. Kombinácia oboch farbív nám spoľahlivo dokáže odlíšiť v histologickom preparáte jednotlivé štruktúry.

Answer 20

ODPARAFÍNOVANIE: xylén I …..10 min. xylén II …..10 min. 96% OH…...5 min. 70% OH……5 min. destil.voda…3 min. 1. FARBENIE HEMATOXYLÍN (bázické): hematoxylín……..5-10 min. destil.voda ………opach 96% kyslý etanol…oplach obyč.teč.voda…….10 min. 2. FARBENIE EOZÍN (kyslé): 0,1% eozín ……..1 min. 96% OH………….oplach ODVODNENIE: 70%OH………5 min. 96%OH………5 min. PREJASNENIE: karboxylén/acetón……3 min. xylén I………………….5 min. xylén II …………………5 min. MONTOVANIE VÝSLEDOK FARBENIA: jadro - modré - hematoxylín cytoplazma - ružová - eozín svalovina - červená - eozín ery - oranžové - eozín všetky ostatné súčasti tkanív - v tónoch ružovej

Answer 21

Hematoxylín sa do lab. dostáva vo forme žltohnedého prášku, alebo kryštálikov rozpustných vo vode alebo alkohole. 1g hematoxylínu rozpustíme v 1000 ml dest. vody. Po rozpustení roztok hematoxylínu sám o sebe nefarbí, farbí až po oxidácii na hematein. Oxidácia môže prebiehať samovoľne – ide o zrenie hematoxylínu, čo môže trvať aj mesiac. Preto oxidáciu urýchľujeme pridávaním oxidačných činidiel (jodičnan sodný, draselný). Ani hemateínom nemôžeme farbiť priamo, ale musíme pripraviť tzv. farebný lak hemateínu pridávaním moridla. Podľa charakteru moridla poznáme hematoxylín: Kamencové – Harrisov, Mayerov Železité – Weigertov železitý → farebným lakom môžeme farbiť: PRIAMO: Kamencové hematoxylíny = progresívne farbenie Rezy najprv presýtime moridlom a potom ich vložíme do roztoku farbenia, takže farebný lak sa vytvorí priamo v tkanive = regresívne farbenie.

Answer 22

V metodike sa používa na zafarbenie tuku olejová červeň, táto preniká do tukovej štruktúry, pričom sa v nej rozpustí a zafarbí. Na kontrastné zafarbenie jadra použijeme Meyerov hematoxylín.

Answer 23

tuk: červeno (Olejová červeň) jadrá: modré (Meyerov hematoxylín)

Answer 24

- Tkanivo v kt. chceme dokázať tukové látky sa nesmie dostať do styku s rozpúšťadlami tukov (vysokopercentný etanol, benzén, xylén, éter). - Tkanivo nemôžeme zalievať do parafínu ani do celoidínu. - Na fixáciu tkaniva používame 10% neutrálny formol (krátkodobo), najlepšie Bakerovu tekutinu. Fixácia nemá trvať dlhšie ako 48 hod. - Tkanivo režeme na zmrazovacom mikrotóme - Kryostat. - Zafarbené rezy montujeme do: glycerínu, glycerínovej želatiny alebo sirupu z arabskej gumy. Používame montovacie média miešateľné s vodou - napr. želatina. Apáthyho sirup (sirup z arabskej gumy): Je výborná látka na montovanie preparátov, kt. sa nesmú odvodňovať, lebo má vysoký index lomu. Určitá nevýhoda je, že pri montovaní vznikajú v preparáte vzduchové bublinky. Montovanie do glycerínu: Má nevýhody, pretože zo zamontovaných preparátov sa ľahko stŕhajú krycie sklíčka a preparáty pomerne ľahko vysychajú.Na montovanie sa používa úplne nový bezvodný glycerín. Pri tomto montovaní krycie sklíčko orámujeme asfaltovým lakom, aby sme zabránili vyschnutiu rezu. Montovanie do gylcerínovej želatiny: Glycerínová želatina má tuhé skupenstvo a preto ju pred použitím necháme napučiavať/rozpustiť vo vodnom kúpeli. Montujeme klasicky. - Základnou metódou na dôkaz lipidov je farbenie tkaniva farbivami rozpustnými v tukoch a nerozpustnými vo vode (farbivo sa v tukoch rozpustí a tým ho zafarbí). Medzi takéto farbenia patrí: SUDAN III (tuky sa farbia na červeno) Sudánová čierna (tuk sa farbí na modročierno až čierno) Olejová červeň (tuk sa farbí na červeno) Sudánové farbivá a olejová červeň farbia najmä neutrálny tuk, ale prifarbujú aj tuky inej povahy, preto sú tieto metódy základnou orientačnou metódou. Okrem neutrálneho tuku sa pomerne dobre dajú dokazovať fosfolipidy. Tuková bunka = adipocyt Zákl. metódy znázornenia lipidov: Olejová červeň: farbí nepolárne lipidy, triglyceridy a MK. Sudánová červeň: ale nefarbí voľné MK.

Answer 25

Z polysacharidov sa za prítomnosti kys. jodistej uvoĺňujú aldehydové skupiny, ktoré reagujú so Schiffovým reagensom za vzniku červenorúžového (ciklamenového) komplexu.

Answer 26

PAS pozit. látky (glykogén, neutrálne mukopolysacharidy, mukoproteíny): purpurovo červeno jadrá bb.: modré

Answer 27

Kyselina fuchsín siričitá

Answer 28

Retikulárne vlákna sú veľmi jemné vetviace sa vlákna tvoriace siete. Nefarbia sa, ale znázorňujú = impregnujú, označujú sa aj ako argentafilné. Účinkom slabých kyselín nenapučiavajú. Nemenia sa na glej. Impregnačné metódy sa zakladajú na presýtení tkanivových rezov roztokmi soli striebra. Soli striebra sa vyredukujú na retikulárnych vláknach, čím sa “zafarbia”.

Answer 29

retikulárne vlákna - čierne pozadie - svetlé jadrá - modré

Answer 30

Na znázornenie retikulárnych vláken sa najčastejšie používajú impregnačné metódy. Zakladajú sa na presýtení tkanivových rezov roztokmi soli striebra. Soli striebra sa vyredukujú na retikulárnych vláknach, čím sa “zafarbia”. Najviac sa používa Gomoriho metóda a Footova metóda. Pri impregnácii treba dodržiavať čistotu skla a dostatok svetla (UV, solárna lampa).

Histogicka technika MS Flashcards

(54 cards)