Klutivacia

Question 1

Kultivacia podmienky

Answer 1

Kultivačná pôda
Optimálna teplota
pH prostredia
Plynné prostredie
Dĺžka kultivácie
Správne spracovanie a očkovanie materiálu

Question 2

Kultivačná pôda

Answer 2

Zloženie pôdy volíme podľa účelu,.na ktorý ju chceme použiť. Pri kultivacii b. sa musí zabezpečiť dostatok všetkých živín, rastových faktorov a vitamínov.

Question 3

Materiál na prípravu kultivačnej pôdy

Answer 3

Živočíšneho (krv, sérum)
Rastlinného (agár)
Syntetické a polosynteticke prípravky

Question 4

1. Podľa pôvodu a prípravy

Answer 4

A) prirodzené - mlieko, chlieb, zemiak
B) syntetické- agarový základ
C) polosynteticke- fosforečnansodny

Question 5

2. Podľa konzistencie

Answer 5

A) tekuté - pôdy rozmnožovacie (živný bujón) používajú sa na rozmnožovanie pôvodcu pred izoláciou na pevnej pôde
B) pevné- rast mikróbov v izolovaných kolóniách ich základnou súčasťou je agarova riasa

Question 6

3. Podľa použitia

Answer 6

A) základné - na nich vyrastie veľká väčšina bežne sa vyskytujúcich baktérií ( bujón, pepton)
B) diagnostické- k nim sa pridávajú rôzne substráty, rozkladom týchto substrátov enzýmy bak. dochádza k zmenám v pôde ( farba, tvorba plynu) Napr: krvný agar, Endova pôda, ČA
C) selektivne alebo vylučovacie- obsahujú látky, ktoré potláčajú rast nežiadúcich baktérií a umožňujú alebo podporujú rast hľadaného mikróbu ( Soubouraudova pôda)

Question 7

Optimálna teplota

Answer 7

Pre väčšinu MO patogennych pre človeka je Optimalna 37°C
Pre vtáky: 39°C
Pre studenokrvne živočíchy: 25°C
Baktérie žijúce vo voľnej prírode: 20°C

Question 8

pH prostredia

Answer 8

pH 7,2-7,4 pre MO patogenne pre človeka a zvieratá

Question 9

Výnimky pH prostredia

Answer 9

pH 2 laktobacily
pH 8,2 vibrio cholerae
pH 9,8 enterokoky
pH 7,8 patogenne stafylokoky

Question 10

Druhy kultivácie

Answer 10

Statická
hĺbková
kontinuálna

Question 11

Statická kultivácia

Answer 11

baktérie sa množia v určitom ohraničenom množstve kultivačnej pôdy.
Čerpajú z nej živiny ale aj vylučujú do nej metabolity
Po dosiahnutí určitej koncentrácie metabolitov, vyčerpaní určitej časti živín a po dosiahnutí pH prostredia sa množenie bakterií pozastavuje

Question 12

Hĺbková( submerzná) kultivácia

Answer 12

používa sa hlavne na priemyselné ciele sa miešaním a prevzdušnením kultúry, rastúcej takisto v učitom obmedzenom objeme kult. pôdy, urýchľuje metabolizms, čím sa rýchlejšie dosiahne vyššia koncentrácia kultúry - výroba antibiotík

Question 13

kontinuálna kultivácia

Answer 13

Používa sa na štúdium baktériovej fyziológie a genetiky. Vo vhodnej aparatúre sa jednak trvale privádzajú potrebné živiny, jednak sa odvádzajú metabolity a látky, ktoré normálne brzdia rast a množenie baktérií.
Tak sa bakteriálna populácia udržiava trvale v exponenciálnej fáze množenia

Question 14

Rastový cyklus baktérií

Answer 14

lag- fáza adaptácie
log- fáza akcelerácie
stacionárna fáza
fáza poklesu

Question 15

Lag- fáza adaptácie

Answer 15

prispôsobovanie sa baktérií novému prostrediu

Question 16

log- fáza akcelerácie

Answer 16

stúpa metabolická aktivita bakt. sa množia
intenzívna proteosytéza

Question 17

stacionárna fáza

Answer 17

bakt. pomerne odolné proti vonkajším vpylvom u niektorých bakt. dochádza k sporulácií
niekoľko hodín až dní

Question 18

fáza poklesu

Answer 18

zostupná fáza, mŕtve bakt. sú v prevahe nad živými

Question 19

Rast baktérií v tekutých pôdach

Answer 19

rast baktérií sa prejavuje formou difúzneho zákalu, povrchovej blanky alebo ich kombináciou. Sediment môže byť zrnitý, vločkovitý alebo homogénny.
Blanka býva jemná, pevná alebo drobivá

Question 20

Rast baktérií v pevnej pôde

Answer 20

rast niektorých baktérií na pevných pôdach je tak charakteristický, že niektoré MIO sa dajú identifikovať bez ďalších testov

Question 21

Morfológia kolónií

Answer 21

Veľkosť: priemer v mm
Tvar: bodkovitý (pologuľatý) , cirkulárny, vláknitý, nepravidelný, vretenovitý,
meňavkovitý
Vyvýšenie : plochý, vyvýšený,, konvexný kopovitý v strede vyvýšený umbilikálny
Okraje : bývajú presne ohraničené – hladké, vlnité, laločnaté, lúčovité, vláknité, zúbkovité
Farba: od bezfarebných kolónií po silne pigmentované ( šedé, biele, žlté, hnedé, čierne,….)
Povrch: suchý, mukózny, zrnitý, hladký, drsný, lesklý, matný, poprehýbaný, karfiolovitý
Hustota: priesvitné, priehľadné,
Konzistencia: mazľavá, maslovitá, hlienovitá (Klebsiella pneumonia), vodnatá, suchá
(Moraxella catarrhalis, Bacillus cereus), drobivá, hladká…
Zápach a vôňa: fekalovitý, hnilobný, amoniakálny

Question 22

Zmena okolia kolónie

Answer 22

Hemolýza:
Alfa – viridácia – čiastočné prejasnenie krvi okolo kolónie so zelenkavým zafarbením média.
Beta – úplné prejasnenie média okolo kolónie
Gama – bez zmeny

Question 23

Disociačná fáza kolónií

Answer 23

a) fáza M – hlienovité (mukózne) pripomínajúce kvapky oleja, okrúhle, ostro ohraničené.
opúzdrené, preto sú najvirulentnejšie
b) fáza S – hladké, lesklé, okrúhle. Bez púzdier
c) fáza R – kolónie drsného povrchu, nepravidelné okraje. Virulencia MIO znížená, alebo úplne chýba

Question 24

Kultivačný dôkaz baktérií

Answer 24

Kultivácia je postup, pri ktorom sa zabezpečuje rozmnožovanie mikroorganizmov v laboratórnych podmienkach. Cieľom kultivácie je izolácia a rozmnoženie mikroorganizmov zo vzorky biologického materiálu odobratého od pacienta so suspektnou bakteriálnou infekciou.

Question 25

Rast baktérií v tekutých pôdach

Answer 25

 mäsovopeptónový bujón – hovädzí odvar s peptónom a NaCl  pečeňový bujón – bujón s kúskami varanej pečene  sérový, ascitový bujón – bujón s konským alebo hovädzím sérom  glukózový bujón – bujón s 0,5 – 1% glukózou  fosfátový bujón – bujón s glukózou a fosforečnanmi pH 7,2 – 7,4  peptónová voda – 1 – 5% peptónu a 0,5% NaCl

Question 26

Hodnotenie rastu baktérií v tekutých kultivačných pôdach:

Answer 26

Rast baktérii v tekutých pôdach:  vo forme zákalu (enterobaktérie),  vo forme blanky na povrchu pôdy (pseudomonády)  vo forme sedimentu (streptokoky). Povrchová blanka môže byť pevná alebo drobivá, sediment vločkovitý, zrnitý alebo homogénny.

Question 27

Rast baktérií na tuhých pôdach

Answer 27

Na pevných pôdach rastú baktérie v kolóniách. Pod bakteriálnou kolóniou sa rozumie spoločenstvo buniek, ktoré vzniká obvykle na povrchu kultivačnej pôdy z pôvodnej (aj jedinej) životaschopnej bunky. Kolónie predstavujú až stovky miliónov živých potomkov a sú viditeľné voľným okom.

Question 28

Plynné prostredie

Answer 28

 Obligátne aeróbne – vyžadujú kyslík – typ metabolizmu oxydatívna fosforylácia (respirácia) /vibriá, sarcíny, mykobaktérie/  Obligátne anaeróbne – vyžadujú prostredie bez kyslíka, kyslík je pre ne toxickí – typ metabolizmu je fermentácia - nedostatok niektorých enzýmov na rozklad detoxikáciu napr. peroxidu vodíka /klostrídia/  Fakultatívne anaeróbne – znášajú kyslík aj bezkyslíkaté prostredie – fermentácia a respirácia /väčšina saprofytických a patogénnych mikróbov/  Mikroaerofilné – vyžadujú znížený obsah kyslíka v prostredí. Normálny obsah kyslíka je pre ne toxický /laktorbacily/  Anaerobne aerotolerantné – anaeróbna respirácia (fermentácia), prežívanie aj za prítomnosti kyslíka /brucely, neisérie/

Question 29

Dĺžka kultivácie

Answer 29

MO prevažne kultivujeme 24 až 48 hod, výnimkou je micobacterium tuberculosis ( 5 – 6 týždňov), anaerobné baktérie a brucely (niekoľko dní - týždne)

Question 30

Správne spracovanie a očkovanie materiálu

Answer 30

Zachovanie sterility pri práci, dodržanie sterility pri všetkých pracovných úkonoch je jednou zo základných podmienok úspešných kultivácií (správna manipulácia s pôdami, pri očkovaní používať sterilné kľučky, pipety, nástroje)