Laboratoire 1-6 Flashcards
(191 cards)
1
Q
Qu’est-ce qu’un milieu de culture en laboratoire?
A
Un milieu de culture est un support physique utilisé en laboratoire pour permettre la croissance et la multiplication des bactéries
2
Q
Pourquoi est-il important que le milieu de culture soit stérile au départ?
A
Il est important que le milieu de culture soit stérile au départ pour éviter toute contamination par des micro-organismes indésirables qui pourraient perturber les résultats de l’expérience
3
Q
Q: Quelles sont les conditions nécessaires pour la croissance bactérienne dans un milieu de culture?
A
R: La croissance bactérienne dans un milieu de culture nécessite que certaines conditions chimiques et physiques soient respectées, telles que la présence de tous les éléments nutritifs et énergétiques nécessaires, ainsi que des conditions physiques optimales telles que la température, l’iso tonicité et le pH appropriés.
4
Q
Q: Quelles sont les deux catégories de milieux de culture basées sur leur composition chimique?
A
R: Les deux catégories de milieux de culture sont les milieux définis ou synthétiques et les milieux complexes.
5
Q
Q: Quelle est la principale différence entre les milieux définis et les milieux complexes?
A
R: Les milieux définis ont une composition moléculaire bien établie et reproductible, tandis que les milieux complexes sont composés d’extraits de tissus animaux ou végétaux dont la composition exacte n’est pas précisément connue.
6
Q
Q: Quels sont les trois types de milieux de culture utilisés en microbiologie?
A
R: Les trois types de milieux de culture utilisés en microbiologie sont les milieux liquides, solides et semi-solides.
7
Q
Q: Quelle est la différence entre les milieux liquides et les milieux solides?
A
R: Les milieux liquides contiennent uniquement des éléments nutritifs dissous dans l’eau, tandis que les milieux solides contiennent également un agent gélifiant pour les rendre rigides.
8
Q
Q: Qu’est-ce qui distingue les milieux semi-solides des milieux solides?
A
R: Les milieux semi-solides contiennent moins d’agent gélifiant, ce qui les rend plus mous que les milieux solides. Ils sont dispensés dans des tubes en position debout et sont souvent désignés comme gélose profonde.
9
Q
Q: Quel est l’agent gélifiant le plus fréquemment utilisé dans les milieux de culture en microbiologie?
A
R: L’agent gélifiant le plus fréquemment utilisé est l’agar, un polysaccharide complexe extrait de certaines algues marines rouges.
10
Q
Q: Pourquoi l’agar est-il préféré à la gélatine dans les milieux de culture microbiologique?
A
R: L’agar est préféré à la gélatine car il se solidifie à une température plus élevée (42°C) et reste solide à température corporelle (37°C), ce qui est optimal pour la croissance bactérienne. En revanche, la gélatine se liquéfie à des températures inférieures (28°C).
11
Q
Q: Qu’est-ce qu’une culture pure?
A
R: Une culture pure est une culture contenant une seule espèce de bactérie et issue d’une seule cellule.
12
Q
Q: Qu’est-ce que la culture primaire?
A
R: La culture primaire est une technique d’isolement utilisée pour séparer les différentes bactéries d’un mélange et obtenir des colonies isolées et pures sur la surface d’un milieu solide en Pétri.
13
Q
Q: Comment se développe une colonie bactérienne sur un milieu gélosé?
A
R: Durant l’incubation, chaque bactérie sur le milieu gélosé se multiplie pour former un clone de cellules identiques. Lorsque ces bactéries sont suffisamment éloignées les unes des autres, le clone se développe de façon optimale et forme une colonie.
14
Q
Q: Qu’est-ce que le repiquage?
A
R: Le repiquage consiste à réinoculer la bactérie soit d’un milieu liquide à un milieu solide ou liquide, soit d’un milieu solide à un autre milieu solide ou à un milieu liquide, après l’obtention d’une culture pure.
15
Q
Q: Quelles sont les méthodes alternatives pour isoler des bactéries?
A
R: Les méthodes alternatives pour isoler des bactéries incluent l’isolement par dilution et étalement sur la gélose, ainsi que l’isolement par dilution dans la masse dans la gélose.
16
Q
Q: Quelle est la première étape du processus d’identification bactériologique?
A
R: La première étape du processus d’identification bactériologique est l’isolement sur gélose pour obtenir un produit mono bactérien à partir d’un mélange pluribactérien.
17
Q
Q: Quels sont les types de tests utilisés pour l’identification bactériologique?
A
R: Les types de tests utilisés pour l’identification bactériologique comprennent les examens microscopiques, les tests biochimiques et les tests sérologiques.
18
Q
Q: Quelles sont les étapes de décontamination en cas d’accident avec du matériel contaminé?
A
R: En cas d’accident avec du matériel contaminé :
L’équipier sort un plat et un support.
Le tube contaminé est déposé sur le support dans le plat identifié comme contaminé.
Les mains doivent être décontaminées deux fois pendant deux minutes avec un savon antibactérien.
Le plat est remis à une personne responsable.
19
Q
Q: Pourquoi est-il important d’aviser un responsable en cas d’accident avec du matériel contaminé?
A
R: Il est important d’aviser un responsable en cas d’accident avec du matériel contaminé pour assurer une décontamination appropriée et éviter la propagation de la contamination.
20
Q
Q: Quels sont les critères à observer sur des colonies isolées sur gélose en boîte de Pétri?
A
R: Les critères à observer sur des colonies isolées sur gélose en boîte de Pétri comprennent la forme, l’élévation, la marge, la grosseur, la couleur, l’odeur, l’opacité, la texture et l’aspect de la surface des colonies.
21
Q
Q: Quels sont les types de formes que peuvent avoir les colonies bactériennes?
A
R: Les colonies bactériennes peuvent avoir des formes circulaires, irrégulières, etc.
22
Q
Q: Comment mesure-t-on la grosseur d’une colonie isolée sur gélose en boîte de Pétri?
A
R: La grosseur d’une colonie isolée sur gélose en boîte de Pétri est mesurée en utilisant des critères tels que ponctiforme, petite, moyenne ou grosse, en fonction de leur diamètre.
23
Q
Q: Qu’est-ce que l’hémolyse sur gélose au sang et quels sont ses types?
A
R: L’hémolyse sur gélose au sang fait référence à la dégradation des globules rouges. Ses types sont alpha (at), bêta (B) et gamma (y).
24
Q
Q: Quels critères sont observés sur la gélose en pente?
A
R: Sur la gélose en pente, on observe l’aspect des colonies inclinées.
25
Q: Pourquoi est-il nécessaire d'utiliser un microscope pour observer les bactéries?
R: Les bactéries sont des cellules très petites et peu contrastantes, rendant leur observation à l'œil nu impossible. Ainsi, un microscope est nécessaire pour les observer.
26
Q: Quelles informations peut-on obtenir lors de l'examen microscopique à l'état frais des bactéries?
R: L'examen microscopique à l'état frais des bactéries permet de détecter leur présence, d'identifier leur forme générale, de visualiser leur mobilité (due aux flagelles), d'observer le bourgeonnement des levures et de distinguer certains constituants cellulaires comme les vacuoles et le noyau chez les levures.
27
Q: Quelle est la difficulté principale de l'observation des bactéries à l'état frais au microscope?
R: La principale difficulté de l'observation des bactéries à l'état frais au microscope est leur petite taille, ce qui rend leur forme difficile à observer même à un grossissement maximal de 400X.
28
Q: Pourquoi est-il recommandé d'utiliser très peu de lumière lors de l'examen microscopique à l'état frais des bactéries?
R: Il est recommandé d'utiliser très peu de lumière lors de l'examen microscopique à l'état frais des bactéries car cela permet une observation plus précise en minimisant les reflets et en améliorant le contraste.
29
Q: Qu'est-ce que l'examen à l'état frais permet d'observer concernant la mobilité des microorganismes?
R: L'examen à l'état frais permet d'observer la mobilité des microorganismes, c'est-à-dire leur déplacement dans une direction donnée ou des culbutes, grâce à leurs flagelles.
30
Q: Quelle est la différence entre la mobilité des bactéries et le mouvement Brownien?
R: La mobilité des bactéries se réfère au déplacement des bactéries dans une direction donnée ou des culbutes grâce à leurs flagelles, tandis que le mouvement Brownien est un mouvement vibratoire des bactéries dû aux collisions avec les molécules du fluide environnant.
31
Q: Qu'est-ce que le courant de convection et comment se distingue-t-il de la mobilité des bactéries?
R: Le courant de convection est dû à la chaleur et entraîne toutes les bactéries dans le même sens et à la même vitesse. Il se distingue de la mobilité des bactéries car il est un mouvement passif induit par des forces externes, tandis que la mobilité des bactéries est un mouvement actif dû à leurs flagelles.
32
Q: Quel est le but de l'expérience d'examen de lames de collection de bactéries?
R: Le but de l'expérience est de se familiariser avec différents types de bactéries et de reconnaître leur morphologie après coloration.
33
Q: À quelle puissance doit-on observer les lames de collection de bactéries?
R: Les lames de collection de bactéries doivent être observées à une puissance de 1000X avec l'huile à immersion.
34
Q: Quelles sont les formes les plus courantes de bactéries?
R: Les formes les plus courantes de bactéries sont les cocci (coques) et les bacilles.
35
Q: Citez quelques exemples de formes de bactéries mentionnées dans le texte.
R: Quelques exemples de formes de bactéries mentionnées dans le texte sont les microcoques (coques), les bacilles, les vibrions, les spirilles, les diplobacilles, les diplocoques, les tétracoques, les sarcines, les staphylocoques, les chaînes de coques et les chaînes de bacilles.
36
Q: Pourquoi utilise-t-on la coloration sur des microorganismes tués?
R: L'utilisation de la coloration sur des microorganismes tués augmente considérablement le contraste et rend les cellules clairement visibles.
37
Q: Quels sont les objectifs de la coloration des bactéries?
R: Les objectifs de la coloration des bactéries sont :
Repérer les formes des microorganismes.
Différencier les structures des cellules.
Permettre des grossissements plus importants.
38
Q: Quelles sont les structures des bactéries qui peuvent être différenciées par la coloration?
R: Les structures des bactéries qui peuvent être différenciées par la coloration comprennent la capsule, l'endospore, les flagelles, la paroi cellulaire, le matériel nucléaire, le cytoplasme, etc.
39
Q: Quelle est la puissance de grossissement utilisée pour l'examen après coloration des bactéries?
R: La puissance de grossissement utilisée pour l'examen après coloration des bactéries peut être plus importante, jusqu'à 990X.
40
Q: Qu'est-ce qu'un colorant cationique ou basique?
R: Un colorant cationique ou basique est un colorant dont le chromophore est un ion positif. Ces colorants ont une affinité pour la surface des cellules bactériennes car celles-ci possèdent une charge de surface négative lorsque le pH est près de la neutralité ou légèrement alcalin.
41
Q: Quels sont quelques exemples de colorants basiques utilisés en bactériologie?
R: Quelques exemples de colorants basiques utilisés en bactériologie sont le bleu de méthylène, le cristal violet, la safranine et le vert de malachite.
42
Q: Pourquoi les colorants basiques travaillent-ils mieux dans un environnement neutre ou légèrement alcalin?
R: Les colorants basiques travaillent mieux dans un environnement neutre ou légèrement alcalin car les charges négatives des surfaces bactériennes sont plus prononcées dans ces conditions, ce qui favorise l'affinité des colorants basiques pour les cellules bactériennes.
43
Q: Pourquoi la coloration d'une vieille culture bactérienne peut-elle donner de moins bons résultats?
R: La coloration d'une vieille culture bactérienne peut donner de moins bons résultats car les acides neutraliseront les charges négatives des surfaces bactériennes, réduisant ainsi l'affinité des colorants pour les cellules bactériennes.
44
Q: Qu'est-ce qu'un colorant anionique ou acide?
R: Un colorant anionique ou acide est un colorant dont le chromophore est un ion négatif. Ces colorants, tels que l'éosine et la nigrosine, ont une affinité pour les protéines.
45
Q: Dans quel contexte en bactériologie utilise-t-on principalement les colorants anioniques?
R: En bactériologie, les colorants anioniques comme l'éosine et la nigrosine sont principalement utilisés dans les colorations négatives pour colorer le fond de la lame.
46
Q: Qu'est-ce qu'un colorant neutre?
R: Un colorant neutre est un colorant composé de deux chromophores, un positif et un négatif, qui se neutralisent mutuellement.
47
Q: Quel est un exemple de colorant neutre et dans quel domaine est-il utilisé?
R: Un exemple de colorant neutre est le Giemsa, utilisé en parasitologie.
48
Q: Quels sont les trois types de colorations que vous allez expérimenter lors de cet exercice?
R: Les trois types de colorations sont les suivants :
Colorations simples : utilisant un seul colorant pour déceler la présence d'un microorganisme qui sera alors entièrement coloré.
Colorations différentielles : utilisant une combinaison de colorants pour tirer avantage des différences chimiques entre les bactéries, où chaque type de bactérie sera coloré différemment.
Colorations structurales : mettant en évidence une structure particulière de la bactérie, comme l'endospore, la capsule, les flagelles ou les inclusions.
49
Q: Pourquoi est-il nécessaire de traiter les cellules bactériennes à la chaleur avant une coloration?
R: Il est nécessaire de traiter les cellules bactériennes à la chaleur avant une coloration pour les tuer et les fixer sur la lame. La fixation permet d'arrêter les réactions chimiques en coagulant le protoplasme bactérien et de faire adhérer les bactéries sur la lame afin de ne pas les perdre au lavage.
50
Q: Quelle est l'importance de la préparation adéquate d'un frottis bactérien?
R: La préparation adéquate d'un frottis bactérien est importante car sa qualité influence grandement la réussite d'une coloration et son interprétation. Une préparation inadéquate peut rendre l'action et le rinçage des colorants difficiles, cristalliser l'excès de colorant sur la lame, et rendre ardue la détermination de la morphologie et de l'arrangement précis des bactéries.
51
Q: Comment doit-on ajuster la préparation du frottis bactérien selon le type de milieu de culture utilisé?
R: À partir d'un bouillon, où la quantité de bactéries est souvent faible, il est préférable de délimiter la zone d'étalement en faisant un cercle d'au moins un centimètre de diamètre avec un crayon gras. En revanche, à partir d'un milieu solide, il faut prélever une petite portion de colonie et l'étaler de façon à obtenir une mince pellicule de bactéries.
52
Q: Quelles sont les étapes de préparation d'un frottis bactérien à partir d'un milieu liquide?
R: Les étapes de préparation d'un frottis bactérien à partir d'un milieu liquide sont les suivantes :
Déposer une mini-goutte d'une culture liquide au centre de la lame.
Disperser les microorganismes sur une large surface (1.5 - 2.0 cm).
Laisser sécher la lame à la température de la pièce.
Fixer le frottis en passant 2 ou 3 fois à travers la flamme avec l'aide de pinces et non avec les doigts.
53
Q: Quelles sont les étapes de préparation d'un frottis bactérien à partir d'un milieu solide?
R: Les étapes de préparation d'un frottis bactérien à partir d'un milieu solide sont les suivantes :
Déposer 1 bouclée ou une mini-goutte d'eau au centre de la lame.
Émulsionner une parcelle d'une colonie isolée dans l'eau avec le fil bouclé et disperser l'étalement (2 cm).
Laisser sécher la lame à la température de la pièce.
Fixer le frottis en passant 2 ou 3 fois à travers la flamme avec l'aide de pinces et non avec les doigts.
54
Q: Comment réalise-t-on une mini-goutte à partir d'une pipette Pasteur?
R: Pour réaliser une mini-goutte, on laisse monter par capillarité le liquide dans la pipette Pasteur, puis on penche légèrement le tube pour faire monter plus de liquide. Ensuite, avec l'index, on ferme l'extrémité de la pipette, on ferme le tube, et on appuie la pipette Pasteur sur la surface de la lame sans enlever l'index de l'extrémité de la pipette Pasteur. L'étalement se fait ensuite avec l'aide de la pipette Pasteur.
55
Q: Qu'est-ce que la coloration simple et quel est son avantage?
R: La coloration simple utilise un seul colorant et est donc très rapide à réaliser. Elle permet d'étudier la forme générale ainsi que l'arrangement des microorganismes.
56
Q: Quels sont les matériaux nécessaires pour réaliser cette coloration?
R: Les matériaux nécessaires sont du yogourt (avec ou sans probiotiques) et du bleu de méthylène 5%.
57
Q: Quelles sont les étapes à suivre pour réaliser cette coloration?
R: Les étapes sont les suivantes :
Prélever un peu de yogourt à l'aide du fil bouclé et l'étaler sur une lame dégraissée sans ajout d'eau.
Laisser sécher à la température de la pièce avant de fixer.
Fixer à la chaleur.
Recouvrir le frottis de bleu de méthylène et attendre 2 minutes.
Laver avec un mince filet d'eau du robinet.
Sécher entre des papiers buvards sans détacher les feuilles.
Observer au microscope à l'immersion (1000X).
58
Q: Quelle est la couleur des microorganismes, des granulations cytoplasmiques, des spores et des vacuoles après la coloration?
R: Les microorganismes se colorent en bleu, les granulations cytoplasmiques en bleu foncé, tandis que les spores et les vacuoles (si présentes) restent incolores.
59
Q: Qu'est-ce que la coloration de Gram et en quoi consiste-t-elle?
R: La coloration de Gram est une coloration différentielle qui divise les bactéries en deux groupes : les bactéries Gram positives, qui retiennent le cristal violet et apparaissent en violet foncé, et les bactéries Gram négatives, qui perdent le cristal violet et apparaissent roses après coloration à la safranine.
60
Q: Quels sont les réactifs utilisés dans la coloration de Gram et quel est leur rôle?
R: Les réactifs utilisés sont :
Cristal violet : colorant primaire qui colore toutes les bactéries en bleu violet.
Iode de Gram ou Lugol : mordant qui augmente l'affinité entre le colorant et les composantes bactériennes.
Alcool à 95% : agent décolorant qui décolore les bactéries Gram négatif.
Safranine : colorant de contraste qui colore en rose les bactéries précédemment décolorées.
61
Q: Quel est l'avantage de la coloration de Gram?
R: La coloration de Gram est l'une des techniques les plus utilisées en bactériologie car elle permet une distinction rapide entre les bactéries Gram positives et Gram négatives, ce qui peut être crucial pour le diagnostic et le traitement des infections.
62
Quel est le but de la coloration del Vecchio ?
Le but de la coloration del Vecchio est de mettre en évidence les granulations métachromatiques dans le corps bacillaire des Corynebacterium.
63
Quelle est la caractéristique morphologique des Corynebacterium qui est mise en évidence par cette coloration ?
Les Corynebacterium présentent des extrémités renflées, réalisant un aspect de massue ou parfois en haltère (pléomorphisme), et sont regroupés en petit nombre, réalisant des arrangements rappelant les lettres de l'alphabet chinois ou des paquets d'épingles.
64
Qu'est-ce que les granulations métachromatiques dans le corps bacillaire des Corynebacterium ?
Ce sont des granulations colorées en bleu foncé dans le corps bactérien des Corynebacterium.
65
Quel matériel est nécessaire pour réaliser la coloration del Vecchio ?
Le matériel nécessaire comprend du Corynebacterium sur gélose (culture de 48 heures), du bleu de méthylène à 1 %, du lugol (iode de Gram), et de la safranine de Gram.
66
Quelles sont les étapes de la méthode de la coloration del Vecchio ?
Les étapes de la méthode sont : préparer un frottis sur une lame dégraissée, fixer le frottis à la chaleur, faire agir le bleu de méthylène 1 % pendant 1 minute, laver à l'eau, recouvrir la lame de lugol (iode de Gram), chauffer jusqu'à émission de vapeur pendant 1 minute, laver à l'eau, surcolorer 1 minute avec la safranine (safranine de Gram), laver à l'eau, et enfin sécher aux papiers buvards sans frotter.
67
Combien de temps faut-il faire agir le bleu de méthylène ?
Il faut faire agir le bleu de méthylène pendant 1 minute.
68
Quel est le rôle du lugol dans cette coloration ?
Le lugol agit comme mordant, augmentant l'affinité entre le colorant et les composantes bactériennes.
69
Comment procède-t-on à la surcoloration avec la safranine ?
On surcolore pendant 1 minute avec la safranine (safranine de Gram), puis on lave à l'eau.
70
Quels sont les résultats attendus de la coloration del Vecchio ?
Le corps bactérien est coloré en jaune et les granulations sont colorées en bleu foncé. En cas de surcoloration à la safranine, le corps bactérien est coloré en rose.
71
Quelle est la couleur des granulations métachromatiques dans le corps bactérien selon les résultats de la coloration ?
Les granulations métachromatiques dans le corps bactérien sont colorées en bleu foncé.
72
Qu'est-ce que la coloration de Wirtz-Schaeffer-Fulton permet de mettre en évidence ?
La coloration de Wirtz-Schaeffer-Fulton permet de voir la spore (verte) et la cellule végétative (rose) des bactéries sporulées.
73
Pourquoi les spores sont-elles difficiles à colorer avec une coloration ordinaire comme la coloration de Gram ?
Les spores sont difficiles à colorer avec une coloration ordinaire car elles résistent à la coloration ordinaire et apparaissent sous forme de régions non colorées à l'intérieur de la cellule végétative.
74
Quel est le rôle de la chaleur dans la coloration de Wirtz-Schaeffer-Fulton ?
La chaleur permet au colorant (vert de malachite) de pénétrer à l'intérieur de la spore. De plus, elle détruit la paroi cellulaire, permettant ainsi à la cellule végétative d'être colorée par la safranine.
75
Quels sont les critères de classification des bactéries sporulées ?
Les critères de classification des bactéries sporulées sont :
La forme de l'endospore (elliptique ou sphérique)
La grosseur de l'endospore (non déformante ou déformante)
La position de l'endospore dans la cellule végétative (centrale, terminale ou subterminale)
76
Quelles sont les positions possibles de l'endospore dans la cellule végétative selon la classification ?
Les positions possibles de l'endospore dans la cellule végétative sont centrale, terminale ou subterminale.
77
Quelle est la couleur des spores dans la coloration de Wirtz-Schaeffer-Fulton ?
Les spores apparaissent en vert dans la coloration de Wirtz-Schaeffer-Fulton.
78
Comment la cellule végétative est-elle colorée dans la coloration de Wirtz-Schaeffer-Fulton ?
La cellule végétative est colorée en rose dans la coloration de Wirtz-Schaeffer-Fulton, car elle est colorée par la safranine après que sa paroi cellulaire ait été détruite par la chaleur.
79
Quel type de gélose est utilisé pour cultiver Bacillus subtilis et Clostridium sporogenes ?
Bacillus subtilis est cultivé sur gélose d'au moins 48 heures et/ou sur une gélose spéciale qui induit la sporulation, comme le milieu AK. Clostridium sporogenes est cultivé sur gélose anaérobique de 48 heures.
80
Quels sont les deux colorants utilisés dans cette méthode de coloration des spores ?
Le vert de malachite à 5.0 % et la safranine à 0.25 % (safranine de Gram) sont utilisés.
81
Quelle est la première étape après avoir fait des frottis sur des lames dégraissées ?
La première étape est de fixer les frottis à la chaleur.
82
Quelle est la durée d'action du vert de malachite ?
Le vert de malachite est laissé agir pendant 5 minutes avec émission de vapeur.
83
Quelle est la couleur du corps bactérien et de la spore dans les résultats de cette coloration ?
Le corps bactérien apparaît rose, tandis que la spore apparaît verte.
84
Pourquoi est-il recommandé de préparer un frottis supplémentaire pour chacune des bactéries et de faire une coloration de Gram ?
Cela permet de comparer les méthodes de mise en évidence des spores avec la coloration de Gram, et de confirmer la présence des spores dans les échantillons de bactéries étudiés.
85
Quelles sont les bactéries ciblées par la coloration de Ziehl-Neelsen ?
La coloration de Ziehl-Neelsen cible principalement les mycobactéries et certaines Nocardia.
86
Pourquoi certaines bactéries, comme les mycobactéries, sont difficiles à colorer avec des colorants basiques ?
Ces bactéries sont difficiles à colorer en raison de la présence de cire et de graisse autour ou dans leur protoplasme.
87
Quel est le but de la première étape de la coloration de Ziehl-Neelsen ?
La première étape consiste à faire pénétrer le colorant, la fuschine basique phéniquée de Ziehl, dans les bactéries par chauffage.
88
Quelle est la caractéristique des mycobactéries après la coloration de Ziehl-Neelsen ?
Les mycobactéries restent roses après la coloration, car une fois le colorant bien pénétré dans ces bactéries, il présente plus d'affinité pour la cire que pour l'alcool.
89
Quelle est la différence de couleur entre les mycobactéries et les autres bactéries après la coloration ?
Les mycobactéries apparaissent roses (acido-alcoolo-résistantes) tandis que les autres bactéries apparaissent bleues après décoloration et contre-coloration.
90
Quelle est l'alternative à la coloration de Ziehl-Neelsen dans les cas douteux ?
L'alternative est la coloration fluorescente à l'auramine, qui permet de détecter les bactéries au microscope à fluorescence.
91
Quels sont les principaux composants utilisés dans la coloration de Ziehl-Neelsen ?
Les composants principaux sont la fuschine carbolique de Ziehl, l'alcool-acide et le bleu de méthylène.
92
Quelle est la couleur des bactéries acido-alcoolo-résistantes (AAR) après la coloration ?
Les bactéries acido-alcoolo-résistantes sont colorées en rose.
93
Comment apparaissent les bactéries acido-alcoolo non résistantes (non-AAR) après la coloration ?
Les bactéries acido-alcoolo non résistantes (non-AAR) sont colorées en bleu.
94
Question : Qu'est-ce qu'un milieu sélectif en microbiologie ?
Réponse : Un milieu sélectif est un milieu de culture qui inhibe la croissance des bactéries interférentes ou indésirables tout en favorisant la croissance des organismes souhaités.
95
Question : Quelle est la fonction des milieux d'enrichissement en microbiologie ?
Réponse : Les milieux d'enrichissement favorisent la croissance de certaines bactéries présentes en faible nombre dans un mélange en stimulant leur croissance au détriment des autres bactéries, permettant ainsi d'augmenter la proportion de la bactérie désirée dans une culture bactérienne.
96
Question : Quels sont les composants des milieux enrichis en microbiologie ?
Réponse : Les milieux enrichis contiennent des substances nutritives spéciales telles que du sang, du sérum ou des facteurs de croissance particuliers qui favorisent la croissance des bactéries fastidieuses.
97
Question : Qu'est-ce qu'un milieu différentiel en microbiologie ?
Réponse : Un milieu différentiel est un milieu de culture qui contient des ingrédients permettant à certains microorganismes de développer une apparence différente de celle des autres, ce qui permet de distinguer les différentes espèces bactériennes en croissance sur le même milieu.
98
Q : Quel est l'avantage de l'utilisation de la gélose au sang en microbiologie ?
R : La gélose au sang est un milieu de culture enrichi qui favorise la croissance des bactéries fastidieuses grâce à la présence de sang, tout en permettant la distinction des types d'hémolyse.
99
Q : Quelles sont les trois types d'hémolyse observables sur la gélose au sang et comment sont-elles distinguées ?
R : Les trois types d'hémolyse sont l'alpha (α), la bêta (ß) et la gamma (γ). L'hémolyse alpha se manifeste par une zone verte autour des colonies, la bêta par une zone claire et la gamma par l'absence d'hémolyse.
100
Q : Qu'est-ce que la gélose Phényléthanol et comment fonctionne-t-elle ?
R : La gélose Phényléthanol est un milieu sélectif qui inhibe temporairement la croissance des bactéries Gram négatif tout en permettant la croissance des bactéries Gram positif. Elle contient du Phényléthanol qui inhibe les bactéries Gram négatif, favorisant ainsi la croissance des bactéries Gram positif.
101
Q : Quel est le rôle du Phényléthanol dans la gélose Phényléthanol ?
R : Le Phényléthanol permet d'inhiber temporairement la croissance des bactéries Gram négatif, ce qui facilite l'isolement des colonies de bactéries Gram positif présentes parmi d'autres colonies sur le milieu de culture.
102
Q : Quelle méthode est recommandée pour confirmer le résultat douteux d'un Gram à partir d'une colonie isolée sur la gélose Phényléthanol ?
R : Il est recommandé de confirmer le Gram positif ou négatif par un test de KOH à partir d'une colonie isolée sur la gélose Phényléthanol. Une coloration Gram des colonies peut également être effectuée pour confirmer avant de procéder au repiquage.
103
Q : Quel est le rôle du NaCl dans la gélose mannitol-sel et quelles bactéries cible-t-il ?
R : Le NaCl à une concentration de 75 g/l dans la gélose mannitol-sel inhibe la croissance des bactéries non halophiles, ciblant ainsi les bactéries halophiles, notamment les cocci Gram positif comme Staphylococcus et quelques Micrococcus.
104
Q : Comment distingue-t-on les colonies mannitol positif (MANNITOL +) des colonies mannitol négatif (MANNITOL -) sur la gélose mannitol-sel ?
R : Les colonies mannitol positif sur la gélose mannitol-sel présentent un halo jaune autour, tandis que les colonies mannitol négatif n'ont pas de halo jaune.
105
Q : Quels sont les composants de la gélose MacConkey et comment fonctionnent-ils ?
R : La gélose MacConkey contient des sels biliaires et du cristal violet qui inhibent la croissance des bactéries Gram positif. Elle contient également un indicateur de pH, le rouge neutre, qui colore les colonies en fonction de leur capacité à fermenter le lactose.
106
Q : Comment les colonies lactose positif (LACTOSE +) et lactose négatif (LACTOSE -) apparaissent-elles sur la gélose MacConkey ?
R : Les colonies lactose positif sur la gélose MacConkey sont rose-rouge, tandis que les colonies lactose négatif sont incolores.
107
Q : Quelles réactions observer autour des colonies lactose positif et lactose négatif sur la gélose MacConkey et pourquoi sont-elles significatives ?
R : Autour des colonies lactose positif, on observe une précipitation des sels biliaires, donnant une apparence opaque. Ceci est dû à la production d'acidité par les bactéries. Pour les colonies lactose négatif, il peut y avoir une alcalinisation du milieu, ce qui peut changer la couleur du milieu.
108
Q : Quels sont les composants de la gélose SS (Salmonella-Shigella) et comment fonctionnent-ils ?
R : La gélose SS contient des sels biliaires pour inhiber les bactéries Gram positif, du vert brillant pour inhiber totalement ou partiellement les coliformes et les bactéries lactose positif, ainsi que du thiosulfate et du citrate ferrique pour détecter la production de gaz H2S.
109
Q : Comment les colonies lactose positif (LACTOSE +) et lactose négatif (LACTOSE -) apparaissent-elles sur la gélose SS ?
R : Les colonies lactose positif sur la gélose SS sont roses, tandis que les colonies lactose négatif sont incolores. Les colonies H2S positif ont un centre noir.
110
Q : Quels sont les composants de la gélose EMB (éosine bleu de méthylène) et comment fonctionnent-ils ?
R : La gélose EMB contient de l'éosine Y et du bleu de méthylène, qui sont des colorants bactériostatiques à pH acide. Ils inhibent la croissance des bactéries Gram positif. Ces colorants forment un complexe pourpre dans la colonie.
111
Q : Comment les colonies lactose positif (LACTOSE +) et lactose négatif (LACTOSE -) apparaissent-elles sur la gélose EMB ?
R : Les colonies lactose positif sur la gélose EMB sont pourpres ou ont un centre foncé avec un pourtour incolore. Les colonies de lactose positif rapide, comme E. coli, peuvent avoir un reflet vert métallique dû à la précipitation du complexe. Les colonies lactose négatif sont incolores.
112
Q : Quelles sont les utilisations principales du milieu sélénite en microbiologie ?
R : Le milieu sélénite est utilisé comme milieu d'enrichissement pour favoriser la croissance des Salmonella et des Shigella, en particulier lorsqu'elles sont présentes en petite quantité dans des échantillons de matières fécales, de la nourriture ou des produits laitiers. Il agit également comme milieu sélectif en inhibant les bactéries Gram positif.
113
Q : Comment le milieu sélénite agit-il sur les bactéries Gram positif et les bacilles Gram négatif à lactose positif ?
R : Le sélénite inhibe la croissance des bactéries Gram positif et retarde la croissance des bacilles Gram négatif à lactose positif pendant les 18 premières heures.
114
Q : Pourquoi le milieu sélénite est-il particulièrement adapté pour favoriser la croissance des Salmonella et des Shigella ?
R : Le milieu sélénite favorise la croissance des Salmonella et des Shigella car ces bactéries sont capables de réduire le sélénite, ce qui produit des déchets alcalins qui réduisent l'activité du milieu. De plus, après 18 heures d'incubation, les coliformes et les Enterococcus sont ralentis tandis que les Salmonella et Shigella continuent à croître.
115
Q : Pourquoi le milieu sélénite ne peut-il pas être autoclavé ?
R : Le milieu sélénite ne peut pas être autoclavé car il est dégradé par une chaleur excessive.
116
Q : Qu'est-ce que le sulfure d'hydrogène (H2S) et comment est-il produit par certaines bactéries ?
R : Le sulfure d'hydrogène (H2S) est un gaz incolore très soluble dans l'eau. Il est produit par certaines bactéries à partir de deux composés présents dans le milieu de culture : la cystéine, un constituant des peptones, et le thiosulfate. La formation de H2S implique l'action de deux enzymes spécifiques.
117
Q : Comment peut-on détecter la formation de H2S dans un milieu de culture ?
R : La formation de H2S peut être détectée en utilisant des ions ferriques comme indicateur. Lorsque le H2S réagit avec les ions ferriques, il forme un précipité de sulfure ferreux, qui est un précipité noir insoluble. Le citrate ferrique, par exemple, agit comme indicateur dans le milieu Salmonella-Shigella (SS).
118
Q : Quelles sont les étapes du processus de laboratoire pour détecter la formation de H2S à partir de cultures pures ?
R : Le processus de laboratoire pour détecter la formation de H2S à partir de cultures pures se déroule en deux parties :
Isolement des bactéries à partir de cultures pures afin de visualiser les réactions sur différentes géloses.
Isolement des bactéries à partir de mélanges. Un isolement adéquat permet de reconnaître les genres en se référant aux isolements des cultures pures et aux résultats de la coloration de Gram.
119
Q : Pourquoi les tests d'identification biochimiques et physiologiques sont-ils importants dans la détermination de l'espèce bactérienne ?
R : Les tests d'identification biochimiques et physiologiques sont essentiels car ils fournissent des informations complémentaires sur les caractéristiques des bactéries, notamment leur capacité à utiliser certaines substances nutritives et à produire certains produits métaboliques. Cela aide à différencier les espèces bactériennes qui peuvent être similaires en apparence et en coloration au Gram, mais qui sont associées à différents types d'infections.
120
Q : Quelle est l'influence des enzymes sur la nature des produits métaboliques bactériens ?
R : Les enzymes, dont les bactéries sont capables de produire en fonction de leur code génétique, ont une influence directe sur la nature des produits métaboliques bactériens. Les bactéries produisent des endoenzymes qui agissent à l'intérieur de la cellule ainsi que des exoenzymes qui peuvent diffuser dans le milieu environnant. Ces enzymes, qu'elles soient hydrolytiques ou anaboliques, dégradent les grosses molécules en molécules plus petites, ce qui influence la composition chimique du milieu et les produits terminaux du métabolisme bactérien.
121
Q : Quelle est la différence entre les bactéries aérobies et anaérobies ?
R : Les bactéries sont classées comme aérobies ou anaérobies en fonction de leur capacité à croître en présence ou en absence d'oxygène. Les bactéries aérobies peuvent croître en présence d'oxygène et utilisent la respiration comme mécanisme principal pour générer de l'énergie. En revanche, les anaérobies ne peuvent pas croître en présence d'oxygène, car la respiration bactérienne en présence d'oxygène produit du peroxyde d'hydrogène (H2O2), qui est toxique pour ces bactéries.
122
Q : Comment les conditions anaérobiques favorisent-elles la croissance des bactéries anaérobies ?
R : Les conditions anaérobiques, caractérisées par une absence d'oxygène ou un niveau très bas d'oxygène, fournissent un environnement propice à la croissance des bactéries anaérobies. Les organismes anaérobies ont besoin de milieux privés d'oxygène ou contenant des substances réductrices pour se développer. Ces conditions sont généralement présentes dans des environnements anoxiques, tels que les blessures écrasées, les hématomes ou les tissus comprimés, où le niveau d'oxydation des tissus est réduit. Les milieux de culture anaérobiques en laboratoire, tels que le bouillon de viande cuite ou ceux contenant de l'acide thioglycolique ou de la cystéine, sont utilisés pour fournir un environnement favorable à la croissance des bactéries anaérobies.
123
Q : Comment réalise-t-on des conditions anaérobiques en laboratoire ?
R : Les conditions anaérobiques en laboratoire peuvent être réalisées de plusieurs manières. On peut retirer l'oxygène d'un milieu de culture en tube en le portant à ébullition pendant 20 minutes, suivi d'un refroidissement rapide jusqu'à 40-45°C. Ensuite, le tube est inoculé généreusement sans agitation et hermétiquement fermé ou recouvert d'une couche d'huile minérale pour empêcher la diffusion d'oxygène. Les milieux contenant de l'acide thioglycolique ou de la cystéine sont également utilisés pour induire une anaérobiose. Pour une absence complète d'oxygène dans un environnement de culture, on utilise des jarres anaérobiques, telles que la gélose de Brewer, qui éliminent l'oxygène et permettent le développement de colonies anaérobies en surface.
124
Q : Comment fonctionne le système Gas Pack pour créer des conditions anaérobies en laboratoire ?
R : Le système Gas Pack, commercialisé par la compagnie BBL, est une méthode couramment utilisée pour créer des conditions anaérobies en laboratoire. Il consiste en une jarre munie d'un catalyseur fixé au couvercle. À l'intérieur de la jarre, un sachet spécial en aluminium contenant des substances réactives est placé avec les cultures. Lorsque la jarre est hermétiquement fermée, l'hydrogène dégagé par le sachet réagit avec l'oxygène ambiant en présence du catalyseur de palladium pour former de l'eau. Une bandelette imprégnée de bleu de méthylène ou de résazurine est également insérée dans la jarre pour servir d'indicateur d'oxydoréduction. En l'absence d'oxygène, ces indicateurs deviennent incolores, tandis qu'en présence d'oxygène, ils conservent leur couleur bleue ou rose.
125
Q : Quelles sont les substances réactives présentes dans le sachet spécial en aluminium du système Gas Pack ?
R : Le sachet spécial en aluminium du système Gas Pack contient deux types de pastilles réactives. La première pastille contient du borohydrure de sodium ou tétrahydroborate de sodium (NaBH4), qui réagit avec l'eau pour produire du borate de sodium et de l'hydrogène (H2). La deuxième pastille contient du bicarbonate de sodium (NaHCO3), de l'acide citrique et de l'eau, ce qui génère du dioxyde de carbone (CO2) et d'autres produits. Ces réactions chimiques libèrent de l'hydrogène et du dioxyde de carbone, créant ainsi un environnement anaérobie dans la jarre.
126
Quels sont les types d'incubateurs utilisés pour la culture anaérobie?
Les incubateurs (hottes anaérobiques) avec apport constant de N2 ou de CO2 ou un mélange des deux.
127
Comment peut-on favoriser la croissance des bactéries anaérobies en réduisant l'oxygénation?
En utilisant des tubes très longs et de faible diamètre (Veillon) ou des tubes de Hall à étranglement pour réduire la diffusion de l'oxygène.
128
Quelle est la méthode utilisée pour cultiver des bactéries anaérobies dans des tubes avec de la gélose nutritive semi-solide?
En versant de la gélose nutritive semi-solide sur environ 15 cm dans les tubes, puis en les faisant bouillir pendant 20 minutes pour chasser l'oxygène dissous.
129
Comment procède-t-on pour ensemencer les tubes de gélose nutritive semi-solide?
En touchant une colonie avec une tige de verre, puis en la plongeant délicatement dans la gélose profonde liquide maintenue à 45°C.
130
Quels types de bactéries se trouvent au fond de la gélose dans les tubes?
Les bactéries anaérobies strictes.
131
Où se trouvent les bactéries aérobies-anaérobies facultatives dans les tubes?
Elles se trouvent sur toute la hauteur du tube.
132
Quelle est la limitation des bactéries aérobies strictes dans les tubes?
Elles sont limitées à la surface de la gélose.
133
Quelles sont les deux méthodes expérimentées pour faire croître des bactéries anaérobies?
Le milieu thioglycollate comme milieu d'enrichissement et les géloses en jarre anaérobie permettant l'isolement.
134
Quels sont les deux principaux moyens pour déterminer la mobilité d'une bactérie?
La microscopie en colorant les flagelles ou l'observation directe de la mobilité par un examen à l'état frais.
135
Quel est l'avantage d'utiliser une culture jeune pour observer la mobilité des bactéries?
Une culture jeune est nécessaire car une vieille culture encombrée de milliers de cellules mortes rend l'examen difficile.
136
Quel type de milieu est couramment utilisé pour détecter la mobilité des bactéries?
Des tubes de gélose semi-solide préparés avec une gélose nutritive contenant 0,5 % d'agar.
137
Comment se manifeste la mobilité d'une bactérie dans un tube de gélose semi-solide?
Une bactérie mobile diffuse de la ligne d'ensemencement centrale vers les parois du tube.
138
Pourquoi est-il important de tenir compte de la température d'incubation lors du test de mobilité?
Parce que plusieurs bactéries sont mobiles autour de 20°C et immobiles à 37°C, bien que cette dernière soit généralement leur température optimale de croissance.
139
Quelles sont les caractéristiques des bactéries pour lesquelles le test en tube de mobilité est plus difficile à interpréter?
Il est plus difficile à lire avec les bactéries aérobies strictes qui ne croissent qu'à la surface. Il est très peu utilisé pour les bactéries anaérobies strictes.
140
Pourquoi la mobilité tend-elle à disparaître dans certaines conditions?
La mobilité tend à disparaître si la souche est maintenue longtemps sur des milieux artificiels, si la culture est chauffée ou agitée fortement et si la bactérie se trouve dans un milieu acide.
141
Quel est le rôle des cytochromes dans la chaîne respiratoire des bactéries aérobies?
Les cytochromes sont des protéines hémiques qui participent au transfert séquentiel des électrons jusqu'à l'accepteur final, l'oxygène, lors de la respiration aérobie.
142
Comment fonctionne le test à l'oxydase pour détecter la présence de l'enzyme cytochrome oxydase?
Le test à l'oxydase détecte indirectement la présence de l'enzyme cytochrome oxydase par la réaction d'oxydation du réactif tétraméthyl-p-phénylènediamine, qui devient violet en présence de l'enzyme.
143
Qu'est-ce qui réduit le réactif tétraméthyl-p-phénylènediamine lors du test d'oxydase?
L'enzyme cytochrome oxydase réduit le réactif tétraméthyl-p-phénylènediamine lors du test d'oxydase.
144
Quelle couleur prend le réactif tétraméthyl-p-phénylènediamine lorsqu'il est réduit?
Le réactif tétraméthyl-p-phénylènediamine devient violet lorsqu'il est réduit.
145
Pourquoi est-il important d'utiliser le réactif bleu de Wurster peu de temps après sa préparation?
Le réactif bleu de Wurster doit être utilisé dans les quelques heures qui suivent sa préparation car il réagit au contact avec l'oxygène et pourrait donner des faux-négatifs.
146
Quels sont les micro-organismes que vous pouvez utiliser pour effectuer le test d'oxydase?
Pseudomonas aeruginosa sur gélose, Escherichia coli sur gélose et Micrococcus sur gélose (culture vieille de quelques jours au frigo).
147
Comment prévenir les faux-négatifs lors de la réalisation du test d'oxydase?
Il est essentiel de ne pas utiliser le réactif bleu de Wurster si sa couleur est mauve, et de le conserver à l'abri de la lumière pour éviter toute réaction au contact avec l'oxygène.
148
Quel est le but des tests d'oxydation fermentation (O/F)?
Le but des tests d'oxydation fermentation (O/F) est de déterminer le type de métabolisme des sucres utilisé par les bactéries (oxydation ou fermentation) ou leur non-utilisation.
149
Quelles sont les deux voies métaboliques utilisées par les bactéries pour métaboliser les glucides?
Les deux voies métaboliques utilisées par les bactéries pour métaboliser les glucides sont l'oxydation et la fermentation.
150
Quelle est la différence principale entre la fermentation et l'oxydation en termes de besoin en oxygène?
La fermentation est un processus anaérobique, tandis que l'oxydation est un processus aérobique.
151
Quel type de bactéries peut fermenter les sucres?
Les bactéries pouvant fermenter sont généralement des aéro-anaérobies facultatives.
152
Quel indicateur de pH est utilisé dans le milieu de base semi-solide pour le test d'oxydation fermentation?
Dans le milieu de base semi-solide utilisé pour le test d'oxydation fermentation, le bromothymol bleu est utilisé comme indicateur de pH.
153
Quels sont les changements de couleur observés dans le milieu de base semi-solide en fonction du pH?
Dans le milieu de base semi-solide, la couleur est bleue en milieu alcalin, verte en milieu neutre et jaune en milieu acide.
154
Quel est le rôle de l'indicateur de pH dans le milieu de base semi-solide pour le test d'oxydation fermentation?
L'indicateur de pH dans le milieu de base semi-solide favorise la détection de la faible acidité produite par l'oxydation du glucose.
155
Quel est l'indicateur de pH utilisé dans le milieu de base semi-solide "Staphylococcus oxydation fermentation" (S-OF)?
Le bromocrésol pourpre est l'indicateur de pH utilisé dans le milieu de base semi-solide "Staphylococcus oxydation fermentation" (S-OF).
156
Comment le milieu de base semi-solide "Staphylococcus oxydation fermentation" (S-OF) permet-il de différencier les Staphylococcus des Micrococcus?
Le milieu de base semi-solide "Staphylococcus oxydation fermentation" (S-OF) permet de différencier les Staphylococcus des Micrococcus en fonction de la couleur observée en présence d'acidité, qui varie du violet foncé au jaune.
157
Quelle est la méthode d'ensemencement utilisée pour les tests d'oxydation fermentation (O/F)?
Les tests d'oxydation fermentation (O/F) sont ensemencés par piqûre centrale avec un fil droit dans deux tubes OF Gram - avec Pseudomonas et deux autres avec E. coli, ainsi que dans deux tubes OF Gram + avec Staphylococcus et deux autres avec Micrococcus.
158
Quelle est la différence entre les deux tubes dans chaque paire en ce qui concerne l'ajout d'huile minérale?
À l'un des deux tubes de chaque paire, 1 cm (15 gouttes) d'huile minérale est ajoutée.
159
Quelle est la température d'incubation pour les tests d'oxydation fermentation?
Les tubes sont incubés à 37°C jusqu'à 7 jours.
160
Quelle est l'interprétation des résultats pour un tube sans huile où l'oxydation se produit?
Dans un tube sans huile où l'oxydation se produit, le milieu devient jaune (acide).
161
Quel est le résultat pour un tube avec de l'huile où la fermentation anaérobie se produit?
Dans un tube avec de l'huile où la fermentation anaérobie se produit, le milieu devient jaune (acide).
162
Comment est indiqué le résultat de la fermentation aérobienne dans les tubes avec de l'huile?
Le résultat de la fermentation aérobienne dans les tubes avec de l'huile est indiqué par la présence de gaz, notée par un jaune (A, Gaz*).
163
Quelles sont les observations visuelles qui indiquent la fermentation aérogène dans les tubes avec de l'huile?
Dans les tubes avec de l'huile où la fermentation aérogène se produit, des coupures dans la gélose ou des bulles remontant à la surface sont observées.
164
Quels sont les indicateurs de résultats pour déterminer si la bactérie est fermentative?
Les deux tubes sont jaunes.
165
Comment sont interprétés les résultats pour une réaction oxydative?
Le tube avec de l'huile est vert ou violet, tandis que le tube sans huile est jaune en surface.
166
Quelle couleur indique une réaction inerte?
Les deux tubes sont verts ou violets.
167
Que signifie une coloration bleue qui apparaît parfois à la surface du milieu?
Il s'agit d'une alcalinisation résultant de l'utilisation des peptones.
168
Comment le milieu OF + réagit-il lorsqu'il y a production d'acidité?
Le milieu OF + passe de violet à jaune verdâtre (jaune dans un milieu violet) lorsqu'il y a production d'acidité.
169
Quelle autre information peut être obtenue à partir des milieux OF?
Il est possible d'interpréter la mobilité des bactéries sur les milieux OF.
170
Quel est le but du test de réduction des nitrates en nitrites?
Le but est de déterminer si un microorganisme est capable de réduire les nitrates en nitrites ou en N2 gazeux.
171
Quelles sont les étapes du processus de réduction des nitrates en nitrites?
Le processus se déroule en deux étapes: d'abord, les nitrates (NO3) sont réduits en nitrites (NO2) et ensuite, les nitrites sont réduits en N2 moléculaire.
172
Comment détecte-t-on la présence de nitrites dans la première étape du test?
On détecte la présence de nitrites en ajoutant deux réactifs: le réactif "A", qui est de l'acide sulfanilique dilué dans l'acide acétique, et le réactif "B", qui est de la diméthyl a-naphtylamine diluée dans l'acide acétique. En présence de nitrites, cela provoque l'apparition d'une couleur rouge.
173
Quelles sont les couleurs observées lors de l'ajout des réactifs en présence de nitrites?
En présence de nitrites, l'ajout des deux réactifs résulte en l'apparition d'une couleur rouge.
174
Quelles sont les différentes voies d'utilisation des nitrates possibles, et quels sont leurs produits terminaux?
Les différentes voies d'utilisation des nitrates peuvent donner des produits terminaux tels que les nitrites (NO2), l'ammoniac (NH3), le monoxyde d'azote (NO), le protoxyde d'azote (N2O) ou l'hydroxylamine.
175
Quelle est la méthode d'ensemencement des tubes de milieu aux nitrates?
On ensemence un colonie à la surface des 3 tubes de milieu aux nitrates en utilisant un fil bouclé, avec un tube de Durham pour chacune des bactéries testées: Pseudomonas aeruginosa, E. coli et Micrococcus luteus.
176
Quelle est la température d'incubation pour les tubes de milieu aux nitrates?
Les tubes sont incubés pendant 24 à 48 heures à 37°C.
177
Que faut-il vérifier avant d'ajouter les réactifs A et B?
Il faut vérifier si la croissance est suffisante, c'est-à-dire si le milieu est trouble. Si ce n'est pas le cas, les tubes sont réincubés pour un ou deux jours supplémentaires.
178
Comment vérifie-t-on la réduction des nitrates en nitrites?
On vérifie s'il y a présence d'une bulle de gaz à l'intérieur du tube de Durham.
179
Qu'indique l'apparition d'une couleur rouge après l'ajout des réactifs A et B?
L'apparition d'une couleur rouge dans un délai de 15 minutes indique la présence de nitrites (NO2-), ce qui signifie que le test est positif pour la réduction des nitrates.
180
Que signifie l'absence de couleur rouge après l'ajout des réactifs A et B?
Si aucune couleur n'apparaît, cela peut indiquer deux possibilités: soit le microorganisme n'a pas réduit les nitrates (nitrate -), soit les nitrates ont été réduits en NH3 ou N2 gazeux (nitrate +). Pour distinguer entre ces possibilités, on passe à l'étape 2 du test.
181
Qu'est-ce qui est ajouté lors de l'étape 2 du test?
Une pincée de poudre de zinc est ajoutée pour réduire les nitrates en nitrites.
182
Quel est le but de cette séance de laboratoire?
Le but est de démontrer la présence d'une flore microbienne dans l'environnement extérieur et sur le corps humain, afin de prendre conscience de l'abondance et de l'ubiquité des microorganismes.
183
Quel matériel est nécessaire pour cette séance de laboratoire?
Le matériel nécessaire comprend : 3 boîtes de gélose nutritive, 2 boîtes de gélose au sang, 1 boîte de gélose Sabouraud-dextrose, de l'eau physiologique stérile, 1 lame, 2 écouvillons stériles pour les surfaces et le sol, 2 écouvillons stériles pour l'oreille et le nez, 1 écouvillon stérile pour la gorge, et 1 abaisse-langue.
184
Quels sont les types d'échantillons à prélever pour donner une image variée de l'environnement universitaire?
Les échantillons à prélever peuvent inclure des surfaces variées, le sol, l'oreille, le nez et la gorge.
185
Comment sont prélevés les échantillons?
Les échantillons sont prélevés à l'aide d'écouvillons stériles pour les surfaces, le sol, l'oreille, le nez et la gorge.
186
Quels types de milieux de culture sont utilisés pour la croissance des microorganismes prélevés?
Des milieux de culture comme la gélose nutritive, la gélose au sang et la gélose Sabouraud-dextrose sont utilisés pour la croissance des microorganismes prélevés.
187
Quel est le but du test au KOH 3 %?
Le but est de différencier rapidement les bactéries Gram positives des bactéries Gram négatives lorsque le résultat du test de Gram est douteux.
188
Sur quelle base repose le test au KOH?
Le test repose sur les différences biochimiques de la paroi cellulaire bactérienne. Les bactéries Gram négatives ont une paroi cellulaire qui se brise facilement en présence d'une solution alcaline diluée comme le KOH 3 %, ce qui rend la suspension visqueuse.
189
Quel matériel est nécessaire pour effectuer le test au KOH?
Vous aurez besoin de Bacillus subtilis sur gélose, d'E.coli sur gélose et d'une solution de KOH à 3 %.
190
Comment procède-t-on à l'exécution du test au KOH?
On dépose une goutte de la solution KOH à 3 % sur une lame, puis on y ajoute un amas de bactéries prélevé avec un fil bouclé. On mélange pendant environ 1 à 1 minute 30 et on observe s'il se forme un fil visqueux.
191
Comment interpréter les résultats du test au KOH?
Si un fil visqueux apparaît, cela indique la présence de bactéries Gram négatives. En revanche, si aucun fil visqueux n'est observé, cela indique la présence de bactéries Gram positives.
