Manipulación de genes y PCR

Question 1

importancia de la extracción de DNA

Answer 1

Primer paso para todos los estudios de biología molecular, med forense, bioinformática, nanotecnología de DNA, historia y antropología

Question 2

la elección del método de extracción de adn depende de

Answer 2

• tipo de ac nucleico que se va a extraer
• organismo origen
• fuente del ácido nucleico (cultivo, sangre, tejido, lcr)
• técnica en que se utilizará el ácido nucleico extraído

Question 3

qué se requiere para la pcr

Answer 3

• secuencia de dna
• enzima dna polimeraa
• desoxirribonucleótidos (dNTP)
• primers

Question 4

función de la DNA polimerasa en PCR

Answer 4

polimeriza una cadena de DNA tomando como molde una preexistente.
se utiliza Taq (proviene de hongos)

Question 5

esquema de la PCR (pasos)

Answer 5

1. desnaturalización
   (95°C) de 20 a 30 segs
2. amplificación= hibridación
   - primers se alinean al extremo 3’
   - tm 50°C a 60°C
3. extensión o elongación
   - taq polimerasa pone nucleótidos sobre el complejo templado de primers, agrega dNTP complementarios para crear cadenas completas
   - 72°C

Question 6

características y aplicaciones de PCR estándar

Answer 6

Amplificación de un segmento de ADN utilizando dos partidores. Gel de agarosa
Aplicaciones: detección cualitativa de un segmento de ADN (está o no está)
punto final (realizada en nuestro lab)

Question 7

características y aplicaciones de PCR múltiple

Answer 7

amplificación de 2 o más segmentos en una sola reacción de amplificación. gel de agarosa
Aplicación: detección cualitativa de varios segmentos en una sola pcr
varientes covid, diferentes bacterias

Question 8

características y aplicaciones de PCR RFLP

Answer 8

(restriction fragment lenght polymorphisms)
pcr estándar con paso agregado de digestión con enzimas de restricción
aplicación: detección de polimorfismos genéticos (SNPs)

Question 9

características y aplicaciones de PCR RT (reverse transcriptase)

Answer 9

Síntesis de cADN a partir de ARN mediante transcripción reversa seguido de una pcr
aplicación: expresión de genes, detección de virus ARN (covid-19)

Question 10

características y aplicaciones de PCR TR (tiempo real) o PCR-qPCR

Answer 10

se utilizan tinciones o sondas con fluoros para la detección de los fragmentos amplificados, puede ser tipo mútliplex
aplicación: cuantificación o sea carga viral
se realiza a través de una compu, no necesita electroforesis
es mucho más específica y sensible

Question 11

análisis de ácidos nucleícos

Answer 11

sistema reportero fluoresncencia (específicos sondas fluorescentes / no específicos SYBER Green)

Cuantificación
- absoluta: número exacto de copias amplificadas, mide carga viral, concentración de ácidos nucleicos
- relativa: evalúa cambios en la expresión de genes utilizando un gen de referenia que no cambia y el gen blanco