Métabolisme Des Glucides Flashcards
(36 cards)
Nommer les 6 tests p/r au métabolisme des glucides
- O-F
- Dégradation des sucres complexes
- Production de gaz
- Kligler ou TSI
- MR-VP
- ONPG
But du test O-F
Vérifier la capacité d’une bactérie à dégrader le glucose dans des conditions d’aérobie ou d’anaérobie.
O-F
Caractéristiques du milieu
- Glucose
- indicateur de pH : bleu de bromothymol
O-F
Interprétation des résultats
I : deux tubes verts
O : oxy est jaune
F : deux tubes jaunes
Jaune = acide
Dégradation des sucres complexes
But?
Vérifier la capacité d’une bactérie à dégrader un glucide complexe.
Dégradation des sucres complexes
Milieu
- glucide à tester ( glucose, lactose, sucrose, maltose, etc.)
- indicateur de pH : bromocrésol pourpre
Dégradation des glucides complexes
Interprétation des résultats
Pourpre : pas de dégradation des glucides
Jaune (acide) : dégradation des glucides
Dégradation des glucides
Que faire pour bactéries plus exigeantes ( Neisseria, Streptocoque. Pneum. )?
Milieu plus nutritif : CTAC cystine, Trypticase Agar
Indicateur de pH : rouge de phénol
Dégradation des glucides
Principe
- dépend du bagage enzymatique de la bactérie
- PERMÉASES, situés dans la membrane cytoplasmique, qui agissent comme transporteurs des divers glucides vers l’intérieur de la bactérie
- EXOENZYMES dégradent les molécules trop grosses (disacc, trisacc et polysacc) pour être transportées dans la bactérie telles qu’elles.
- enzymes internes de la bactérie qui assurent la dégradation des glucides
- le glucose est ensuite métabolisé par la glycolyse, puis le cycle de Krebs ou le processus de fermentation
Production de gaz
Méthode la plus sensible
Tube de Durham
Production de gaz par la dégradation du glucose avec tube Durham
Principe
-gaz produit reste emprisonnée dans la partie supérieure du tube inversée
Tests de dégradation de plusieurs glucides simultanément
Différence entre Kligler / TSI
Kligler : dégradation du glucose, lactose, production H2S et de gaz
TSI : dégradation du glucose, lactose et sucrose, production H2S et de gaz
TSI / Kligler (sans sucrose)
Milieu
Composition :
Lactose 1%
Sucrose 1%
Glucose 0.1%
Peptones
Indicateur de pH : rouge de phénol
Thiosulfate de Na
TSI / Kligler
Dégradation du glucose, du lactose et du sucrose
Interprétation des résultats
Rouge orangé : alcalin
Jaune : acide
a/n culot : glucose
a/n pente : lactose
TSI / Kligler
Production d’H2S
Principe et interprétation des résultats
Le soufre (S) est utilisé comme accepteur terminal d’H pour former du H2S.
Pour détecter la production d’H2S, le milieu doit contenir un substrat tels des a.a (cystine, cystéine, méthionine) ou sel organique (thiosulfate de Na). La substance qui met en évidence le H2S (fer dans citrate ferrique)
Les b ont besoin que le milieu soit acide pour produire H2S, donc si complètement noirci = milieu acidifié aussi
TSI / Kligler
Production de gaz
Interprétation des résultats
présence d’une simple bulle
production de fissure dans le milieu
déplacement d’une partie du milieu du fond vers le haut
MR-VP
But
Vérifier jusqu’à quel point la fermentation se rend : produits acides ou neutres
MR-VP
Principe
Les b capables de fermenter le glucose le dégrade d’abord en acide pyruvique. L’acide pyruvique en acides organiques (A lactique, acétique…), donc en produits acides.
Si b possède l’enzyme pour dégrader les acides organiques, l’acide acétique est converti en acétoine, donc en produits neutres.
VP
Lecture du test
VP (après 24 h) : vérifier présence d’acétoine
Réactifs : a-naphtol et KOH
Jaune : négatif
Rouge : positif
MR
Lecture test
MR (après 48 h) : Vérifier si la b est incapable de dégrader les acides organiques
Réactif : rouge de méthyle
Jaune (initiale) : négatif
Rouge : positif
Test ONPG
But
Vérifier présence de l’activité enzymatique d la B-galactosidase
Test ONPG
Principe
slm pour L-
2 enzymes requises
B-galactosidase perméase : permet l’entrée du lactose dans la cellule bactérienne
B-galactosidase : dégrade le lactose dans la cellule
L+ : 2 enzymes, dégrad rapide
L- : pas d’enzymes, donc pas dégrad
L- : pas de perméase, ce qui limite l’entrée du lactose et lente stimulaT de la B-galactosidase = LACTOSE LENT
Étapes
1. suspension b dans saline
2. lyse cellulaire avec xylène ou toluène
3. substrat chromogénique sur lequel b agit : ortho-nitrophényl-B-galactopyranoside (ONPG)
ONPG
Interprétation des résultat
Incolore : négatif
Teinte jaune : positif
Chaines respiratoires et voies alternatives
Oxydase (CR)
Catalase (VA)
Réduction des nitrates (VA)
BUTS
Oxydase : vérifier l’activité de la cytochrome c oxydase de la bactérie
Catalase : vérifier capacité de catalase (permet de débarrasser la cellule du H2O2 (toxique)
Réduction des nitrates : vérifier capacité de réducT nitrates afin d’utiliser l’oxygène qui est libéré, comme accepteur final d’électron et d’hydrogène (nitrates-nitrites-azote)
