Metodos Flashcards by carla meirelles pereira nicoliello

ESPECTROFOTOMETRIA

Mede a luz que passa de acordo com a [] amostra
Calibração Fator de calibração = [] / absorvância
Leitura valor da amostra x FC

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ESPECTROFOTOMETRIA tipos

Colorimétrico - Intensidade de cor da reagente+amostra comparada com o branco

Cinético - o analito é uma enzima. Sua conversão e o produto é gerado, gera mudança de cor, medido

Cinético Enzimático (maior especificidade, elimina interferência) - O analito sofrerá ação da enzima 1 e depois da 2, gera um produto que muda a cor

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FOTOMETRIA DE REFLECTÂNCIA

Luz refletida por uma substância colorida

Reagente em multicamada > quando passa ocorre reações que incide luz > luz vira voltagem

Química seca - IDEAL

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ESPECTROMETRIA DE EMISSÃO ATÔMICA

Radiação emitida por átomo excitados

Intensidade da cor é proporcional a []

Usado para Li, Na e K

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ESPECTROMETRIA DE ABSORÇÃO ATÔMICA

Temperatura muito alta
Radiação UV liberada com salto quântico > emite luz ao voltar
Mede comprimento de onda

• Mede a Absorção da radiação por átomos livres no estado gasoso
• Al, Ca, Pb, Mg, Mn e outros metais

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TÉCNICAS ELETROQUÍMICAS

• Íon seletivo
• potenciometria,
• Voltametria
• Amperometria
• Conductometria
• Coulometria
• biosensores

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POTENCIOMETRIA E ÍON-SELETIVO

Converte ativ de íon em potencial

Medir pH, pCO2 e eletrólitos

Eletrodo de referencia e o indicador

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VOLTAMETRIA E AMPEROMETRIA

Medem a diferença de potencial elétrico , usando uma célula eletroquímica que determina voltagem é aplicada.

Medida de Po2, íons

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TÉCNICAS FÍSICAS/MECÂNICAS

• Eletroforese
• Cromatografia
• Espectrometria de massas

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ELETROFORESE

Migração dentro de um líquido sob a influência de um campo elétrico.

Se movem em direção ao cátodo ou anodo.

As partículas são coradas com corante proteína específico

Zonas são quantificadas por densitometria

Zonal – migração em um suporte poroso de gel de agarose produzem zonas de proteínas, que são heterogêneas e fisicamente separadas uma das outras

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ELETROFORESE CAPILAR

Amostra muito pequena (1 a 50nl)
Mais rápido
Mais caro
Escolha do tampão é critica
Tubo de sílica

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CROMATOGRAFIA

Mais cara
Bomba leva a uma coluna que separa análitos e computador transforma em valores
Separa moléculas grande (meio liquido) de pequena (meio gasoso)

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ESPECTROMETRIA DE MASSAS

Mede a razão massa-carga
Emergente na proteômica

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TESTES SOROLÓGICOS

Objetivo: pesquisa de antígenos ou anticorpos
em sangue (soro), saliva, líquidos corpóreos

• Afinidade: Força de interação entre um único sítio de ligação Ag-Ac
• Avidez: Força de interações total univalente ou multivalente

A Pesquisa sorológica Reagente nem sempre significa doença&raquo_space; reações cruzadas: falso-positivos

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MÉTODOS DE DETECÇÃO DAS LIGAÇÕES ANTÍGENO-ANTICORPO

• Aglutinação
• Precipitação
• Imunoensaios marcados + sensíveis
- Imunofluorescência
- Imunoensaios enzimáticos: ELISA, MEIA, ELFA
- Quimiluminescência
- Western blot
- Testes rápidos

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AGLUTINAÇÃO

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•Direta: O Antígeno é adsorvido a superfície da partícula
•Indireta: pesquisa o Ac circulante

•Qualitativas ou semi-quantitativas (Previne pré e pós zona)
•Imunocomplexos vistos a olho nu
•Não diferencia Imunoglobulinas

Precipitação

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Formação de imunocomplexos
• insolúveis

Precipitado insolúvel
• turbidimetria • nefelometria

Turbidimetria

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mede a diminuição da intensidade da luz transmitida quando passa pela reação. O sensor de medida encontra-se na mesma linha 180 graus

excesso de antígeno e os efeitos da matriz são limitações

Nefelometria

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mede a luz dispersa. Sensores entre 30 a 90 graus em relação a reação. Mais sensível, fonte de luz mais intensa (laser monocromático).

excesso de antígeno e os efeitos da matriz são limitações

IMUNODIFUSÃO RADIAL

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IMUNOENSAIOS MARCADOS

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Ac monoclonal (marcado) e permite quantificar a reação

FASE SÓLIDA: PORÇÃO FIXA DOS MÉTODOS, QUE PODE SER: VIDRO, CELULOSE, PLÁSTICO, ETC ONDE OS AG OU AC SÃO FIXADOS

MÉTODOS: ELISA, MEIA, ELFA, QUIMIOLUMINESCÊNCIA

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• - Detecta IgG ou IgM; hormônios, vitaminas, marcadores tumorais
• - Qualitativa ou quantitativa
• - Sensibilidade com melhora progressiva
• - Automatizado

QUIMIOLUMINESCÊNCIA

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Os elétrons de um átomo emitem luz após receberem energia e saltar

Utilizam-se de anticorpos ligados a um marcador luminescente (cromógeno)
• Ex.: São ensaios ultrassensíveis

ELETROQUIMIOLUMINESCÊNCIA

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• Aplicação de voltagem na presença de um luminóforo em presença da TPA que induz a emissão de quimioluminescencia , medida por um fotomultiplicador.
• Reagente mais estável e preparação mais simples

Imunofluorescência direta (IFD):

localização de antígenos em células ou tecidos.Anticorpo específico, marcado com fluorocromo Aplicações: - Detecção direta de microrganismos (secreções, urina, cortes de tecidos); - Identificação de subpopulações de linfócitos; - Fenotipagem de células tumorais

IMUNOFLUORESCÊNCIA INDIRETA (IFI)

LOCALIZAÇÃO DE ANTICORPOS EM SORO. ANTI IMUNOGLOBULINA HUMANA MARCADO COM FLUOROCROMO Não automatizada Exige pessoal treinado para leitura da reação. Necessita microscópio apropriado, de fluorescência Título: expresso como o inverso da última diluição de soro que apresentou reação positiva

DOT-ELISA

• Qualitativo • Detecção de IgG ou IgM • Não exige aparelhagem • Usa como fase sólida nitrocelulose • Onde a leitura é feita visualmente

Western blot

•Detecta anticorpos •É muito específico •Variações da técnica são: imunoblot (RIBA- recombinant immunoblot assay) •membrana de nitrocelulose (“blotting”) •Permite identificar as frações do antígeno que é reconhecida pelo anticorpo do paciente revelado com anti-Ig humana marcada com enzima Não reagente: ausência de bandas; Reagente: presença de no mínimo duas bandas gp160/120, gp41 e p24; Amostra indeterminada: qualquer outro padrão

Citometria de fluxo

- Detecta, separa e quantifica células contendo um antígeno particular, marcadas com um fluorocromo específico - As células são então analisadas no citômetro de fluxo

TESTE ÁCIDO NUCLEICO – NAT

BIOSSENSORES

Sensorquímico específico que tem elemento de reconhecimento biológico, que detecta presença, atividade ou concentração de um determinado analito (covid teste rápido, glicosimetro, bafômetro, oximetria, ) • PROBLEMA: O controle externo de qualidade não bem sistematizado. Ex.: pesquise a concordância de saturímetro de pulso com gasometria arterial mede pH, gases sanguíneos e eletrólitos pela passagem da luz

Metodos Flashcards

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