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Examen Biocel > Métodos de estudio de la célula > Flashcards

Métodos de estudio de la célula Flashcards

(76 cards)

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1
Q

Microscopia de luz: ¿Que es el poder de resolución?

A

La capacidad de distinguir separadamente 2 puntos muy cercanos entre si

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Q

Microscopia de luz: ¿Que es el limite de resolución y por que esta determinado?

A

La distancia mínima entre 2 puntos para distinguirlos separadamente. L determina la longitud de onda de luz visible

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3
Q

Microscopia de luz: ¿Cuales son los colores con los cual tiene la H&E?

A

Hematoxilina: Morado-azul (estructuras basofilas) y Eosina: rojo-rojizo (estructuras acidificas)

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4
Q

¿Para que sirve la inmunohitoquimica e inmunofluorescencia?

A

Para ver las diferencias moleculares entre 2 células, que morfológicamente no se puedan diferenciar

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5
Q

¿En que es mas usado la inmunohistoquimica?

A

Usado mas en secciones de tejido

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6
Q

¿En que es mas usado la inmunofluorescencia?

A

Usado mas en células que son cultivadas

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7
Q

¿Cuales son los tipos de microscopio electrónica?

A

MET y MEB

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8
Q

¿Como es el funcionamiento de la MET?

A

La muestra se bombardea con electrones. Los electrones aumentan el poder de resolución.

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9
Q

MET: ¿Como se describen las estructuras en base a como dispersen los electrones?

A

Electrondensa y electronlucida

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10
Q

MET: ¿Que significa que una estructura sea electrondensa?

A

Estructura densa, se ve oscura

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11
Q

MET: ¿Que significa que una estructura sea electronlucida?

A

Estructura poco densa, se ve mas brillante

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12
Q

¿Como es el funcionamiento de la MEB?

A

Registra electrones que salen de la superficie de la muestra. Salen debido a que son bombardeados con los electrones primarios

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13
Q

¿Que tipo de imagen genera el MEB?

A

Una imagen 3D

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14
Q

¿Como se calcula el aumento total?

A

Aumento ocular x aumento objetivo

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15
Q

¿Cual es el limite de resolución del ojo humano?

A

200 um

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16
Q

¿Cual tinción es la mas utilizada para el ver el núcleo y el citoplasma?

A

H&E

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17
Q

¿A que tipo de componentes tiene afinidad la hematoxilina?

A

A componentes ácidos como los grupos fosfato del ADN

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18
Q

¿A que tipo de componentes tiene afinidad la eosina?

A

A componentes básicos como los grupos amino que se encuentran en las proteínas

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19
Q

¿Que tipo de colorante es la eosina?

A

Acido

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20
Q

¿Que se utiliza en la inmunohistoquimica?

A

Utiliza anticuerpos que reconocen un tipo especifico de antígeno (proteína)

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21
Q

Inmunohistoquimica: ¿Cuántos anticuerpos participan?

A

Dos; Anticuerpo primario y secundario

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22
Q

Inmunohistoquimica: ¿A que esta asociado el anticuerpo secundario?

A

A una enzima, y cuando llega el sustrato esta lo transforma en un producto que presenta coloración

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23
Q

¿Que se utiliza en la inmunofluorescencia?

A

Se utiliza un anticuerpo que se une a la proteína de interés. Se usa para obersvar la localización de mas de una molécula de interés simultáneamente

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24
Q

Inmunofluorescencia: ¿Que presenta el anticuerpo?

A

Presenta fluoroforos, que al estimularlos con la longitud de onda correspondiente, emiten fluorescencia que se puede evidenciar en microscopia

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25
¿En que cambia el microscopio de fluorescencia?
Es un microscopio óptico con una fuente de luz distinta. Utiliza una lampara de mercurio y tiene varios filtros que permiten seleccionar la longitud de onda necesaria para excitar al fluoroforo correspondiente.
26
¿Para que sirve la proteína fluorescente verde?
Permite observar procesos vivos ya que la misma célula expresa la proteína verde. Tenemos modificaciones genéticas que permite codificar esta proteína verde ya que la proteína de interés queda conjugada con la GFP y al iluminarse se puede volver verde.
27
¿Cuantas veces permite aumentar la resolución del ojo humano la MET?
1.000.000
28
Sobreexpresion de genes: ¿En que consta la transduccion retroviral?
Se usan partículas virales que tienen la secuencia de ADN que se requiere sobreexpresar en la célula. Estas partículas infectan la célula y el material genético se integra al genoma, comenzando la sobreexpresion de la secuencia de ADN que se requería.
29
Sobreexpresion de genes: ¿En que consta la transduccion adenoviral?
Parecido a la transduccion retroviral pero en vez se usa un adenovirus y este no se integra al genoma (no se hereda). Luego de una serie de realizaciones se termina la sobreexpresion.
30
Sobreexpresion de genes: ¿En que consta la transfeccion?
Un vector ingresa a la célula, pero para eso necesita una electroporacion para generar polos en la célula.
31
Silenciamiento de genes: ¿Cuales son los pasos de un Knockdown?
1. Se incorpora shRNA a la célula 2. shRNA es procesado por la célula formando siRNA 3. siRNa tiene complementariedad de bases con alguna región particular del ARNm que codifica para la proteína a silenciar 4. siRna se une con la secuencia de ARNm de a proteína que quiere ser silecniada 5. Lo ultimo es reconocido por RISC que lo manda a degradación
32
Silenciamiento de genes: ¿A que nivel actúa Knockout?
Actua a nivel del gen generando una mutación en el
33
Silenciamiento de genes: ¿Como es un Knockout?
Cuando se transcribe el mensajero va a tener un codon de termino anticipado (por la mutación generada en el gen) que va a generar una proteína no funcional
34
Edición génica CRISP/CAS 9: ¿Que permite esta técnica?
Permite silenciar genes en la secuencia de ADN del genoma
35
Edición génica CRISP/CAS 9: ¿En que consiste esta técnica?
En "tijeras moleculares" que funcionan silenciando o permitiendo incorporar una secuencia en la zona de corte.
36
Edición génica CRISP/CAS 9: ¿Para que se usa esta técnica?
Para reparar mutaciones o reemplazo un gen alterado por otro normal
37
PCR: ¿Cuales son los elementos utilizados en la mezcla? Son 5
-Taq poolimeraza (ADN polimeraza) -DNA o cDNA: fragmento de ADN con el segmento que se requiere amplificar -Buffer: mantiene el pH para que la enzima funcione óptimamente -Desoxinucleotidos: sustrato para la rx -Partidores
38
PCR: ¿Que permiten los partidores?
Permiten amplificar solo el fragmento de interés ya que presenta secuencias que se complementan con la secuencia que se desea amplificar
39
PCR: ¿Que ocurre durante la desnaturacion de las hebras de ADN?
Se rompen los puentes de hidrogeno que mantienen a las bases nitrogenadas unidas
40
PCR: ¿Como es la amplificación?
Es exponencial ya que el resultado son muchas copias del fragmento de interés
41
RT-PCR o Transcripción reversa + PCR: ¿Cual es la diferencia entre el ADN y el cADN?
Que el ADN posee intrones y el cDNA no pues proviene de un ARN maduro que ya tiene sus intrones cortados
42
RT-PCR o Transcripción reversa + PCR: ¿Que enzima participa?
La transcriptasa reversa
43
PCR en tiempo real: ¿Que permite?
Permite amplificar y cuantificar una secuencia nucleotifica especifica al igual que el PCR pero usando fluoroforos que se unen a la doble hebra o sondas con una secuencia especifica
44
PCR en tiempo real: ¿Que son las sondas con una secuencia especifica?
Son sondas que tienen una secuencia complementaria a la que se quiere amplificar
45
PCR en tiempo real: ¿Como es este PCR?
Es cuantitativo ya que existe un equipo capaz de detectar fluorescencia (cada vez que aumenta el numero de ciclos, aumenta el numero de fluorescencia)
46
Hibridacion in situ: ¿Que permite detectar esta técnica?
Secuencias de AND o ARN especificas utilizando sondas con nucleotidos marcados que tienen complementarias de base con la secuencia de interés y posteriormente utilizando anticuerpos para poder ver las células que expresan el ADN
47
Hibridacion in situ fluorescente: ¿Que utiliza esta técnica?
Sondas fluorescentes
48
¿Que permiten los microarreglos?
Conocer la expresión génica de muchos genes. Evidencia que célula se expresa mas u otro gen para así identificar los genes reprimidos y sobreexpresados en condicin experimental
49
¿Que permite la secuenciacion?
Conocer la secuencia nucleotidica exacta de un fragmento de interés cualquiera
50
¿Que se hace en la secuenciacion?
Se usan 4 PCR distintos (cada uno con un marcador), se obtienen fragmentos de tamaño diferente, se ordenan los fragmentos por tamaño y se hace la reconstrucción
51
¿Como se hace la detección y cuantificación de proteínas?
Se rompen las membranas celulares para poder liberar las proteínas contenidas en las células
52
Electroforessis en condiciones desnaturantes y reductoras: ¿Que permite el SDS?
Agregar cargas negativas a las proteínas permitiendo la migración de estas
53
Electroforessis en condiciones desnaturantes y reductoras: ¿Que es el B-mercaptoetanol?
Es un reductor de puentes disulfuro que permite que se genere una secuencia lineal
54
¿Cuales son los factores que afectan la migración en la electroforesis?
La cantidad de aminoácidos
55
¿En que dirección es la migración en la electroforesis?
Desde el polo negativo al positivo (esta cargadas negativamente)
56
¿Que proteínas migran mas en la electroforesis?
Las de menor tamaño
57
¿Para que sirve la electroforesis?
Para separar mezclas de proteínas o ácidos nucleicos
58
Electroforesis: ¿Que se hace para que la separación de las proteínas dependa solo de su tamaño?
Se usan agentes desnaturantes para obtener proteínas no plegadas
59
¿Para que sirve el Western blot?
Para detectar proteínas especificas, usando anticuerpos, una vez separadas por electroforesis
60
Western blot: ¿Cuales son las 3 formas de visualización?
Anticuerpo secundario Quimioluminiscencia Fluorescencia
61
Western blot: ¿En que consiste la vida de señalizaron con un anticuerpo secundario?
Es un anticuerpo secundario conjugado con una enzima que genera un producto coloreado
62
Western blot: ¿En que consiste la vida de señalizaron con un quimioluminiscencia?
La peroxidasa oxida el luminol y genera luz, esta se pone contra un film de rayos x y se observan bandas oscuras en lugares donde se emitío la luz
63
Western blot: ¿En que consiste la vida de señalizaron con un fluorescencia?
Anticuerpo conjugado con un fluoroforo
64
¿Para que sirve el southern blot?
Para detectar ADN especifico
65
¿Como funciona el southern blot?
NO utiliza anticuerpos (a diferencia del western blot). Se marca una hebra de ácidos nucleicos (sonda) complementaria a la hebra que se requiere identificar
66
¿Para que sirve el northern blot?
Para detectar ARN
67
¿Como funciona el northern blot?
Se transfiere a una membrana el ARN separado ya por electroforesis y se incuba con una sonda marcada (hebra complementaria a la que se quiere identificar)
68
¿Como se marcan las sondas en el PCR?
Con enzimas o fluoroforos
69
¿Que permite ELISA?
Cuantificar proteínas de manera exacta
70
¿Que es la sidementacion diferencial?
Centrifugar a diferentes velocidades Lento= precipitan organelos pesados Altas velocidades= precipitan mas livianos
71
¿Que es la centrifugación en gradiente de densidad?
Introducir organelos en gradiente de sacarosa que contienen diferentes densidades dependiendo de la altura del tubo. Al centrifugarlo los elementos precipitaran a la altura del tubo correspondiente a su densidad
72
¿Cual es el limite de resolución del microscopio óptico?
0,2 um
73
¿Cual es el limite de resolución del MET?
0,1 nm
74
¿Cual es el limite de resolución del MEB?
3 nm
75
Electroforesis: ¿Para que muestras se usan las cámaras verticales?
Para separar proteínas (y se usa poliacrilamida)
76
Electroforesis: ¿Para que muestras se usan las cámaras horizontales?
Para separar ADN (y se usa agarosa)

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