MICROBIOLAB FINAL ENCULE MOI Flashcards
(16 cards)
Réalisation, lecture et interprétation du test de KOH
Principes clés lors d’un échantillonnage terrain en vue d’une analyse microbiologique (identification des échantillons, conservation)
TBE - GPG - VEND - 9h00 - 13/09/25 - E.coli - milieu SAB - 25C
Principe, lecture et interprétation de la coloration de Gram.
Résultats attendus : Coloration bleue ou mauve = Gram +
Coloration rouge ou rose = Gram -
Le but de la coloration de Gram est de déterminer si les bactéries ont la caractéristique d’être à Gram positif ou à Gram négatif, donc de déterminer leur type de paroi. Cela peut avoir une influence sur le choix d’un antibiotique, par exemple. La culture doit avoir idéalement 24h. Plus le temps avance, plus les bactéries perdent leur capacité à retenir le colorant : les bactéries Gram+ se décolorent et les bactéries Gram- ne sont plus colorées du tout.
Mise au point complète du microscope à 1000 X (incluant le principe de Koehler).
Procédure de mise au point idéale du microscope
1. Prendre le microscope et le déposer DÉLICATEMENT sur la table de travail. La POTENCE devrait être éloignée de vous. Dérouler le fil et le brancher. 2. Avec le nettoyant à vitre et un papier à lentille, nettoyer les oculaires et les objectifs. Toujours terminer par l’objectif 100X, car il peut y avoir de l’huile dessus et il ne faut pas tacher les autres objectifs. Après le nettoyage effectué, assécher les lentilles avec un papier à lentille sec pour éviter que le nettoyant ne laisse des marques. 3. Tourner la TÊTE DU MICROSCOPE au-dessus de la PLATINE en dévissant légèrement la vis moletée à la base de la tête. Ne pas oublier de revisser la vis. 4. Peser sur l’INTERRUPTEUR en position “ON”. 5. Tourner le RHÉOSTAT, jusqu’à la position “midi”. 6. Monter le CONDENSATEUR situé sous la platine, au maximum de sa course à l’aide de la vis moletée métallique, située à votre gauche. 7. À l’aide de la TOURELLE (revolver), enclencher l’OBJECTIF 4X vis-à-vis de l’ouverture de la platine où passe la lumière (Grossissement total de 40 X). S’assurer que l’objectif est bien enclenché.
8. Placer la lame propre à observer, sur la platine, entre les VALETS, et centrer le frottis.
9. SANS regarder dans les OCULAIRES, mais plutôt en regardant la PLATINE : monter la PLATINE au maximum de sa course (en haut sans forcer) en tournant la VIS MACROMÉTRIQUE vers l’arrière.
10. Placer ses yeux dans les oculaires et ajuster la distance entre les oculaires pour ne voir qu’un cercle de lumière. Faire la mise au point de l’objet sur la lame en abaissant doucement la platine avec la VIS MACROMÉTRIQUE et affiner votre mise au point avec la VIS MICROMÉTRIQUE.
Techniques de base en microbiologie
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Si vous portez des lunettes et que vous préférez ne pas les mettre lors de vos observations au microscope,
vous devez faire les étapes suivantes :
11. ** Les étapes 11.a) et 11.b) permettent de corriger la différence d’acuité visuelle qui peut exister entre
votre oeil droit et votre oeil gauche. **
a. Fermer l’oeil droit. Faire la mise au point avec la VIS MICROMÉTRIQUE pour que l’objet observé
soit parfaitement net dans votre oeil gauche.
b. Fermer l’oeil gauche. Faire la mise au point avec la BAGUE DE L’OCULAIRE DROIT pour que l’objet
soit parfaitement net dans votre oeil droit.
12. Si vous portez des lunettes et que vous préférez les conserver pour faire vos observations, retirer ou
replier les tubes de caoutchouc présents sur les OCULAIRES pour vous permettre de poser vos lunettes
plus près des lentilles des oculaires et ainsi mieux voir dans votre microscope.
13. Centrer l’objet qui vous intéresse au centre de votre champ visuel, en vous servant des VIS COAXIALES et
en vous guidant avec la croix visible dans l’oculaire.
14. En utilisant la TOURELLE, enclencher ensuite l’OBJECTIF 10X. (Grossissement total de 100X). S’assurer que
l’objectif est bien enclenché.
15. Ajuster votre microscope avec la VIS MICROMÉTRIQUE pour que l’objet observé soit parfaitement mis au
point dans vos yeux.
Mise au point du système d’éclairage (principe Köhler)
La prochaine étape servira à centrer parfaitement le faisceau lumineux et ainsi obtenir un éclairage optimal, peu
importe vos observations, sauf à 4X.
IMPORTANT! CE PRINCIPE SE FAIT À 2 CONDITIONS :
a. Il doit y avoir une lame à observer sur votre platine et celle-ci doit être mise au point.
b. Il se fait à l’objectif 10X seulement.
16. Fermer le DIAPHRAGME D’OUVERTURE en le déplaçant complètement à droite.
17. En regardant dans les oculaires, tourner la bague du DIAPHRAGME DE CHAMP dans le sens horaire jusqu’à
l’obtention d’un petit cercle éclairé.
18. Centrer ce cercle lumineux bien au centre du champ visuel en poussant cette même bague dans l’espace.
Mauvais
position
Bon
position
Techniques de base en microbiologie
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19.
Ajuster la hauteur du CONDENSATEUR pour obtenir un cercle lumineux aux contours les plus nets possibles.
20.
Ouvrir ensuite le DIAPHRAGME DE CHAMP de façon à ce que votre cercle lumineux se juxtapose à votre champ visuel et un petit peu plus.
21.
Ajuster ensuite le DIAPHRAGME D’OUVERTURE environ à la quatrième ligne à partir de la droite. Ceci est une règle générale, mais on doit constamment réajuster ce levier afin d’obtenir les meilleurs contrastes en tenant compte du type des spécimens à observer et de l’opacité de la lame.
22.
Centrer l’objet que vous voulez observer au centre de votre champ visuel.
23.
En utilisant la TOURELLE, enclencher l’objectif suivant (OBJECTIF 40X). (Grossissement total de 400X). S’assurer que l’objectif est bien enclenché.
À partir de maintenant, utiliser UNIQUEMENT la VIS MICROMÉTRIQUE
24. Effectuer votre mise au point avec la VIS MICROMÉTRIQUE et centrer de nouveau l’objet au centre de votre champ visuel.
À partir d’ici, si l’objet sur la lame n’est pas visible, il faut retourner à un plus petit objectif et recommencer la mise au point. Sinon, il est impossible de passer à l’OBJECTIF 100X.
25. Pour effectuer une observation avec l’objectif 100X, il faut utiliser de l’huile à immersion et IL NE FAUT JAMAIS REDESCENDRE LA PLATINE pour compléter la mise au point.
26.
Placer les objectifs 40X et 100 X à mi-chemin de leur course, c’est-à-dire de chaque côté de l’ouverture de la platine.
27. Déposer une goutte d’huile à immersion sur la lame sans l’étendre.
28.
En utilisant la TOURELLE, tourner doucement l’OBJECTIF 100X jusqu’à son cran d’arrêt. (Grossissement total de 1000X). Il touchera à l’huile et c’est ce qui est souhaité.
Si, en regardant dans les oculaires, aucune image n’est visible présentement… C’EST NORMAL. Il faut faire une mise au point et l’image réapparaitra.
29.
Faire la mise au point, en tournant la VIS MICROMÉTRIQUE délicatement d’un sens. Si après un demi-tour l’image n’est pas revenue, essayer dans l’autre sens, jusqu’à ce que l’image réapparaisse.
30.
Avant d’enlever la lame, enclencher l’OBJECTIF 4X avec la TOURELLE. Cela permettra de protéger l’OBJECTIF 100X.
Distinguer et utiliser adéquatement les termes décrivant la morphologie et l’arrangement des bactéries (section 3.2.1).
Reconnaitre, sur photo, les structures des procaryotes qui sont observables en microscopie (flagelles, endospores, capsule)
Légende : monotriche (a), amphitriche (b), lophotriche (c) et péritriche (d).
Légende: (1, 4) endospore centrale; (2, 3, 5) endospore terminale ; (6) endospore latérale; (2) cristal; (3, 4, 5, 6) endospore déformante; (1, 2) endospore non déformante.
Reconnaitre, selon l’apparence macroscopique (culture
Groupe Aspect de la culture
Bactéries Colonies petites, lisses, brillantes ou mates ; couleurs variables ; odeur typique parfois.
Levures Colonies épaisses, opaques, crémeuses, ressemblant à des colonies bactériennes mais souvent plus bombées.
Moisissures Colonies duveteuses ou poudreuses ; souvent colorées (vert, noir, blanc, gris, etc.) ; croissance plus lente.
ou microscopique (lame), à quel groupe de microorganisme appartient un spécimen
Groupe Aspect microscopique
Bactéries Très petites (1-5 µm), formes variées (coques, bacilles, spirilles), parfois visibles avec coloration de Gram.
Levures Plus grandes que les bactéries (~5-10 µm), cellules ovales ou rondes, souvent bourgeonnantes (reproduction). possible de voir des organites
Moisissures Présence de filaments (hyphes), parfois cloisonnés, avec spores visibles selon l’espèce (conidies, sporangiospores).
Œufs de parasites Structures ovoïdes, tailles plus grandes (50–150 µm), paroi épaisse, parfois avec des détails internes (embryon, opercule).
Distinguer les termes Eucaryote, Procaryote et Acaryote
Eucaryote, cellule qui possede un noyau et organites correspond au protiste, eumycetes vegetaux et animaux
Procaryote caractérisepar des cellules qui ne possede pas de noyau défini ni d’organites correspond au bactéries et achées
Acaryote structure plus simple qu’une cellule virus et prions
Distinguer les grands groupes de microorganismes (Prion, Virus, Bactérie/Archée, Levure, Moisissure, Protiste, Arthropode, Ver/Helminthe)
selon leurs caractéristiques principales
notamment le type et
le nombre de cellules qui les composent.
Prion - simples proteines extremement petit proteine mal formé
Virus - particules infectieuse enfermé dans une coque de prtoéines capside
Bactérie/arché - unicellulaire spherique bacilles
levure et moissisure - (levure oval noyau unicellulaire) (hyphe pluricellulaire)
Protiste - (unicellulaire et pluricelllulaire en colonie) eucaryote pas animaux vegetaux ou eumycetes
Arthrpode/ ver (plathelminthes) - pluricellulaire noyau
Nommer et reconnaitre les structures présentes chez les cellules procaryotes (section 3.2.2).
Classer les différents groupes de microorganismes selon leur grosseur respective. (Notes de cours section 1.2)
regarder le woflash
Classer les structures présentes chez les cellules procaryotes selon qu’elles sont essentielles ou facultatives (section 3.2.2).
essentielles
cytoplasme
ribosome
nucléoide
membrane plasmique
facultative
plasmide
capsule
flagelle
fimbirae
pilus
endospore
Distinguer la composition de la paroi des bactéries à Gram + et à Gram – (section 3.2.2).
Décrire le fonctionnement de la coloration de Gram, le rôle de chaque réactif et en quoi cette coloration permet de colorer de manière différentielle les bactéries à Gram + et à Gram – (section 3.2.2).
La coloration de Gram permet de différencier les bactéries selon la structure de leur paroi en quatre étapes :
Colorant primaire (cristal-violet) : colore toutes les bactéries en violet.
Mordant (iode) : fixe le colorant violet dans les cellules.
Décolorant (alcool ou alcool-acétone) : traverse la mince paroi des Gram négatif, éliminant le violet, alors que les Gram positif retiennent le colorant grâce à leur épaisse couche de peptidoglycane.
Contre-colorant (safranine) : colore en rouge les Gram négatif décolorées, sans affecter la couleur violette des Gram positif.
Ainsi, les Gram positif apparaissent violettes, et les Gram négatif, roses.
La méthode fonctionne mieux sur des cultures fraîches, car une paroi abîmée peut fausser les résultats.
- Distinguer et utiliser adéquatement les termes : hyphe, spore, sporange et conidie (section 3.3).
Voici la distinction claire et concise des termes hyphe, spore, sporange et conidie, basée sur la section 3.3 :
Hyphe : Filament allongé constituant la structure de base des champignons filamenteux. Un ensemble d’hyphes forme le mycélium.
Spore : Cellule reproductive (sexuée ou asexuée) permettant la dissémination et la survie dans des conditions difficiles. Elle peut être produite de différentes façons.
Sporange : Structure fermée dans laquelle sont produites des spores. Quand il éclate, il libère les spores.
Conidie : Type de spore asexuée formée sans sporange, généralement à l’extrémité des hyphes spécialisées appelées conidiophores.
