Módulo 1 - Técnicas esterilización y desinfección Flashcards
Esterilización
Se realiza para el instrumental de laboratorio, etc
Desinfección
Se realiza exclusivamente para los explantes
Esterilización medio cultivos y cristalería
Calor seco (T=160-180ºC, t=1.5 hrs), calor húmedo (T=101-121ºC, t=15 mins, P=15lb/in2), filtración (compuestos termolábiles, es decir, membranas de acetato de celulosa y nitrato de celulosa con poro de 0.2 micras)
Manipulación en condiciones asépticas
Áreas de transferencia con aire estéril, lámparas de luz UV, campanas de flujo laminar y aseo personal
Establecimiento in vitro
1) Selección de la planta madre (características, libre enfermedades, vigorosa)
2) Selección explante (tallos, raíces, hojas, semillas, meristemos)
3) Desinfección
4) Establecimiento en el medio de cultivo
Agentes desinfectantes
Hipoclorito de sodio y calcio, alcoholes, iones de metales pesados, fungicidas, antibióticos, peróxido de hidrógeno, permanganato de potasio y choque térmico
Variantes del desinfectante y tiempos de desinfección
Especies, condiciones de la planta madre, tipo de tejido y edad de la planta madre
Desinfección explantes
1) Planta madre
2) Explante
3) Etanol 70% (t=2min)
4) Hipoclorito de sodio 3% (t=10mins)
5) Enjuagues con agua estéril (5mins c/u)
6) Siembra en medio de cultivo
7) Plántula
Limitantes establecimiento in vitro (contaminación)
Hongos, bacterias, virus, mycoplasmas, microartrópodos y trips
Contaminación (hongos)
Causas (esterilización superficial inadecuada, manipulación, intro de esporas por Trips), a simple vista se detectan, géneros frecuentes (Aspergillus, Candida, Cladosporium, Microsporium, Phialphora)
Contaminación (bacteria)
Ppal agente contaminante, síntomas sobre el explante o en medio de cultivo, pueden aparecer luego de varios subcultivos, síntomas no visibles, plantas no sobreviven aclimatación, bacterias no patogénicas = benéficas, géneros frecuentes (Agrobacterium, Bacillus, Enterobacter, Pseudomonas, Lactobacillus, Staphylococcus)º
Solución problemas por contaminación
Hongos (fungicidas, choque térmico), Bacterias (antibióticos tales como Cefotaxima y Rifampicina), Virus (cultivo de meristemos, termoterapia, quimioterapia, crioterapia, electroterapia)
Cultivo de meristemos
Técnica + importante en micropropagación para eliminar virus, debido que los brotes replican más rápido de los virus, hay un ‘silenciamiento génico’
Termoterapia (desnaturalización ARN)
Plantas o partes a tratamientos térmicos que disminuyan la velocidad de replicación de los virus sin matar la planta ya que interrumpen la síntesis de ARN de cadena doble y sencilla, depende la T del tipo de virus
Quimioterapia
Agentes virostáticos (compuestos que inhiben crecimiento y desarrollo vírico) como Ribavirina (virazol), Acicloguanosina, Azidotimidina, y 2-Tiouracilo, todos de 10-40 mg/L. A veces la eliminación es sólo temporal.
