Observation microscopique

Question 1

Quel est le principe de la microscopie à transmission?

Answer 1

Un flux de particules (photons ou électrons) traverse l’objet biologique, il se crée alors une image agrandie lors de la traversée des lentilles (transparentes ou magnétiques du microscope), avant de venir sur la retine donnant ainsi une image agrandie de l’interieur de l’objet.

Question 2

Quand parle-t-on de microscopie à transmission?

Answer 2

Lorsque l’objet étudié est traversée par la lumière

Question 3

De quoi sont composés les microscopes photoniques?

Answer 3

-(oeil)
-faisceau lumineux
-objet
-source lumineuse

Question 4

De quoi sont composés les microscopes électroniques?

Answer 4

-source d’électrons
-faisceau d’électrons
-vide
-objet
-écran fluorescent
-(oeil)

Question 5

Qu’est-ce que et quelle est la limite de résolution, ou d AB?

Answer 5

La limite de résolution est la distance minimale séparant deux points A et B vus de façon distinctive sur une même préparation

Question 6

Pouvoir résolution ou PR: définition

Answer 6

Plus un microscope possède une limite de résolution petite plus son pouvoir de résolution est grand (formule)

Question 7

Comment peut-on calculer PR (pouvoir de résolution)?

Answer 7

PR= 1/ d AB
ainsi
d AB= 1/PR
= 0,6 lmd/ n sin a
= 0,6 lmd/ON
ON: Ouverture Numérique
Lamda: longueur d’onde du faisceau de particules
n: indice de refraction milieu
a= demi-angle d’ouverture de l’objectif

Question 8

Quel est le pouvoir de résolution théorique d’un microscope photonique? et électronique?

Answer 8

Photonique: 0,2 micrometres
électronique: x nm

Question 9

Quelles est l’épaisseur souhaitée en MP (microscopie photonique)? et ME?

Answer 9

-MP:épaisseur < 5 microm
-ME:épaisseur <100 nm

Question 10

Pourquoi fixe-t-on les constituants cellulaires et faisons durcir le tissu l’incluant dans une résine?

Answer 10

Fixer revient à “immobiliser”, afin de pouvoir observer un tissu et son organisation, on doit faire des coupes très fines, ensuite pour que le contenu des cellules ne sorte pas, on les fixe et garde cette fixation grace à la résine.

Question 11

Quelles sont les 6 étapes pour préparer un objet et ensuite l’observer?

Answer 11

1) Fixation: immobilisation des structures cellulaires le plus rapidement possible par une fixation chimique (aldéhyde, tétroxyde osmium)–> crée des ponts
2) Lavage: élimination de l’exces de fixateur
3) Déshydratation: élimination de l’eau (alcool)
4 )Inclusion dans le milieu d’inclusion
–> paraffine MP
—>résine époxy ME
5) Durcissement du milieu et emprisonnement du matériel biologique
6) Coupe: comme l’objet a été solidifié il peut etre coupé
>microtome pour MP
>Ultramicrotome ME

Question 12

Comment sont les colorations “physique”?

Answer 12

utilisation des systèmes d’optique permettant d’augmenter les contrastes: ex contraste de phase

Question 13

Comment sont les colorations histologiques?

Answer 13

Utilisation de colorant se fixant dans un compartiment cellulaire

Question 14

Comment sont les colorations histocytochimiques?

Answer 14

Utilisation de colorations se fixant sur des fonctions chimiques spé.

Question 15

Comment peut-on localiser un composant cellulaire grâce à une molécule de fluorescence?

Answer 15

Avec des marquages
-immunocytochimiques (anticorps)
-avec une protéine fluorescente verte (GFP)–> protéine émet de la lumière (linterne)
-avec des Tracker–> molécules fluorescentes

Question 16

Definition de fluorescence

Answer 16

Molécule qui, après une excitation par une longueur d’onde spécifique, émet une longueur d’onde différente.

Question 17

Quels sont les principes de l’immunodetection?

Answer 17

1) Utilisation d’un premier anticorps pour détecter et visualiser une molécule, l’anticorps est spécifique de la molécule d’interet et se fixe dessus
2) Le second anticorps reconnait le premier anticorps est porteur de l’une molécule fluorescente
3) En visualisant la molécule fluorescente on localise la molécule cherchée

(schémas)
materiel bio <antigènes<anticorps1<anticorps2< molécule fluorescente

Question 18

Comment se fait le marquage avec la protéine fluorescente GFP?

Answer 18

C’est une molécule émettant de la lumière (linterne), le gène codant pour cette protéine est associé au gène de la molécule se la protéine recherchée, ce gène chimérique est injecté dans la cellule vivante et va être transcrit puis une protéine chimérique va être traduite (association de la molécule d’interêt et la GFP). La localisation de la molécule d’interêt à l’intérieur de la cellule correspondra à où GFP émet de la fluorescence.

Question 19

Comme dans la ME il n’y a pas de couleur, sur quoi joue-t-on?

Answer 19

Sur l’intensité des contrastes au niveau des molécules présentes sur la coupe, on utilise des contrastants (atomes de métaux lourds) opaques aux e- qui se déposent à la surface des coupes du matériel bio.

Question 20

Pourquoi la ME est une enceinte à vide?

Answer 20

Car les e- ont besoin d’un vide absolu pour se déplacer. On a l’architecture d’une cellule grace à la ME.

Question 21

Quels sont les principes et contraintes de la microscopie électronique à balayage?

Answer 21

1. Fixation (chimique)
2. Dépot d’une fine couche de métal épousant la surface de l’objet
   3.Elimination de l’objet biologique
   4.Introduction de la réplique dans l’enceinte du microscope

Les e- ne traversent pas la couche métallique mais rebondissent dessus, ils sont récupérés par des capteurs qui analysent leur trajectoire et reconstituent l’image 3D de la réplique.

Question 22

Comment connaitre le diamètre du champ observé?

Answer 22

D= I / G

I: diamètre de l’enceinte
G: grossisemment de l’objectif

Question 23

Quelles est la particularité de l’objectif 100?

Answer 23

C’est un objectif à immersion, il faut lui mettre de l’huile avant de règler l’objectif

Question 24

DEF: profondeur du champ

Answer 24

épaisseur qu’on peut voir nette

Question 25

Descriptif d’un MP à transmission

Answer 25

1 : tube binoculaire
2 : vis de blocage du tube binoculaire 3 : potence du statif
4 : sur platine (ou chariot) guide objet
5 : vis macrométrique de mise au point
6 : vis micrométrique de mise au point
7 : vis de déplacement bidirectionnel du chariot guide objet
8 : pied du statif
9 : vis du centrage du collecteur
10 : vis de réglage de hauteur du condenseur
11 : platine porte-objet
12 : chevalet de fixation de lame de porte-objet
13 : revolver porte-objectif.

Question 26

Que fait-on toujours lors d’une observation?

Answer 26

On recouvre l’objet biologique d’une lamelle et l’observe en milieu humide.

Question 27

Comment évolue la luminosité?

Answer 27

Elle diminue avec l’agrandissement de l’objectif

Question 28

Par où se fait la croissance des plantes ?

Answer 28

La croissance est dite subterminale. C’est donc au niveau de l’apex qu’il faut chercher les sites responsables de la rhizogenèse (du grec rhiza =racine, génèse/fabrication des racines).

Question 29

Organisation racine

Answer 29

La zone de divisions séparée en trois parties :
-La coiffe : c’est le manchon cellulaire à l’extrémité de la racine (position terminale) qui a pour but de protéger le méristème racinaire. Les cellules les plus externes de cette coiffe sécrètent en abondance un mucilage avant de se détacher au contact du sol à cause des dommages mécaniques provoqués par le contact de la racine en croissance avec les particules du sol. La coiffe nécessite donc une régénération permanente de ses cellules, réalisée à partir de la zone d’entretien de la coiffe, du côté racinaire.
-Le centre quiescent : situé juste au-dessous de la coiffe, est la population cellulaire «souche». ll donne naissance, vers la partie distale (partie la plus éloignée du centre de la racine), aux cellules de la coiffe et, vers la partie proximale (partie la plus proche du centre de la racine), aux cellules méristématiques
-Le méristème racinaire : il contient des cellules non différenciées, présentant un gros noyau, sans vacuoles et assurant la production de nouvelles cellules par division (mitose). Il est divisé en trois méristèmes spécifiques.
-La zone d’élongation située à l’arrière du méristème, où les cellules nouvellement formées vont pouvoir s’allonger et amorcer une différenciation pour donner tous les tissus cités précédemment.
-La zone de différenciation où les différents tissus constitutifs de la racine se mettent en place et prennent leur fonction. Les cellules jusqu’alors indifférenciées, se différencient en acquérant un caractère spécifique. Le début de cette zone de différenciation sera occupé par la zone pilifère (riche en poils absorbants) qui finira par disparaître au fur et à mesure de l’épaississement du rhizoderme.

Question 30

Que met en évidence “APS”?

Answer 30

Elle met en évidence les polysaccharides, il colore en rouge fuchsia les aldéhydes (sucres ou polysaccharides) de la membrane plasmique ou des acides nucléiques.
–> glycogène–> paroi

Question 31

Que met en évidence “ feulgen”?

Answer 31

La réaction de Feulgen est de loin la méthode cytochimique de coloration de l’ADN la plus largement utilisée
Réagit avec F(x) aldéhydes–> acides nucléiques

Question 32

Types de témoins, et fonction

Answer 32

-Temoin de coloration: s’assurer que la coloration marche
-Temoin négatif: on enlève le substrat de la réaction

Question 33

Quel est l’intérêt de l’utilisation du méthylcellulose chez les paramécies ?

Answer 33

Le méthylcellulose est un milieu visqueux qui permet de ralentir la nage des paramécies afin de faciliter leur observation et visualiser le battement ciliaire.

Question 34

De quoi est composé le plan d’organisation du nématode Caenorhabditis elegans ?

Answer 34

C. elegans se présente sous la forme d’un petit corps cylindrique de 1 mm de long et de 70-80 µm de diamètre (stade adulte).
Son corps non segmenté est revêtu d’une épaisse cuticule.
Le plan d’organisation anatomique est simple. Il est constitué :
- Un premier tube comprenant la cuticule, l’hypoderme, les muscles et les cellules
nerveuses.
- Un second tube est constitué du tube digestif.
- Ces deux tubes sont séparés par une vaste cavité viscérale où l’on trouve les gonades.

Question 35

Que provoque le chlorure de potassium chez la paramécie?

Answer 35

Cela désorganise le battement ciliaire.

Question 36

Concernant les nématodes hermaphrodites… Qu’est vrai
- Une copulation est nécessaire pour avoir des embryons
- Ils possèdent deux gonades : une produisant des spermatozoïdes, l’autre des ovocytes
- Il y a d’abord production de spermatozoïdes puis d’ovules
- Ils produisent en continu spermatozoïdes et ovules

Answer 36

Il y a d’abord production de spermatozoïdes puis d’ovules

Question 37

4. Pourquoi est-il important d’incuber les paramécies quelques minutes avec la solution d’encre de chine diluée avant de les observer ?

Answer 37

Cela permet de laisser le temps aux paramécies d’ingurgiter l’encre de chine qui se retrouve ensuite enfermée dans les vacuoles de phagocytose

Question 38

Dans une population de C. elegans, les males représentent :

Answer 38

moins de 1% de la population

Question 39

La levure est:
La paramécie
est:

Answer 39

La levure est un eucaryote unicellulaire qui
possède une paroi externe
La paramécie est un eucaryote unicellulaire
qui est mobile grâce à des cils

Question 40

Que fait le chlorure de Nickel?

Answer 40

Il arrête le battement ciliaire (paramécie)

Question 41

De quoi sont composées les cellules eucaryotes végétales?

Answer 41

-noyau
-vacuole
-cytoplasme
-paroi pectocellulique

Question 42

Donner la formule mathématique de la limite de résolution d’un microscope photonique (tous les termes cités doivent être expliqués).

Answer 42

d AB = 1 0.6 lamd
— =——-
PR n sin a
l = longueur d’onde du faisceau de particules
n = indice de réfraction du milieu
a = demi angle d’ouverture de l’objectif

Question 43

Lors d’une observation avec un microscope photonique si l’on veut augmenter le pouvoir
de résolution de ce microscope faut-il augmenter ou baisser la longueur d’onde ?

Answer 43

Donc pour augmenter le PR il faut baisser la longueur d’onde l.

Question 44

Qu’est-ce qu’un témoin négatif?

Answer 44

Négatif:on détruit spécifiquement par une enzyme la molécule que l’on veut visualiser

ici une amylase ou autre enzyme détruisant les sucres, puis on fait la manip attaque acide + Schiff
SImple:

Question 45

Qu’est-ce que le Nostoc?

Answer 45

Une cellule procaryote (cyanobactérie), nous l’avons regardé avec le bleu cotton et bande adhésive