Observations Microscopiques Des Microorganismes

Question 1

Quelle est l’équation de la limite de résolution?

Answer 1

d = λ / 2n sin θ

Question 2

C’est quoi la limite de résolution?

Answer 2

• La distance à partir duquel deux points sont séparés et capable de les distinguer
• 0,1mm à l’œil nu
• 0,2 μm au microscope

Question 3

Qu’est-ce l’ouverture numérique?

Answer 3

• n sin θ
• indiqué sur l’objectif
• valeur indiquant le pouvoir de résolution
• haute N.A. = meilleure résolution (image + nette)

Question 4

Définition de l’indice de réfraction

Answer 4

• n = la capacité d’une substance (air,verre,huile) à ralentir/ dévier un rayon lumineux
  -la vitesse de la lumières diffèrent avec le changement de milieu transparent
• verre vers air : rayon s’éloigne de la normale
• verre vers huile: aucun changement, car même indice de réfraction (à peu près)

Question 5

Qu’est-ce la distance de travail?

Answer 5

Distance entre la surface de l’objectif et la surface de la lame

Question 6

Une baisse de distance de travail amène à…

Answer 6

Une augmentation de la résolution

Question 7

Est-il préférable d’avoir un petit angle ou grand angle pour la résolution?

Answer 7

• mieux un grand angle: sépare mieux les rayons, objets paraissent mieux séparés

Question 8

Une basse ou haute longueur d’onde augmente la résolution?

Answer 8

• faible longueur d’onde

Question 9

Quels sont les 2 facteurs limitants d’un microscope

Answer 9

• limite de résolution
• le contraste

Question 10

Qu’est-ce que le contraste?

Answer 10

-la capacité de distinguer une structure de son environnement

Question 11

Quelles sont les microscopes optiques?

Answer 11

• fond clair, fond noir, contraste de phase, contraste d’interférence différentielle, fluorescence, confocal à balayage laser

Question 12

Quelles sont les limitations du microscope à fond clair?

Answer 12

• Faible contraste : coloration nécessaire
• Faible résolution

Question 13

Quel est l’avantage du microscope à fond clair

Answer 13

• grande versatilité

Question 14

Le bleu de méthylène est quel type de coloration?

Answer 14

Simple: interaction spontanée entre microorganisme (-) et colorant (+)

Question 15

Quels sont les deux types de coloration différencielle

Answer 15

-Gram
- alcoolo-acido-résistance pour les mycobactéries

Question 16

Gram + retient quelle couleur?

Answer 16

Violet

Question 17

Gram - retient quelle couleur?

Answer 17

Rouge

Question 18

Les mycobactéries (paroi lipide d’acide mycolique) retiennent quel colorant?

Answer 18

Colorant carbol fuchsine

Question 19

Quelles sont les caractéristiques d’un microscope à fond noir?

Answer 19

• cellule vivante
• pas de fixation ni de coloration

Question 20

Quel est le principe du microscope à fond noir?

Answer 20

• seule la lumière réfléchie par l’échantillon forme une image
• les rayons non réfléchis par l’échantillon sont déviés et n’entrent pas dans l’objectif
• ajout d’un écran sous le condensateur

Question 21

Quelles sont les caractéristiques d’un microscope à contraste de phase?

Answer 21

• cellule vivante
• sans fixation
• sans coloration
• • récent que microscope à fond noir
• image sombre sur fond clair avec filtre coloré

Question 22

Quel est le principe d’un microscope à contraste de phase?

Answer 22

• différence de phase entre les différentes ondes lumineuses qui traversent l’échantillon pour générer une image. Tire parti des petites différences d’indice de réfraction dans différentes parties de la cellule et tissus
• rayon de l’environnement: non dévié
• rayon de la bactérie: dévié
• partie sombre: portions denses de l’échantillon (cellule)
• partie claire: portions moins denses de l’échantillon (environnement)

Question 23

Quelles sont les deux instruments ajouté aux microscope à contraste de phase?

Answer 23

• anneau: concentre la lumière sur l’échantillon
• lame: avance la lumière déviée, dirige lumière non déviée

Question 24

Quelles sont les caractéristiques du microscope à contraste d’interférence différentielle?

Answer 24

• cellule vivante
• sans fixation ni coloration
• effet 3D
• $$$

Question 25

Quelles sont les caractéristiques du microscope à fluorescence?

Answer 25

- lumière vers le haut - utilisation de fluorochromes

Question 26

Quel est le principe d'un microscope à fluorescence?

Answer 26

- présence de molécules excitatrices: absorbe une énergie radiante et libère cette énergie sous forme de lumière (énergie émise > énergie absorbée)

Question 27

Quelle est la limite d'un microscope à fluorescence?

Answer 27

- les cellules peuvent être colorées de 2 couleurs dépendant si elles sont vivantes ou mortes - les cellules qui présentent les 2 couleurs sont vivantes ou mortes?

Question 28

Quelles sont les caractéristiques d'un microscope électronique?

Answer 28

- meilleure résolution = détail plus fin - échantillon non vivant - λ électron 1000x + courte que la lumière - observer les virus - L.R. : 0,05nm - coupe très fine

Question 29

Quelles sont les 4 techniques de préparation de coloration pour les microscopes électroniques?

Answer 29

- technique d'ombrage - coloration négative - cryodécapage - immuno-localisation cellulaire

Question 30

Décrire la technique d'ombrage

Answer 30

- vaporisation d'un métal lourd à 45° sur l'échantillon: ombre - côté métal: sombre - côté non métal: claire

Question 31

Décrire la coloration négative

Answer 31

Échantillon étalée dans l'acide phosphotungstique Présence de creux

Question 32

Décrire le cryodécapage

Answer 32

- congélation brève et rapide: casse au milieu des membranes internes (ligne faible) - surfaces exposées enduit d'un métal lourd - vue très détaillée de la structure intracellulaire