P2 Flashcards
O que é plasmídeo? Qual é a importância dele na recombinação de RNA?
Local da bactéria onde ocorre a recombinação. É escolhido este local por apresentar DNA, diferente do Cromossomo central (DNA circular), está em grande quantidade dentro da célula.
Qual é a principal e primeira proteína produzida com recombinação genética? Por que foi importante a obtenção dessa proteína?
Insulina. Foi importante pois para a extração dessa proteína, anteriormente envolvia o sacrifício de animais, especialmente suínos.
Explique como a PCR simula o funcionamento normal da célula no quesito duplicação do DNA.
A duplicação dentro das células ocorrem da seguinte maneira:
Como a molécula de DNA se abre, necessita da DNA polimerase criando um filamento 5’ p/ 3’ continuamente no filamento de direção 3’ 5’ e descontinuamente de 5’ 3’ (formando fragmentos de Okazaki). Mas para iniciar necessita de primer (sequência de RNA de 10 a 15 nucleotídeos - esse é formado por RNA polimerase). Ela é semi-conservativa pois conserva um filamento mãe em cada DNA formado.
Da mesma forma o PCR irá criar o finalmento por meio da utilização inicialmente de um primer e em seguida a DNA polimerase. No entanto a enzima DNA polimerase utilizada é a DNA Taq polimerase retirada da bactéria Thermus aquaticos pois estes são encontrados em lava vulcânica e aquentam altas temperaturas.
Em relação ao cDNA: Qual a tecnologia para sua obtenção e qual sua aplicação?
Objetivo: tecnologia recombinante teve objetivo inicial para fazer clonagem de genes de interesse. O problema foi tentar fazer a bactéria transcrever e traduzir para formar a proteína, pois a utilização do gene eucarioto acabou falhando porque necessita de splicing para formar a proteína correta, mas o procarioto não faz splicing. Foi necessário a utilização do mRNA que foi transcrito por meio da transcriptase reversa (vírus) formando um único filamento de DNA que depois tem o outro filamento formado por DNA polimerase, formando cDNA (DNA complementar). Este pode ser inserido na bactéria para realizar a técnica de DNA recombinante.
Diferencie clonagem de DNA em bactéria de clonagem em PCR.
PCR pode clonar quantidades grandes de DNA, até cromossomos inteiros, em bactéria pode não comportar e perder o material genético. Precisa ser material pequeno para bactéria. DNA tem custo mais baixo porque a célula contém o material necessário para realização da transcrição/tradução, basta manter a bactéria viva, enquanto para o PCR necessita comprar.
Quais são as aplicações práticas para a clonagem em bactérias?
Conseguir amplificar DNA (duplicar/clonar). Desvantagem (uso no máximo 5 genes). Se deseja utilizar somente a duplicação pode utilizar gene normal, se quiser formar proteínas, utilizar cDNA. Vantagem é reprodução/multiplicação acelerada.
Quais as aplicações práticas para aplicação clonagem em termociclador.
Amplificação/clonagem de DNA/gene/cromossomo. No termociclador da pra fazer material genético em grande quantidade. Termociclador não é utilizado para formar proteína, somente gene/cromossomo. A Taq polimerase é uma DNA utlizada de uma batéria isolada de lava de vulcão por suportar altas temperaturas.
No que constitui as vacinas de RNA?
(CORRIGIR)
Vacina mais utilizada. Precisa ser refrigerada para não degradar o RNA. Maior eficiência, traduzido só ao entrar.
Vacina covid: mRNA traduzido, forma proteína da capsula,
No que constitui vacinas de DNA?
(COMPLEMENTAR)
Não precisa refrigerar, DNA demora para degradar, necessita de estabilizante, custo
Por que vacinas de RNA são consideradas mais seguras que vacinas de DNA?
Porque RNA entra no citoplasma, tem que ser transcrito e traduzido, enquanto o DNA entra direto no nucleo, estando exposto ao nosso DNA.
Explique o motivo da utilzação da transcriptase reversa para a recombinação genética:
A primeira tentativa da multiplicação de insulina não obteve êxito pois pegaram um gene, este deveria passar por splicing, mas não passou pois a célula procariota não faz splicing, logo a proteína formada não era a insulina. Para corrigir o problema, isolaram o RNA mensageiro ao invés do gene, pois já passou por splicing. Assim, o RNA é transformado em DNA pela transcriptase reversa que gera um filamento de DNA e em sequência é formado um filamento complementar por uma DNA polimerase formando o cDNA (DNA complementar) que ao passar por transcrição e tradução formou com êxito a proteína desejada.
O que é o cDNA?
Duplo filamento de DNA formado por mRNA transcrito por transcriptase reversa.
Como é adicionado o cDNA no plasmídeo?
É utilizado a enzima de restrição para quebrar a ligação fosfodiester do cDNA e do DNA do plasmídeo, ligando ambos um ao outro.
O que é PCR?
Equipamento responsável por duplicar/produzir em grande quantidade de material genético (DNA). É feito a extração do DNA puro das células e duplicação para aumentar a quantidade.
O que é a sigla PCR?
Polymerase Chain Reaction
Qual é a função da vacina
Fazer com que o corpo reconheça os antígenos (vírus) fazendo o corpo produzir anticorpo contra o antígeno.
Vacina convencional
Utiliza virus atenuado (reduz a capacidade de um virus em inserir o material genético na célula). Célula dentrítica reconhece e inicia a ativação de genes para produzir anticorpos.
Defina infecção viral
Vírus liberar material genético na célula
Processos de atenuação
(COMPLEMENTAR)
- Deixa vírus à baixas temperaturas para desacelerar o seu processo de infecção
- Fazer ele tentar injetar material genético diversas vezes até perder sua capacidade de injetar material genético (atenuar)
Clonagem
Utilizado para fazer milhares de cópias de um gene ou fragmento de DNA.
Plasmídeos
São moléculas extracromossômicas circulares de DNA bacteriano, estão em grande quantidade e tem duplicação independente.
Disserte sobre a estrutura de um vírus e sobre o ciclo lisogênico e lítico feito por eles na célula hospedeira.
Vírus é uma partícula proteíca que carrega material genético (não é célula!). No vírus o material genético pode ser tanto RNA (retrovírus) ou DNA (adenovírus).
- Como ele ta estruturado
- Não tem núcleo
- Transcriptase reversa enzima
- Nem todos tem capsídeo
- Proteínas do envelope
- Finalidade: formar outros vírus, jogando material genético em célula hospedeira
Ciclo lisogênico (adenovírus): vai ser acoplado ao DNA da célula. Se for eucarioto vai para núcleo, procarioto, citoplasma. Se for retrovírus, RNA precisa ser transformado em DNA por meio da transcriptase reversa.
Ciclo lítico(adenovírus ou retrovírus): forma novas células imediatamente, mata célula hospedeira, células hospedeiras são específicas pra cada vírus. Coloca material genético (RNA ou DNA) que passa a ser duplicado, transcritos e traduzidos para formação de capsídeos, cápsulas. Se for retrovírus, RNA precisa ser transformado em DNA com transcriptase reversa que estava presente no vírus).
Diferencie vírus de bactérias quanto a estrutura.
Bactérias são células procarióticas que são envoltas por membrana celular, carregam material genético. Vírus são partículas que carregam material genético, são seres não vivos. O vírus apresenta seu material genético envolto por um um capsídeo formado por proteínas e em alguns casos os vírus possuem um envelope ao seu redor. As proteínas presentes no envelope possuem a função de reconhecer a membrana que irá infectar. Caso o material genético seja um DNA, este é chamado de adenovírus, se RNA, retrovírus. Bactérias, diferente dos vírus, apresentam membrana plasmática, DNA e RNA(ambos, não um ou o outro), geração de ATP, ribossomos, atividade metabólica, citoplasma e faz divisão celular.
Transcriptase reversa
Enzima presente em um retrovírus, é liberado na infecção de uma célula eucarionte, a procarionte oferece o filamento de RNA que é lido pela trans. reversa, forma um filamento de DNA.
