PCR

Question 1

Oligos en PCR

Answer 1

Porciones específicas que van a delimitar un fragmento en la cadena

Question 2

Taq Polimerasa en PCR

Answer 2

Necesita cloruro de magnesio para catalizar la reacción (proporcionado por Buffer).
Es una enzima de una bacteria extremófila que puede poner nucleótidos.

Question 3

dNTPs en PCR

Answer 3

Nucleótidos sueltos para que Polimerasa los pueda hibridar en la cadena.
Se encuentran trifosfatados para que sean estables.
Concentración: 50-200mM para 6.5-25 mg de ADN.

Question 4

Buffer en PCR

Answer 4

Agrega elementos y compuestos para estabilizar el ambiente y desnaturalizar la cadena

Question 5

Tipos de PCR

Answer 5

PCR convencional
PCR cualitativo
PCR semi cualitativo
PCR cuantitativo o qPCR
PCR múltiple

Question 6

PCR convencional

Answer 6

Amplificación de región genética específica.
Se evalúa en gel de agarosa.

Question 7

PCR cualitativo

Answer 7

Permite identificar presencia o ausencia de un fragmento específico.
Diagnóstico de enfermedades infecciosas.

Question 8

PCR semi cuantitativo

Answer 8

Permite conocer los niveles de expresión de un gen.
Se usa en ARNm o biopsias.

Question 9

PCR cuantitativo

Answer 9

Permite medir la cantidad de microorganismos o ARNm de un gen en particular.
Como referencia una curva con muestras con concentraciones conocidas.
PCR tiempo real.

Question 10

PCR múltiple

Answer 10

Analiza varias regiones génicas en una misma reacción PCR.
Cada región cuenta con sus pares de oligos específicos.

Question 11

Basics de PCR

Answer 11

Va de 5’ a 3’
Etapas: Desnaturalización, replicación, elongación.
Componentes: ADN, primers, DNA Pol (Taq Pol), dNTPs, magnesio.

Question 12

Amplificación de PCR***

Answer 12

Tiene las tres etapas; desnaturalización, alineamiento y extensión.
La desnaturalización se realiza a 95ºC por 5 minutos.
Alineación 50-60º por 30-40s.
En la extensión la Taq polimerasa va a colocar nucleótidos a 72º por 30s.
Se repite 20-40 veces.
Se almacena a 4ºC

Question 13

PCR tiempo real

Answer 13

Mismos pasos de PCR
El resultado se va mostrando en tiempo real.
Se agrega fluorescencia.
Utiliza sonda SYBR green y TaqMan.

Question 14

SYBR green

Answer 14

Se une a TODAS las regiones que tengan doble cadena. Mide la cantidad de ADN doble cadena.

Question 15

TaqMan

Answer 15

Se une a regiones con nucleótido específico durante el alineamiento.